HPLC法同时测定旱芹中木犀草素和旱芹素的含量

建立HPLC法同时测定旱芹中木犀草素和旱芹素含量的方法。采用C1(8 150 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为乙腈∶0.01 mol/L醋酸铵(pH=4.8)=40∶60,等强度洗脱,检测波长330 nm,柱温25℃,流速1.0 mL/min。木犀草素和旱芹素的质量浓度分别在0.93μg/mL~4.94μg/mL(r=0.999 1)及1.03μg/mL~5.06μg/mL(r=0.999 4)范围内与峰面积呈现良好的线性关系,平均加样回收率依次为99.7%(RSD为2.4%),99.0%(RSD为1.8%)。     

木犀草素配合物的制备表征及抑制黄嘌呤氧化酶的研究

本文运用配位效应将木犀草素与金属离子Zn~(2+)和Mn~(2+)反应生成了木犀草素配合物,采用了红外、紫外、热重及元素分析对配合物进行了结构表征,同时研究了对黄嘌呤氧化酶的抑制作用,比较了木犀草素及其配合物抑制能力的大小,确定了对黄嘌呤氧化酶的抑制作用类型。结果表明,木犀草素与金属离子Zn~(2+)和Mn~(2+)发生了配位反应,形成了稳定的配合物,配合位点位于A环的5-OH及C环的4-C=O处。相比于木犀草素,木犀草素配合物对黄嘌呤氧化酶表现出更好的抑制效果,通过固定黄嘌呤底物浓度为0.6mmol/L,酶浓度对酶活力作图可知,木犀草素及其配合物对黄嘌呤氧化酶的抑制类型均属于可逆抑制,通过固定黄嘌呤氧化酶浓度为10μg/mL,用Lineweaver-Burk双倒数作图,木犀草素及其配合物对黄嘌呤氧化酶的抑制类型表现为竞争性抑制。     

新型荧光探针的合成与苦杏仁中氰化物含量的检测

基于氰根离子化学传感器中配位作用型氰根离子传感器的设计机制,以联吡啶钌配合物为信号基团,2-羟基苯基咪唑为铜离子识别基团,设计合成了一种新型联吡啶钌配合物(RuL)。该配合物在HEPES缓冲溶液(20mmol/L,pH7.2)中键合Cu~(2+)后荧光淬灭。以RuL–Cu~(2+)复合物为探针分子,利用氰根离子可与铜离子形成稳定配合物的特点,夺取铜离子后会使联吡啶钌(Ⅱ)配合物溶液的发光增强,从而获得荧光增强型氰根离子荧光传感器。研究发现,该RuL–Cu~(2+)复合物探针分子可以在近纯水溶液中对氰离子进行特异性荧光识别。其检测限为0.18μmol/L,远低于世界卫生组织规定的饮用水中氰化物的最大含量(1.9μmol/L)。而且将该方法应用到苦杏仁样品中氢氰酸含量的检测准确度与国标法基本一致。     

HPLC法测定紫花地丁中香豆素和黄酮的量

以紫花地丁为材料,建立了同时测定紫花地丁中6种香豆素和黄酮含量的检测方法。结果表明:高效液相色谱(HPLC)选用色谱柱Inertsil ODS-3 C18柱(5μm, 250 mm×4.6 mm);流动相为A (乙腈)和B (15 mmol/L醋酸铵溶液)。梯度洗脱方法, 0～10 min,流动相A 10%～25%; 10～20 min,流动相A 25%～60%,紫外检测波长290 nm,柱温30℃,流速1.0 mL/min。6个化合物均在15 min内实现基线分离;线性关系良好(R20.998);添加高、中、低浓度的对照品,6个化合物的平均回收率在91.18%～99.92%之间,相对标准偏差均在1.06%～2.14%之间(N=6)。该方法简便、准确、重复性好。对紫花地丁全株和花器官中6种成分含量测定结果表明:全株中秦皮甲素、秦皮乙素、芦丁、木犀草苷、木犀草素、柚皮素的含量分别为2 406, 2 961, 887, 1 371, 382和165 mg/kg,花器官中含量分别为4 345, 5 665, 587, 871,582和465 mg/kg。     

