新型牛乳铁蛋白衍生肽KW-WK的生物活性及其稳定性

以牛乳铁蛋白肽片段LFcinB18-28为母肽,在保留其高电荷、强疏水性的基础上,依据对称结构设计理念,引入精氨酸和色氨酸替换,设计出新型抗菌肽KWRRWQWRRWK-NH2（KW-WK）。采用圆二色谱法、微量稀释法、噻唑蓝法等方法分析KW-WK的二级结构、抑菌活性、溶血活性、细胞毒性及稳定性。结果表明,KW-WK肽在模拟水环境中呈无规卷曲状,在模拟细胞膜环境中,则呈α-螺旋结构;KW-WK肽的抑菌性强,最小抑菌浓度为4～128?μmol/L;溶血率低,当肽浓度为256?μmol/L时,其溶血率小于5%;细胞毒性小;治疗指数为9.14,细胞选择性高;热稳定性好,100?℃处理1?h后仍保持较强的抑菌活性,酶稳定性较LFcinB18-28母肽有极大的提高。因此,新型抗菌肽KW-WK在食品、医药和畜牧等领域都显示出巨大的应用潜力。     

重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达

利用抗菌肽数据库和生物信息学分析工具,基于抗菌肽结构和功能的关系,设计了LFcin B衍生肽LFcin B-W4,10。为了验证衍生肽设计的合理性及表达产物功能正确性,将优化设计的基因序列经限制性内切酶酶切后,用T4 DNA连接酶连接到分泌型表达载体p PIC9K中,获得的重组表达载体p PIC9K-LFcinB-W 4,10经线性化后电转入毕赤酵母GS115中,经过G418浓度梯度筛选得到高拷贝转化子。经PCR鉴定,目的基因与酵母基因组稳定整合。阳性转化子经体积分数为2. 5%的甲醇诱导表达,表达产物用Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量约为3. 2 k Da的衍生肽LFcin B-W4,10。每24 h取样检测发酵上清液抑菌活性,结果表明,抗菌肽LFcin BW4,10对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,诱导表达96 h时其抑菌圈直径最大。实验为探究牛乳铁蛋白肽功能-结构关系奠定了基础。     

纳豆菌抗菌脂肽对副溶血弧菌的抑菌机理

目的:对纳豆菌抗菌脂肽抑制副溶血弧菌的抑菌机理进行探讨。方法:通过纳豆菌抗菌脂肽对副溶血弧菌生长曲线、细胞超微结构、细胞膜通透性、细胞DNA的作用、细胞蛋白的合成、细胞代谢的影响等方面的研究,探讨纳豆菌抗菌脂肽抑制副溶血弧菌的机理。结果:抗菌脂肽可以使副溶血弧菌细胞膜通透性增加,使得细胞内具有紫外吸收的大分子物质泄漏到细胞外;扫描电镜结果表明抗菌脂肽可以导致副溶血弧菌细胞壁破裂或形成孔洞;抗菌脂肽能够和副溶血弧菌DNA体外结合,导致DNA最大吸收峰发生了轻微的蓝移,且产生增色效应;SDS-PAGE分析表明抗菌脂肽对副溶血弧菌蛋白表达未见有明显影响;当抗菌脂肽的质量浓度达到0.6 MIC以上时,其对副溶血弧菌代谢活力的抑制作用显著。结论:纳豆菌抗菌脂肽可使副溶血弧菌的细胞膜通透性增加,或形成孔洞导致细胞内一些物质泄漏,使细胞生长受到抑制,进而导致死亡。     

自制壳寡糖抑菌性能及抑菌机理的初步研究

以大肠杆菌与金黄色葡萄球菌为研究对象,研究自制壳寡糖的抑菌活性。结果显示:自制壳寡糖具有较强的抑菌活性,而且随着浓度升高,抑菌活性不断增强,随着p H降低,抑菌活性也越来越强。在p H7.0时,低浓度壳寡糖不具有抑菌性能,而降低p H到5.0时,低浓度壳寡糖具有较强抑菌活性。在5g/L浓度、p H5.0条件下,壳寡糖可以保持很长时间的抑菌性能,24h内完全抑制细菌生长。      

