超声波破碎法提取发酵性丝孢酵母胞内脂肪酶的条件优化

利用超声波对发酵性丝孢酵母(Trichosporon fermentans)进行细胞破碎,研究了输出功率、辐射时间、工作总时间、菌体质量浓度等因素对胞内脂肪酶活性的影响。通过单因素试验和正交试验,获得较高活性脂肪酶的提取条件:超声波每次辐射时间为6s(间歇时间5s),菌体质量浓度为25g/L,输出功率为550W,工作总时间为5.5min,在此条件下提取的脂肪酶活力达到128.46U/g。     

产氢细菌Ethanoligenens harbinense YUAN-3基因文库构建及分析

以高效产氢细菌哈尔滨产乙醇杆菌的模式菌株YUAN-3作为出发菌株,提取细菌总DNA,经过Sau3AI的不完全酶切,将2.5～5.0kb的片段连接入用BamHI酶切的pUC19质粒,转化入E.ColiDH5α中,构建菌株YUAN-3的基因组文库,得到克隆数接近9×103个,以最相近的梭菌属已报道的基因组平均大小4.6Mb计算,概括了其99%以上的基因组,达到了建库的理论值.随机挑取200个白色菌落进行测序,经分析得到的结果大多数与已经过全序列分析的产氢细菌的假想蛋白相近,其中有49个与其他菌株功能蛋白相似性超过70%的片段,包括叶酰聚谷氨酸合成酶、DNA拓扑异构酶、乙酰转移酶等,同时获得了7个功能蛋白或基因的完整开放阅读框.     

多孔滤膜抽滤法测定原油沥青质含量

对测定原油沥青质含量的3种分离方法(离心法、抽滤法、过滤法)进行对比,观察到抽滤法在安全健康、效率及重复性等方面具有明显优势。采用激光纳米粒度分析仪对3种分离方法的残液进行了粒度分析,结果表明,过滤法将导致较多的沥青质颗粒的损失,造成测量结果偏小。在此基础上,对抽滤法测试流程中涉及的剂油比、样品静置时间、取样量等影响因素进行优选,确定出适宜剂油比为40 mL/g、静置时间30 min、取样质量1.0g。与SY/T 7550—2004标准方法相比,采用多孔滤膜抽滤法测定原油沥青质含量,推荐的参数合理,测试精度较高。     

大肠杆菌表达的重组新蛭素的生产工艺

为建立可产业化的大肠杆菌表达的重组新蛭素(neorudin,EH)生产工艺,主要采取从低密度到高密度发酵的优化思路,优化了发酵罐培养基和诱导时间;比较了超声破碎和反复冻融的目的蛋白提取方法;纯化工艺采用离子交换层析2步法进行:SP Sepharose Fast Flow阳离子交换层析和Source 15Q阴离子交换层析;所得产品用免疫印迹法鉴定,经HPLC检测纯度,凝块法检测抗凝比活性;最后对纯化产品进行结构确证,包括高分辨率质谱、C-末端测序、N-末端测序、二硫键分析.结果显示:优化后的发酵工艺确定基于TB培养基的高密度发酵工艺,菌体OD₆₀₀可达40左右,每升菌体湿质量可达70 g左右,目的蛋白表达量约400 mg/L;菌体反复冻融离心上清经过纯化获得的目的蛋白HPLC纯度均大于97%,纯化收率为26.12%,抗凝比活性为1 024 ATU/mg,用高分辨率质谱检测其分子质量约为7 415.188 0 ku,N-末端、C-末端和二硫键均与理论相符.建立了EH在大肠杆菌中的高密度发酵和纯化工艺.     

复合酶法提取蛹虫草类胡萝卜素工艺优化及其抗氧化能力测定

为确定蛹虫草类胡萝卜素的最佳提取工艺条件,通过单因素实验和响应面实验设计分析探究复合酶法提取蛹虫草类胡萝卜素的最佳工艺条件并采用紫外光谱法测定其体外抗氧化活性并与传统酸热提取法下得到类胡萝卜素的抗氧化能力进行比较.结果显示:纤维素酶:果胶酶(2:1)时,酶解温度50℃、酶解时间45 min、pH=4、酶浓度为0.5％,...     