HPLC测定半枝莲中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量

建立半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量同时测定的HPLC方法。色谱条件为DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,检测波长为335 nm,流动相为乙腈(A)-1%冰醋酸水溶液(B)进行梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃。野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素浓度分别在2.0~200、0.5~50、0.5~50、0.5~50μg/m L范围内与峰面积积分值线性关系良好。在精密度实验、稳定性实验、重复性实验中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素峰面积的相对标准偏差(RSD)2.0%;野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的加样回收率范围及平均值和RSD分别为97.73%~101.7%、99.72%、1.36%(n=9),97.78%~102.8%、99.53%、1.99%(n=9),97.40%~102.4%、99.39%、1.84%(n=9)和97.80%~102.0%、99.24%、1.49%(n=9)。所测12份不同产地半枝莲药材中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量范围分别为2.41~7.08、0.26~0.56、0.31~0.90、0.28~0.95 mg/g。本方法具有良好的专属性和重现性,加样回收率实验符合要求,能准确、稳定地对半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量进行同时定量测定。     

金银花叶有效成分的抗氧化活性研究

建立高效液相转换波长法,测定金银花叶粗分物中绿原酸、木犀草素和木犀草苷的含量,绿原酸占水相原液的含量为2.05%,木犀草素、木犀草素在金银花叶粗提物EA相中的含量分别为1.12%、0.57%。以抗坏血酸(Vc)为阳性对照的,用DPPH?法、FRAP法、ORAC法三种体外抗氧化方法来测定和评价金银花叶有效成分的抗氧化作用。结果表明：金银花叶粗提物、粗分物、绿原酸.、木犀草素及木犀草苷均具有良好的抗氧化性,其中木犀草素的抗氧化能力最强,其IC50值为0.01764 mg/mL,还原能力1751.8±13.9 mmol/L,ORAC值23817.44 μmol Trolox/g。其次为粗分30%乙醇洗脱相,其IC50值为0.02548 mg/mL,还原能力933.8±11.6 mmol/L,ORAC值10557.97 μmol Trolox/g,且各物质随着抗氧化剂浓度及纯度的增加,抗氧化性逐渐增强。因此对金银花叶有效成分在抗氧化方面的应用具有广阔的开发利用前景,可作为新型的高效无毒的抗氧化剂。     

木犀草素对酪氨酸酶活性抑制及构象诱导作用

在37℃、pH 6.8的磷酸盐(100 mmol/L)缓冲体系中,采用酶抑制动力学方法,研究了木犀草素对酪氨酸酶的抑制作用、抑制类型和抑制动力学常数,并探讨了木犀草素对酪氨酸酶表面疏水性和二级结构的影响。结果表明,木犀草素是一种可逆的非竞争型酪氨酸酶抑制剂(半抑制率IC50为55.35±1.51μg/m,抑制常数Ki为63.57±2.12μg/mL);失活动力学时间进程分析表明木犀草素能快速与酪氨酸酶发生作用并迅速降低酶的活性;荧光光谱分析显示木犀草素能显著增强酪氨酸酶的表面疏水性;圆二色谱分析表明木犀草素诱导酪氨酸酶的构象伸展和解折叠,随着木犀草素浓度的增加,α-螺旋含量由31.3%逐渐增加到41.6%,由此可见木犀草素能够诱导酪氨酸酶的构象发生部分改变,使酶结构变化而不利于其形成活性中心,进而降低酪氨酸酶的活力。     