生物抗菌肽抑菌机理及其在饮料工业中的应用

生物抗菌肽作为新兴的食品防腐剂,有其独特的特点和广泛的应用前景。本文对生物抗菌肽的分类、优点及其作用机理进行了介绍,对其在饮料工业中的应用进行了分析,并对其应用前景进行了展望。     

壳寡糖对腐败真菌的抑菌活性及其机理

为研究壳寡糖(COS)对黑曲霉、赭曲霉、杂色曲霉的抑菌活性及其机制,通过最低抑菌浓度(MIC)、菌丝生长抑制率和孢子萌发抑制率揭示COS对腐败真菌的抑菌活性,试验结果表明:COS能够显著抑制腐败真菌的生长,对供试菌的MIC范围在15.6～31.2 mg/mL。经COS处理后,腐败真菌细胞膜产生凹陷褶,细胞通透性增大,细胞成分大量泄漏,细胞膜受损;COS还剂量依赖性地减少几丁质的产生,增强几丁质酶活性,同时使可溶性蛋白质大量外渗。结论 :COS主要通过细胞壁、细胞膜和细胞代谢3个方面对腐败真菌的活性产生抑制作用,其可作为一种有效的抗真菌天然化合物广泛应用于食品工业中。     

抗菌肽的提取分离及抑菌机理研究进展

传统杀菌剂和抗生素的长期大量使用不但导致部分病原微生物和环境害虫产生耐药性,同时也存在着严重的环境和健康风险。因此继续寻找和开发不易产生耐药性的新型抗菌物质显得非常迫切,也具有重要意义,天然抗菌肽是一类小分子阳离子肽,是机体天然防御系统的重要组成部分。它们具有较宽的抗菌活性和不同于传统抗生素的作用机制。部分抗菌肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌、寄生虫、包膜病毒和癌细胞均不同程度的抑制和杀伤作用。抗菌肽在抑制病原微生物方面的特性使其有望成为传统杀菌剂和抗生素的替代物,在医疗工业和食品添加剂行业具有很好的应用前景。抗菌肽的分离纯化本文对抗菌肽研究进行了概述,其中重点分析了抗菌肽在提取分离及抑菌机理领域的研究进展。     

鸸鹋油的抑菌活性及机理研究

鸸鹋油被公认为具有抗菌性,但其抗菌机理尚不明确。通过探究鸸鹋油对食物中常见致病菌株(大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌)的影响,分析其对供试菌细胞膜和胞内物质的作用。结果表明:鸸鹋油对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌生长均具有较好的抑制作用,对大肠埃希菌最小抑菌浓度为0.006 25%,对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度为0.012 5%。通过测定鸸鹋油对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌表面电位和疏水性,以及对其中ATP酶、β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶的活性等的影响,进一步发现,鸸鹋油主要通过影响供试菌表面特性来抑制其生长,可以有效减弱细菌表面电荷负荷性,提高细菌表面疏水性,还可通过影响ATP酶活性改变其新陈代谢速率。鸸鹋油基本不影响大肠埃希菌蛋白和DNA合成能力、β-半乳糖苷酶以及碱性磷酸酶活性,但其能够降低金黄色葡萄球菌的相应大分子合成能力、β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶活性。     

抗菌肽的提取分离及抑菌机理研究进展

传统杀菌剂和抗生素的长期大量使用不但导致部分病原微生物和环境害虫产生耐药性,同时也存在着严重的环境和健康风险。因此继续寻找和开发不易产生耐药性的新型抗菌物质显得非常迫切,也具有重要意义,天然抗菌肽是一类小分子阳离子肽,是机体天然防御系统的重要组成部分。它们具有较宽的抗菌活性和不同于传统抗生素的作用机制。部分抗菌肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌、寄生虫、包膜病毒和癌细胞均不同程度的抑制和杀伤作用。抗菌肽在抑制病原微生物方面的特性使其有望成为传统杀菌剂和抗生素的替代物,在医疗工业和食品添加剂行业具有很好的应用前景。抗菌肽的分离纯化本文对抗菌肽研究进行了概述,其中重点分析了抗菌肽在提取分离及抑菌机理领域的研究进展。     

