上海市售水产品中副溶血性弧菌耐药性分析

为了解上海市售水产品中副溶血性弧菌的耐药情况,通过药敏纸片扩散法（K-B法）对上海市某水产品市场连续两年监测分离获得的45株副溶血性弧菌进行了25种常用抗生素的药敏实验。结果显示,所有实验菌株都对青霉素G和甲硝唑耐药,有高达90%以上的菌株对帕拉西林、新霉素和卡那霉素耐药,而对利福平、万古霉素、四环素、强力霉素、头孢拉定和土霉素全部敏感;同时发现不同来源的菌株,其耐药谱存在一定程度的差异,菌株多重耐药性与菌株致病因子类型间也存在一定的相关性。因此,应进一步加强水产品中细菌耐药性的监测,并采取更有效措施控制细菌耐药性。      

2020年辽宁省副溶血性弧菌PFGE分型、血清型分布和耐药谱分析

目的 了解辽宁省副溶血性弧菌（VP）的流行特征,为食源性疾病的防控提供可靠的技术支持,提高对食物中毒应急事件的处理能力。方法 对2020年从辽宁省内14个市内食源性疾病病人和食品中分离的VP进行PFGE分子分型、血清学分型、药物敏感试验并分析。结果 44株VP（食源性疾病分离株22株,食品分离株22株）共分为15个血清型,9个血清群,有8株不能进行K分型,不可分型率为18.2%。食源性疾病分离株分为4个血清型、3个血清群,主要血清群为O3,其次为O1;食品分离株分为11个血清型、6个血清群,主要血清群为O2,其次为O1和O3。44株VP对15种抗生素的药敏结果显示,头孢唑啉耐药率高达68.2%,其次是氨苄西林22.7%、红霉素13.6%、阿奇霉素4.5%、头孢西丁2.3%、头孢噻肟2.3%。菌株主要对β-内酰胺类和大环内酯类抗生素耐药,耐药性逐年增强,一些食源性疾病分离株出现多重耐药,且多重耐药株数量逐年增加。食源性疾病分离株较食品分离株耐药率高,血清型O3∶K6为主要流行菌株,且耐药率高,PFGE分子分型按相似度90%以上,可分为5种PFGE优势带型。食源性疾病分离株相似度较高,可聚类成3个组。而食品分离株相似度较低,除了两株菌相似度大于90%外,其余菌株间相似度均在85%以下。结论 O3与O1血清型菌株之间有高度同源性,提示O3与O1血清型菌株密切相关。食品分离株同源性较低,提示食品株间关联性较差。辽宁省2020年VP分离株耐药情况不容乐观,耐药趋势还需进一步关注。     

2008~2017年间北京进出口水产品中副溶血性弧菌耐药性分析

目的 了解北京进出口水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus, VP)的耐药情况。方法 对2008~2017年间北京进出口水产品中分离出的320株副溶血性弧菌应用药敏纸片扩散法(K-B法)进行21种常用抗生素药敏测试。结果 89.1%的实验菌株同时对氨苄西林耐药, 而对环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素、多粘菌素B、亚胺培南全部敏感; 分别有高达94.7%和82.1%的菌株对红霉素和链霉素表现为中介。结论 实验菌株存在大量中介耐药和异质性耐药的情况, 应进一步加强水产品中副溶血性弧菌耐药性的监测工作, 以期指导临床和水产养殖中抗生素的使用。     