柄蓝状菌原生质体的制备与再生条件优化

为了建立以聚乙二醇/氯化钙（PEG/CaCl2）原生质体介导的柄蓝状菌（Talaromyces Stipitatus）高效的遗传转化系统,分别从材料选择,真菌菌龄,不同的渗透压稳定剂,酶的不同种类配比,酶的浓度,酶解时间及不同再生方式对柄蓝状菌EMM原生质的制备与再生条件进行优化。结果表明:以柄蓝状菌EMM 接种生长48 h的菌丝为制备材料,1 mol/L MgSO4作为渗透压稳定剂,菌丝在温度为30 ℃,浓度为50 mg/mL的裂解酶溶液中酶解3 h,得到的原生质体先用再生培养基孵化培养12 h,然后再与PDA培养基混合铺板,以上组合条件下原生质体的释放量可达8.73×108 /mL,再生率可达17.7％。     

三元稀土固体超强酸催化剂S_2O_8~(2-)/Nd_2O_3-ZrO_2-Al_2O_3的制备与表征

通过正交试验优化了三元稀土固体超强酸催化剂S2O2-8/Nd2O3-ZrO2-Al2O3的制备条件,最优条件为:陈化温度为-15℃,浸渍液浓度为1.5mol/L,焙烧温度为500℃.经过红外光谱法、X射线衍射法、透射电镜法对制备的催化剂进行了表征,结果表明:SO2-4与催化剂表面形成的是桥式双配位,而且拥有高催化性能;催化剂表面还呈现晶态结构,确定为表面催化;该催化剂其平均粒径小于17nm,处于纳米尺度.     

α-乙酰乳酸脱羧酶的3种固定化方法的比较

用磁性淀粉微球作为载体 ,采用溴化氰活化法、戊二醛交联法及物理吸附法固定化α 乙酰乳酸脱羧酶 (ALDC) ,并对它的理化性质进行了对比 ,得到的结果是戊二醛交联法固定法ALDC的各种理化性质最为理想 ,它的总活力为 1 660U/g ,蛋白载量为 1 2 3 .1 7mg/ g ,比活为 1 6.4 8U/mg ,活性回收率为 1 4 .92 %。它的催化最适温度为 3 0℃ ,最适pH为 5 ,连续 1 0次催化底物后其活力仍保持 77.2 % ,且其半衰期为 2 1 6d。     

加工方式对板栗壳主要成分及提取液自由基清除能力的影响

以板栗加工的废弃物板栗壳为原料,以未加工板栗壳为参照,对比经水煮、烤制、炒制3种方式处理后板栗壳的主要成分及提取液自由基清除能力。结果表明:未加工板栗壳中水溶性蛋白质和原花青素含量最高,分别为40.58 mg/g和28.70 mg/g,经过3种方式处理后其含量均有所下降;未加工板栗壳中黄酮含量为14.04 mg/g,经水煮、烤制及炒制后黄酮含量均有所升高,分别为15.59、22.00、28.58 mg/g;未加工的板栗壳多酚含量最低(9.21 mg/g),烤制板栗壳的多酚含量最高(17.05 mg/g),水煮和炒制板栗壳的多酚含量较未加工板栗壳的也明显上升。板栗壳提取液对DPPH自由基及羟基自由基均有一定的清除能力,其中未加工板栗壳提取液的DPPH自由基清除能力和羟基自由基清除能力较低,分别为55.69%和43.19%。     

Optimum conditions to treat high-concentration microparticle slime water with bioflocculants

We studied how bioflocculants,produced by white-rot fungi,affect flocculation in slime water.Based on a test in an orthogonal design,flocculation conditions were optimized.The results show that flocculation activity is at its highest when the following conditions are met: slime water concentration 27.42 g/L; coagulant aid(CaCl2)mass concentration 5.0 g/L; two-segment stirrings: the first at a stirring speed of 60 r/min for 180 s and the second 180 r/min for 60 s; a pH of 11 and a flocculant concentration of 15 mL/L.The flocculation activity can be up to 98.71% of bioflocculants at the time.Further experiments indicate that most of the flocculation active material is found outside the mycelium cells.This is the extracellular secretion produced by mycelium cells during the fermentation process.This flocculant has strong thermal stability.Many kinds of cations have a flocculation function to assist bioflocculants.This aid-flocculation effect of the divalent cation Ca2+ is obvious in the bioflocculant produced by the white-rot fungus.Therefore,this is of great value when applied to control engineering in the battle against water pollution.     