离子液体修饰玻碳电极测定金银花中的总黄酮

用1- 丁基-3- 甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIM]PF6)疏水性离子液体作修饰剂制作[BMIM]PF6- 修饰玻碳电极。在0.2mol/L 磷酸盐缓冲液(pH7.0)中,运用差示脉冲溶出伏安法(DPSV)研究木犀草素在修饰电极上的电化学行为,建立测定金银花中总黄酮含量的新方法。研究表明,该修饰电极降低了木犀草素的氧化还原峰电位,增大了其氧化还原反应的峰电流。木犀草素氧化峰电流与其浓度在1.0 × 10-10～1.6 × 10-8mol/L 范围内呈良好的线性关系,检出限达到3.2 × 10-11mol/L,回收率为98.7%～103.6%。该法操作简单、快速、灵敏、准确,可用于金银花中总黄酮的测定。     

HPLC法同时检测5种龙胆草黄酮类物质

比较不同来源龙胆草提取物对芦丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚、异鼠李素5种黄酮物质的高效液相色谱法检测及龙胆草来源对其黄酮物质含量的影响。试验采用REPROSIL-PUR BASIC C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A相为0.30%乙酸水溶液;流动相B相为85%甲醇水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,VWD检测波长283 nm;柱温40℃。检测方法显示,5种黄酮物质的检测线性范围为0.02~200 mg/L;检出限(S/N=3)在0.003~0.050mg/kg之间,加标回收率(N=6)在86.03%~105.39%之间,检测方法灵敏有效。检测结果表明,不同来源龙胆草提取物得到的龙胆草提取物中芦丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚、异鼠李素5种龙胆草提取物黄酮物质的总含量以内蒙古呼伦贝尔产龙胆草提取物最高。     

钼酸铵比色法测定蔗汁中磷酸盐含量试验方法的改进

采用钼酸铵比色法测定蔗汁中磷酸盐含量。考察检测波长、显色时间、硫酸溶液、钼酸铵溶液和氯化亚锡溶液添加量对测定结果的影响。研究结果表明:检测波长为660 nm,硫酸溶液(6.25 mol/L)、钼酸铵溶液(25 g/L)和氯化亚锡溶液(50 g/L)的加入量分别为0.5 mL,2.0 mL和15滴;显色时间5 min。在此条件下,磷酸盐测定回归方程为A=0.17898C+0.00093,相关系数R=0.9998,线性关系良好。高、中和低三种样品浓度方法回收率和RSD都在合理范围内。该方法可用于蔗汁中磷酸盐含量测定。     

发光钨氧簇材料对水中重金属铬离子的荧光检测特性分析

本文利用Eu3+离子嵌入钨氧簇材料（化合物1）优异的发光特性，将其作为荧光探针材料，系统研究了其对水中重金属Cr3+离子的荧光检测性能。利用稳态瞬态荧光光谱仪对化合物1对水中Cr3+离子荧光检测的选择性、抗干扰能力、检出限等指标进行表征与分析。结果表明，化合物1的猝灭常数K_q为1.41×108 L·mol?1·s?1，远低于最大散射碰撞猝灭常数2.00×1010 L·mol?1·s?1，显示出化合物1对重金属Cr3+离子的快速灵敏的荧光猝灭响应。化合物1在同时含有不同阴、阳离子的待测液中的荧光检测结果显示其对水溶液中Cr3+离子的荧光检测具有较强的抗干扰能力。经计算获得化合物1对水溶液中Cr3+离子的检出限LOD为4.21×10?7 mol/L，显示出化合物1对水环境中的Cr3+离子具有很好的检出效果。本研究为水中重金属Cr3+离子的荧光检测提供一种灵敏、可靠的新方法。     