食品来源副溶血性弧菌毒力基因分布及分子分型研究

分析食品中分离获得的副溶血性弧菌主要毒力基因的分布特征、血清型及分子分型特点,为食源性副溶血性弧菌感染暴发的早期预警和疫情溯源提供实验室数据。提取40株副溶血性弧菌基因组,分别用PCR检测VcrD1、Vp1680、VopP和VcrD2基因,荧光PCR检测tdh、trh和tlh基因。对40株菌株进行血清型分型并采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对其进行分子分型。利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析,建立PFGE分子分型数据库。40株菌株均未检测到tdh、trh、Vop P和VcrD2基因,tlh、VcrD1和Vp1680基因阳性检测率为100%。40株菌株中含有16种血清型,其中9株未分型,主要血清型为O₂∶K₂₈和O₅∶K₁₇,血清型分布呈多样性。40株菌株共获得39个不同的PFGE带型,PFGE呈现遗传多样性,无优势带型。本实验食品环境中分离的副溶血性弧菌未发现毒力因子,副溶血性弧菌血清型呈分散趋势且菌株之间亲缘关系较远。      

2017—2021年泉州市食品污染风险监测中副溶血性弧菌耐药性及分子分型研究

目的 了解2017—2021年泉州地区食品污染风险监测中副溶血性弧菌的耐药情况以及菌株之间的同源性关系。方法 对各县区送检的食品样本进行副溶血性弧菌的增菌培养和分离鉴定,荧光定量PCR法进行毒力基因（tdh、trh和tlh）检测,微量肉汤稀释法进行药敏试验,脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型,利用BioNumerics 6.6软件进行聚类分析。结果 210份食品样本共检出副溶血性弧菌65份,总检出率为30.95%;毒力基因检测中tlh基因100%检出,tdh和trh均未检出;药敏试验显示65株副溶血性弧菌对8种抗生素表现出不同程度的耐药,其中耐药最强的是多黏菌素E(27.70%,18/65),而对美罗培南、环丙沙星、头孢他啶/阿维巴坦、替加环素、阿奇霉素、萘啶酸、链霉素、复方新诺明和阿米卡星9种抗生素不具有耐药性。65菌株通过PFGE图谱聚类分析显示63种型别,菌株之间相似度为34.67%～100.0%。结论 泉州地区食品中存在一定程度的副溶血性弧菌污染,所分离出的副溶血性弧菌对多种抗生素具有较高敏感性,菌株分布呈多态性,相互之间关系比较分散,亲缘关系较远。     

北京市通州区食源性疾病监测病例中副溶血弧菌的病原特征分析

目的 了解通州区2015—2021年食源性疾病监测病例中副溶血弧菌的脉冲场凝胶电泳（PFGE）优势带型、耐药情况和毒力基因携带情况,为副溶血弧菌感染防控和治疗提供参考数据。方法 对2015—2021年通州区定点监测医院门诊腹泻病例的粪便样本进行副溶血弧菌分离培养,对其进行血清分型、毒力基因检测、PFGE聚类分析及药敏试验。结果 2 828份粪便标本中检出副溶血弧菌100株,检出率为3.54%,每年7~9月是检出高峰月份。不同年份副溶血弧菌检出率差异具有统计学意义（χ²=53.94,P<0.001）。100株副溶血弧菌中有一株未携带tlh基因,89.00%的菌株携带致病性毒力基因tdh。副溶血弧菌优势血清型为O3∶K6（66/100）,其次是O4∶K8（9/100）。98株菌副溶血弧菌（2株降解）PFGE分型结果显示副溶血性弧菌有39个PFGE带型,命名为V1-V39,条带相似度在79.6%~100%之间,基因分布呈高度多态性,V22和V25是通州区副溶血弧菌的优势带型。菌株对头孢唑林的耐药率最高（32.00%）,其次是氨苄西林（14.00%）和多黏菌素E（13.00%）,对四环素类、氯霉素类、氨基糖苷类、碳青霉烯类四类药物100%敏感。结论 通州区2015—2021年食源性疾病监测病例中检出的副溶血弧菌主要是O3∶K6型tdh⁺- trh^-菌株,对头孢唑林,氨苄西林和多黏菌素E耐药。PFGE图谱主要流行菌株带型相似度在93.1%以上,存在暴发风险,食品安全相关部门需做好副溶血弧菌监测及暴发预警工作,预防食源性疾病暴发。     

云南淡水鱼中副溶血性弧菌的污染情况及耐药性分析

目的 了解云南省淡水鱼中副溶血性弧菌的污染和耐药情况.方法 采集昆明、曲靖、大理、红河的淡水鱼110件,参照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》,分离副溶血性弧菌的疑似菌株,通过生化试验和飞行时间质谱仪进行鉴定;采用革兰阴性需氧菌药敏检测板对分离鉴定到的副溶血性弧菌进行药物敏...     