竹子化学成分的测定

为了开发高效、低成本的预处理技术,提高竹子生物质的能源化利用,对竹子中的化学成分进行了提取和分析,并用微波和碱对竹子进行预处理和酶解试验,并设计正交试验,对经微波与碱联合预处理的竹子的糖化条件进行了优化,用硫酸蒽酮法检测酶解液中的可发酵单糖含量．其结果表明竹子中半纤维素的质量分数含量为21．49％,纤维素的质量分数含量为43．52％,可以作为生物能源生产的原料．微波与碱联合预处理的最佳条件是：700W,6min．对微波与碱联合预处理的竹屑糖化条件进行优化,得到竹屑最佳糖化条件：温度45℃,pH5．0,每克底物用酶量20U／g．     

产海藻糖酵母的培养条件优化研究

对产海藻糖酿酒酵母进行培养条件优化,得到的最适条件为:每升发酵液中葡萄糖10 g,酵母膏7.5 g,尿素7.5 g,KH2PO42.5 g,Na2HPO42.5 g,微量元素液7.5 mL,发酵初始pH为7.0,对数生长期培养温度选择30℃,稳定期培养温度37℃,装液体积分数40%。摇瓶优化后海藻糖质量比为152 mg/g,约为优化前的2.3倍。选用最优条件在5 L发酵罐中进行培养,培养过程中两次补料,确定最佳培养时间为52 h,在该时间海藻糖产量为1 072 mg/L,比摇瓶中培养的最高值831mg/L高出241 mg/L。     

餐余地沟油固化过程中的脱酸处理研究

本文针对餐余地沟油固化过程中酸值的影响问题,对餐余地沟油进行脱酸处理研究。通过综合考虑地沟油的脱酸和固化效果,确定最佳的脱酸条件为：针对50mL地沟油,加入2mL浓硫酸做催化剂,控制搅拌温度45℃,在地沟油、无水乙醇进料比为1:3的条件下反应1h。在此条件下,餐余地沟油的酸值可从21.5mg/g下降到4.1mg/g,基本消除了酸值对油脂固化的影响。采用脱酸后的餐余地沟油制备固体燃料块,固化产量最高可达101.5g,相应的燃烧残留率仅为16.7%。     

纳豆菌发酵鱼肉蛋白制备低分子肽的工艺研究

以纳豆菌为发酵菌种,以鱼肉为原料,利用菌种发酵产酶降解鱼肉蛋白制备低分子肽,并对发酵工艺进行优化,从而获得较高的低分子肽产量.即在不同的发酵条件下,通过双缩脲和凯氏定氮法计算发酵液中蛋白水解度,比较得出适宜的发酵条件.实验结果显示,纳豆菌发酵鱼肉蛋白适宜的发酵条件为:初始pH 7.5,鱼肉质量浓度250 g/L,补加蔗...     

鱼香味的烹饪应用

为了优化鱼香肉丝方便菜肴配方,并探究其最佳灭菌条件和储藏方式、鉴定挥发性风味成分,通过单因素试验及正交试验探究辅料添加量对菜肴品质的影响,探讨不同灭菌条件及储藏方式对产品汁液流失率、色差、菌落总数、挥发性盐基氮、pH、丙二醛含量、感官评分的影响,采用顶空固相微萃取−全二维气相色谱−质谱联用技术研究挥发性成分,最终优化得到产品配方（以里脊肉100 g计）：蒜添加20 g,醋添加4 g,泡椒添加20 g,糖添加8 g,盐添加1.2 g。最佳灭菌工艺：121 ℃,灭菌15 min。储藏期：−18 ℃条件下储藏15 d。共检测到136种风味化合物,其中含量较高并且对风味有重要贡献的化合物有α-姜黄烯、(反,反)-2,4-癸二烯醛、反-2-己烯醛、反-2-辛烯醛、反-2-癸烯醛、4-乙基-2-甲氧基苯酚、3-乙烯基-1,2-二硫代环己-4-烯、二烯丙基二硫、二烯丙基硫醚、二烯丙基三硫醚。本研究为鱼香肉丝方便菜肴工业化生产及其风味评价提供了一定的理论依据。     