高效液相色谱-原子荧光光谱法测定水产品中 不同形态汞含量

目的建立高效液相色谱-原子荧光光谱法(high efficiency liquid chromatography-atomic fluorescence spectroscopy,HPLC-AFS)测定水产品中不同形态汞的含量,并以高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(high efficiency liquid chromatography-inductively coupled plasma-mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)进行方法确证。方法样品中的汞元素经5 mol/L HCl溶液提取,用6 mol/L Na OH溶液中和样品,L-半胱氨酸作为流动相中的汞配位剂,用于样品中不同形态汞的分离。结果汞化合物在质量浓度为1.0~20.0μg/L范围内,浓度和光谱峰面积间呈良好的线性关系。方法检出限分别为:无机汞0.009 mg/kg、甲基汞0.006 mg/kg和乙基汞0.009 mg/kg;加标回收率为81.0%~117.0%,相对标准偏差为3.59%~7.30%。用本方法对FAPAS质控样品蟹肉罐头T07231QC中的甲基汞进行测定,测定的结果值与参考值相符。结论该方法操作简单、灵敏度高、重现性好,适用于水产品中不同形态汞含量的测定及结果确证。     

循环伏安法检测辣椒中辣椒碱条件优化

为寻得一种快速准确测定辣椒碱的电化学新方法,本文选用改进电极的循环伏安法,以方法的检测限(LODs)、加标回收率和相对标准偏差(RSD)等衡量检测方法准确可行的指标,通过单因素及其优化试验探究辣椒碱的适宜测定条件,并以实际样品对其进行验证。结果表明,辣椒碱测定的适宜条件为:以β-环糊精修饰碳糊电极为工作电极,底液pH11、Britton-Robison缓冲体系、离子强度调节剂氯化钾(KCl)且强度为0.10 mol/L、电压扫描速率为100 mV/s、测量温度约20℃、在30 min内结果恒定(RSD ≤ 0.1%)且48 h内测定结果稳定性良好(RSD ≤ 1.8%)。此外,辣椒实样中维生素C、辣椒色素及可溶性糖等成分不对测定产生干扰。该法在适宜条件下对辣椒碱的检测限为0.3817 μg/mL(1.25 μmol/L),辣椒碱浓度(c_cp)从1.0×10-4~1.0 mmol/L内与峰电流(i_pk)呈极佳正相关线性:i_pk=3.1046c_cp+1.0025(R2=0.9946)。两个批次10个辣椒试样中辣椒碱含量的测定结果显示:所测得辣椒碱含量与用HPLC法和文献报道相吻合,加标回收率为100.70%~109.89%(平均103.71%),RSD为1.1%~4.9%,符合测定方法要求,且测定速度快,故可作为辣椒碱含量的定量分析方法。     

基于可视化环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物,建立可视化LAMP检测方法。优化的反应体系为：1.6 μmol/L内引物（FIP和BIP）,0.2 μmol/L外引物（F3和B3）,4.0 mmol/L MgSO4,1.0 mmol/L dNTPs,0.4 U/μL Bst 2.0 WarmStart? DNA聚合酶,120 μmol/L羟基萘酚蓝,扩增温度60 ℃,扩增时间60 min。在可视化LAMP体系中添加两条环引物（LF和LB）反应时间可缩短至20 min。该可视化LAMP反应60 min,其基因组灵敏度可以达到0.010 3 fg/μL,菌落灵敏度可以达到1.9 CFU/mL;利用46 株金黄色葡萄球菌和24 株非金黄色葡萄球菌证实该可视化LAMP具有良好的特异性和可靠性。本研究中建立的可视化LAMP可为金黄色葡萄球菌的快速检测提供一种新的技术。     

高效液相色谱法同时测定饮料和果冻中9种食品添加剂

目的建立高效液相色谱法同时检测饮料和果冻中9种食品添加剂的分析方法。方法样品用水提取后,加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液沉淀蛋白。使用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇和0.02 mol/L乙酸铵为流动相进行梯度洗脱,二极管阵列检测器变波长检测,外标法定量。结果9种食品添加剂在1.0~100μg/mL范围内有良好的线性,相关系数均在0.9995以上,检出限为0.020~0.431 mg/kg,定量限为0.068~1.312 mg/kg。在3个水平下加标回收率为80.4%~109.7%,相对标准偏差低于5%。结论该方法快速、准确、简便,适用于饮料及果冻中9种添加剂的检测需求。     