水产品中副溶血性弧菌的污染、毒力基因及耐药性研究

采集上海市各大农贸市场3类水产品共273份,分离出副溶血性弧菌105株,平均检出率为38.46%,其中甲壳类、贝类、鱼类检出率分别为50.96%、27.12%、15.79%,三者间有极显著差异(P＜0.01)。多重PCR检测分离菌株发现所有分离菌株没有耐热直接溶血毒素和相对耐热直接溶血毒素基因,仅有不耐热溶血毒素基因。K-B氏药敏纸片法检测了105株分离菌株对10种抗生素的耐药性,发现所有菌株对头孢曲松、萘啶酸和诺氟沙星敏感,部分菌株对氨苄西林(69.50%)和阿莫西林(12.38%)等具有较强的耐药性。另外采用碱裂解法提取所有分离菌株的质粒,发现只有7株菌株含有1～3个质粒,大小范围在1～24kb之间,且菌株耐药性与其所携带的质粒的数量和大小并无直接联系。表明分离菌株的耐药性主要是由于细菌染色体相关基因突变造成的。     

水产品中副溶血性弧菌快速检测技术研究进展

副溶血性弧菌广泛存在于近海岸的海水、海底沉积物以及鱼虾、贝类等海产品中,是一种重要的食源性致病菌。在我国沿海地区,由副溶血性弧菌引发的食品安全事件数量已经跃升食品中毒事件的首位。因此,为了提高水产品中副溶血性弧菌的检出准确率,降低食物中毒的风险,有必要建立快速、准确、灵敏的检测副溶血性弧菌的方法。目前,除了传统的检测方法外,分子生物学和免疫学等快速检测方法已成为副溶血性弧菌的主流检测技术。本文主要综述了分子生物学和免疫学快速检测方法在副溶血性弧菌检测中的应用现状,并对未来的发展前景作了展望。     

宁波市小水产品中副溶血性弧菌的血清型、毒力及耐药性研究

目的了解宁波市小水产品中副溶血性弧菌血清群分布、产毒素特性及耐药性,为防治副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据。方法参照GB/T4789.7—2003用标准血清和PCR进行分型,用PCR测定tdh和trh毒力基因;用纸片扩散法进行药敏试验。结果27株副溶血性弧菌分属于9个血清群,分别为O∶4群占33.3%(9/27)、O∶3群占14.8%(4/27)、O∶2群占14.8%(4/27)、O∶11群占11.1%(3/27)、O∶5群占7.4%(2/27)、O∶1群占7.4%(2/27)、O∶7群占3.7%(1/27)、O∶9群占3.7%(1/27)、O∶10群占3.7%(1/27)。27株副溶血性弧菌的tdh与trh毒力基因均阴性。药敏试验结果显示,27株副溶血性弧菌对青霉素类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、头孢类药物都有耐药株出现。结论宁波市小水产品分离的副溶血性弧菌具有血清分群多样性,药敏结果多重耐药性的特点。     