Optimization of detecting hydrogenase activity for acidogenic fermentation of activated sludge

In order to evaluate the hydrogen-producing efficiency of anaerobic activated sludge in Anaerobic Baffled Reactor(ABR)fermentation processes,the optimal conditions for hydrogen producing hydrogenase method on methyl viologen(MV)assay was used to detect the hydrogen production activity of the activated sludge.The most favorable parameters such as 0.6 mL sodium acetate buffer(pH 5.0),100 μL lysozyme,0.2 mL sodium dibromoethane(9.0 mmol/L)and 0.7 mmol/L iron added into 1 mL activated sludge(2.66～26.64 gMLVSS/L)were found.Furthermore,reaction temperature and culture time were detected as 40 ℃ and 30 min respectively.Sodium thiosulfate and sodium sulfides were taken as the reducing agent while trichloroacetic acid as terminator.Under the MV optimal conditions,micro-toxic Dimethyl sulfoxide(DMSO)get higher security and better accuracy.The sensitivity of the detection methods(DMSO as electron carrier)was increased by more than 30%.The results show that the optimal conditions can be applied to measure hydrogenase activity correlating with its specific hydrogen production rate in a hydrogen-producing anaerobic activated sludge system.     

Optimization of fermentation medium for the new hydrogen bacterium E.Harbinense YUAN-3

This study is aiming at investigating the metabolic characteristics of Ethanoligenens Harbinense YUAN-3.The effects of yeast extract powder and supplemental vitamins on the growth medium were assessed.With yeast powder as the sole nitrogen source,the biomass yield and hydrogen-producing capacity of YUAN-3 from glucose fermentation significantly increased.Adding vitamin in yeast powder can enhance hydrogen yield compared with no adding.Therefore vitamin supplement can be considered as an effective growth factor in this study.Batch culture also produced larger yields of hydrogen.     

产纤维素酶枯草芽孢杆菌B29的鉴定与培养条件研究

从近海土壤中分离1株产纤维素酶的菌株,经形态和生理生化指标鉴定为枯草芽孢杆菌。对产酶菌株经碳源、氮源、金属元素、培养温度、pH和接种量进行优化,确定最佳培养组分和条件为：20g／L葡萄糖,10g/L胰蛋白胨,3g／LK2HPO4,3g/LNaH2PO4,2g／L氯化铁,pH6．5,培养温度32℃,接种量为2％（v／v）。优化后纤维素酶系中以羧甲基纤维素酶活性为最高,为72．37U／mL,其次是β-糖苷酶和微晶纤维素酶。     

稻壳固载焦化废水优势反硝化菌制备条件优化

选用从焦化废水的污泥中筛选出5株优势反硝化菌,采用固态培养技术将优势反硝化菌固定至稻壳载体.实验通过响应面法,以TTC脱氢酶酶活为响应值,对反硝化菌的固态培养条件：培养时间、培养温度、接种量、含水率进行优化;并研究3种保存方法对固载菌株TTC-脱氢酶活性的影响.实验结果表明,固态培养条件的最佳值：发酵时间为70h,培养温度为24.2℃,接种量为10.6/20,含水率为50.1%,固载菌株TTC-脱氢酶活性最大达到31.809（ugTF/g/h）;冷冻保存法对酶活影响最小,鼓风风干最经济实用.保存30d后的固载菌株48h对焦化废水的降解率达70%以上.     

动水条件下重金属在沉积物水之间的迁移规律

借助自主开发的不同水动力模拟水槽,选择4.01 cm/s(小流速,A槽)、12.70 cm/s(中流速,B槽)、20.23 cm/s(大流速,C槽)3种流速条件,研究15d运行周期内,3个水槽中沉积物重金属Cd、Cr及类金属As在沉积物-间隙水-上覆水之间的迁移规律.结果表明:1)流速的增加能促进重金属的释放;2)间隙水中As的浓度远远大于上覆水中浓度,为其向上覆水迁移提供了条件;3)沉积物再悬浮是上覆水中重金属浓度增加的主要原因.同时,与静水条件相比,动水条件对沉积物中重金属的迁移有显著影响,但不同重金属受自身特性的影响显示不同的迁移规律.另一方面,3种水流条件对不同介质中重金属含量变化产生的影响过程和结果也不相同,但其影响程度总体为上覆水＞沉积物＞间隙水.