山苍子油的抑菌活性及机理研究

采用抑菌圈实验和试管二倍稀释法对山苍子油的抑菌活性、最低抑菌浓度(MIC)进行测定,研究了山苍子油对食品中常见的黑曲霉、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌机理。结果表明:山苍子油对4种受试菌的抑制效果差异较大,对黑曲霉的抑制作用很强(MIC值0.11μL/mL),对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑制作用较弱(MIC值均为0.47μL/mL);山苍子油对温度具有良好的稳定性,121℃,10min加热处理对精油的抑菌效果无明显影响;经山苍子油处理一段时间后的蛋白质利用率有所下降,细菌通透性明显增强,引起内含物渗漏。结果表明,山苍子油的抑菌机制可能在于破坏细菌细胞膜结构,导致细菌细胞变形和菌体蛋白质减少,直至菌体分解为碎片。      

酪蛋白源降血压肽稳定性及其抑制作用机理的研究

酪蛋白源降血压肽经体外胃肠道蛋白酶消化后,其ACE抑制活性仍能保持原来活性的94%.降血压肽与ACE作用前后,其ACE抑制活性和肽谱基本保持不变,证实了酶解乳蛋白源降血压肽是真正的抑制剂类型,不受ACE作用.采用抑制酶解动力学方法,初步探讨降血压肽的抑制作用机理,根据lineweaver-Burk方程,确定酶解酪蛋白源降血压肽是非竞争性抑制类型.     

牛乳铁蛋白抗菌活性及其影响因素的研究

乳铁蛋白具有广谱的抗菌性 ,它通过直接性的“铁剥夺”和间接性的“膜渗透”2种机制发挥抗菌作用。文中开展了牛乳铁蛋白抗菌活性的研究 ,研究表明 ,牛乳铁蛋白对大肠杆菌的最小抑菌浓度为 2mg/mL ,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为 1 6mg/mL。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白 (BSA)、尿素、硫酸铵在 0～ 1 0mg/mL ,乳糖、可溶性淀粉在 0～ 4mg/mL ,酪蛋白在 0～ 1 2mg/mL的质量浓度范围内 ,对牛乳铁蛋白的抗菌活性影响不大。当NaCl或KCl的浓度为2 5～ 1 0 0mmol/L ,MgCl2 或CaCl2 的浓度为 1 0～ 5 0mmol/L时 ,牛乳铁蛋白的抗菌活性就会大大降低。随着缓冲盐浓度和有机酸浓度 (2 5～ 1 0 0mmol/L)的增大 ,牛乳铁蛋白的抗菌活性呈下降趋势 ,且在微碱性pH环境下牛乳铁蛋白表现出较强的抗菌活力。     

重组牛乳铁蛋白N末端多肽对真空包装猪肉品质的影响

以Nisin和乳酸作为参照,采用本试验室获得的重组牛乳铁蛋白肽对生鲜猪肉进行保藏试验。生鲜猪肉浸沾并真空包装后置于4℃下存放,测定肉样的微生物数、抗氧化值(TBA)、pH值、肉的红度值(Huntera)及感官评价。结果显示,重组的牛乳铁蛋白肽保鲜效果优于Nisin组,接近乳酸组。其保鲜期可达到19d。     

乳铁蛋白与牛乳中其他蛋白质相互作用机制研究进展

牛乳蛋白分为酪蛋白和乳清蛋白,其中乳铁蛋白是乳清蛋白中的一种,具有多种生物学功能,被广泛应用于食品、医药、化妆品工业等领域。在牛乳中,乳铁蛋白带正电荷,会与一些带负电荷的蛋白质,如酪蛋白、骨桥蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白、免疫球蛋白等发生相互作用。这种相互作用影响着这些蛋白的生物化学功能或者分离制备特性,尤其是后者更是工业化生产中需要关注的问题。本文阐述了乳铁蛋白与牛乳中其他蛋白质之间的相互作用机制及其应用现状,对于开发乳铁蛋白的工业化制备方法、以及系统理解牛乳中各种活性蛋白间的协同生物作用等方面都具有重要意义,为乳铁蛋白生物学特性的深入研究和工业化生产技术开发提供一定依据。     