多重PCR法同时检测黄酒酒曲中多种生物胺产生菌

该研究建立了检测多种生物胺产生菌的多重聚合酶链反应（PCR）方法,首先检测了已报道的针对酪胺、腐胺产生菌和革兰氏阴性组胺产生菌的多对引物的特异性,针对革兰氏阴性菌的组氨酸脱羧酶基因的引物特异性差,重新设计了该引物,在此基础上,建立了可同时检测酪胺、腐胺和组胺产生菌的多重PCR方法,并优化了多重PCR反应条件为退火温度50 ℃,Mg2+浓度1.0 mmol/L,引物浓度配比为Tdc-F/R 0.2 μmol/L,Hdc1/2 0.4 μmol/L和Odc3/4 0.4 μmol/L。该方法特异性强,对酪胺、腐胺和组胺产生菌的灵敏度分别为1.2 ng/μL、1.5 ng/μL和1.5 ng/μL,可用于黄酒酒曲中生物胺产生菌的快速检测。     

高效液相色谱法测定乳与乳制品中的三聚氰胺

目的建立乳与乳制品中三聚氰胺的测定方法。方法样品用0.1 mol/L的盐酸提取,再用60 g/L的磺基水杨酸沉淀蛋白。缓冲液为10 mmol/L柠檬酸与10 mmol/L辛烷磺酸钠混合溶液,以缓冲液 乙腈(85 15,体积比)为流动相,使用Kromasil KR100-5C8柱,配备有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪在200~400 nm范围内对待测组分进行分离和测定。结果样品中三聚氰胺的添加回收率在80%~105%之间,相对标准偏差(RSD,n=6)小于5.24%,方法的定量限为1.0 mg/kg。结论该方法快速、准确,操作简便,能够满足乳与乳制品中三聚氰胺的分析要求。     

固相萃取-加压毛细管电色谱法测定酵素中敌螨普的残留

该研究建立了一种快速、高效的加压毛细管电色谱法检测酵素中敌螨普残留的分析方法,并依据所建立的方法研究不同酵素中敌螨普残留的情况。样品经体积分数20%的乙腈提取,PRiME HLB小柱净化后检测。以乙腈-15 mmol/L磷酸钾缓冲液（pH 4.7）(15∶85,V/V)为流动相,在电压强度+2 kV条件下,外标法峰面积定量。结果表明,敌螨普标准溶液在0.001～0.200μg/mL质量浓度范围内线性良好,相关系数R为0.999 1,检出限（LOD）为1.0μg/kg,定量限（LOQ）为3.0μg/kg,加标回收率达到85.6%～92.9%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为2.83%～5.12%。该方法具有前处理简单、快速的优点,适用于多种酵素中敌螨普残留分析。     

谷物食品中红木素和降红木素的快速筛查方法的建立

该实验建立了超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）快速筛查谷物食品中红木素和降红木素的分析方法。样品用5%醋酸乙腈溶液提取后,采用ZORBAX SB-C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸铵）为流动相,梯度洗脱,UPLC-Q-TOF/MS电喷雾正离子模式分析检测。以准分子离子峰的峰面积定量,以化合物的色谱保留时间、精确质量数及碎片离子的精确质量数定性。结果表明,红木素和降红木素分别在1.0～70 mg/kg、0.5～70 mg/kg范围内具有较好的线性关系,相关系数（R）均大于0.99,其定量限分别为1.0 mg/kg、0.5 mg/kg,样品的加标回收率在71.5%～110.6%范围内,相对标准偏差（RSD）均不高于10.2%。该方法简便、快速、准确性高,适用于批量谷物食品的快速筛查。