抗菌纤维的抗菌机理、加工方法与生态安全性分析

本文介绍了抗菌纤维的抗菌机理、加工方法,对抗菌纤维生态安全性进行分析,给出抗菌纤维开发的建议。     

乳铁蛋白的分离及纯化

乳铁蛋白 (Lactoferrin ,简称Lf)作为一种糖蛋白 ,主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中 ,如乳汁、眼泪等 ,乳汁尤其是初乳中Lf的含量很高[1] 。Lf是一种多功能蛋白质 ,不仅具有广谱的抗菌作用 ,而且还能够增强机体的抗病毒、抗感染、抗肿瘤的能力和免疫能力。因此 ,从来源丰富的牛初乳中提取出Lf,把它作为功能性成分应用于食品行业 ,具有广阔的应用和开发前景。本文通过盐析法和层析法从牛初乳中分离出乳铁蛋白 ,并应用酶联免疫法 (ELISA)检测不同分离纯化方法所获得的乳铁蛋白的含量 ,并用电泳分析其纯度。所获得的乳铁蛋白的分子质量为 780 0 0u ,其纯度大约为 92 %。     

牛乳中乳铁蛋白的分离纯化

采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法,对牛乳中的乳铁蛋白进行分离和纯化,并利用SDS-PAGE定性检测.结果表明:采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法可较好地分离提取出乳铁蛋白,分离出的乳铁蛋白显示为单一区带,每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.23 mg.纯度为95%.     

乳铁蛋白和乳铁素的抗菌活性比较

牛乳铁蛋白是从牛乳中提取出来的一种铁结合性糖蛋白，牛乳铁素是从牛乳铁蛋白N-端水解下来的25个氨摹酸残荩。它们具有多种乍物学功能，其中的广谱抗菌性尤为引人注目。本实验以牛初乳中提取的乳铁蛋白及其水解产物乳铁素为研究对象，选取大肠杆菌为实验菌株，进行铁饱和乳铁蛋白和缺铁性乳铁蛋白、乳铁素对大肠杆菌生长抑制的比较研究。研究结果表明：铁饱和乳铁蛋白、缺铁性乳铁蛋白和乳铁索的最小抑菌浓度分别为6mg／ml、3mg／ml和15μg／ml，乳铁素的最小杀菌浓度为30μg／ml。乳铁蛋白水解后，经纯化获得的乳铁素，其抗菌能力较缺铁性乳铁蛋白增加200倍，较铁饱和乳铁蛋白增加400倍。     

酸性蛋白酶制备花椒籽蛋白抗菌肽的研究

利用酸性蛋白酶酶解花椒籽蛋白制备抗菌肽,以底物质量浓度、酶与底物比、pH值、酶解温度、酶解时间为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Box-Behnken方法进行三因素三水平的试验设计,以对大肠杆菌的抑菌率为响应值,应用响应面法对花椒籽蛋白制备抗菌肽工艺进行优化。其最佳工艺条件为：底物质量浓度30 mg/mL、酶与底物比3.0%、酶解pH 4.0、酶解温度51.2 ℃、酶解时间4.7 h,此条件下酶解产生的抗菌肽复合物的水解度为9.05%,对大肠杆菌的抑菌率为56.98%。     

Kinetic Parameters for Denaturation of Bovine Milk Lactoferrin

Kinetic parameters for heat-induced denaturation of lactoferrin under different conditions were determined over a temperature range 72–85°C. Denaturation of lactoferrin could be described by first-order reaction kinetics. Lactoferrin is denatured more rapidly in its apo form than in the iron-saturated form. Both apolactoferrin and iron-saturated lactoferrin are more heat-sensitive when treated in milk than in phosphate buffer. Values of change in enthalpy of activation of lactoferrin denaturation are high which indicates that a large number of bonds are broken. The association of lactoferrin with β-lactoglobulin does not significantly influence the change in enthalpy of activation of lactoferrin denaturation.