2021年贵州省食源性疾病主动监测分离沙门菌耐药及分型特征

目的 了解2021年贵州省食源性疾病主动监测分离沙门菌的血清型、耐药和分子分型特征。方法 对全省2021年食源性疾病主动监测腹泻病例中分离的164株沙门菌采用玻片凝集法进行血清学分型,采用微量肉汤稀释法测定菌株对14种抗生素的最小抑菌浓度（MIC）值,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型。结果 164株沙门菌可分为25种血清型,优势血清型为鼠伤寒沙门菌（76,46.34%）、肠炎沙门菌（25,15.24%）和爪哇安纳沙门菌（15,9.15%）。164株沙门菌耐药率为100%,多重耐药率达86.59%;其中对氨苄西林、四环素和萘啶酸耐药率较高,分别为95.12%（156/164）、78.05%（128/164）和63.41%（104/164）。72株鼠伤寒沙门菌PFGE聚类分析后共分为58种指纹图谱,24株肠炎沙门菌有12种指纹图谱,15株爪哇安纳沙门菌有3种指纹图谱。结论 贵州省腹泻患者沙门菌血清型种类较多,多重耐药现象严重,PFGE指纹图谱表现出遗传多样性。应加强对沙门菌的耐药监测,尤其是优势血清型鼠伤寒沙门菌的临床用药。     

2020—2021年绍兴市水产品和腹泻患者来源的霍乱弧菌耐药性与分子特征分析

目的 了解2020—2021年绍兴市霍乱弧菌的血清型、霍乱毒素编码基因（ctxAB）携带率、耐药性及分子分型情况。方法 收集2020—2021年分离自水产品、腹泻患者粪便的霍乱弧菌68株,使用玻片凝集法进行血清分型;利用实时荧光PCR检测ctxAB基因;采用微量肉汤稀释法和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分别进行药物敏感试验和分子分型。结果 68株霍乱弧菌只有3株为O1群小川型,其余65株均为非O1/O139血清群;所有菌株均未检出ctxAB基因;菌株对头孢他啶、头孢他啶/阿维巴坦和复方新诺明的耐药率分别为45.6%、38.2%和36.8%,对四环素、替加环素、阿奇霉素、阿米卡星敏感,17株菌对3种及以上抗生素耐药;菌株经Not I酶切后的PFGE图谱呈多样性,水产品分离株与病例分离株的分子分型差别较大。结论 2020—2021年绍兴市霍乱弧菌主要为非O1/O139血清群,不携带毒力基因ctxAB,对多种抗生素耐药,分子特征复杂多样。     

三文鱼来源副溶血性弧菌的血清分型、毒力基因及耐药性研究

目的 对2019年广州市售三文鱼中副溶血性弧菌的血清型、毒力基因分布及耐药特征进行研究,为防控因食用三文鱼引起副溶血性弧菌食源性疾病提供数据支持。方法 根据GB 4789.7—2013方法对90份广州市售三文鱼样品进行副溶血性弧菌分离、定量及血清分型,分离株的鉴定及耐药性分析采用全自动微生物鉴定仪分析,通过PCR扩增对毒力基因进行检测。结果 90份三文鱼样品中,有16份检出副溶血性弧菌,总检出率为17.78%,阳性样品污染量范围为3.6~93 MPN/g,其中批发市场的检出率（27.50%）最高。MPN计数阳性管分离得到的72株副溶血性弧菌经血清凝集共分出11个O群血清型,分型率为80.56%,其中O11、O9和O6群为主要血清型,占51.39%,其他血清型分布较分散。72株副溶血性弧菌均含有tlh基因,且均未检测到trh和tdh基因。药敏分析发现,全部分离株对碳青霉烯类、单酰胺环类、氨基糖苷类、喹诺酮类和硝基呋喃类等5类18种抗生素敏感。分离株对氨苄西林高度耐药,耐药率达97.22%,少数分离株对哌拉西林（1.39%）和复方新诺明（5.56%）耐药。6.94%的分离株同时对2种抗生素耐药,未出现多重耐药。结论 广州市售三文鱼受到副溶血性弧菌污染程度较高,分离株的血清型呈多样化,主要为非致病株,但具有一定程度的耐药,存在危害健康的潜在风险。     

2017—2020年江苏省无锡市沙门菌的血清型与耐药性研究

目的 分析2017—2020年江苏省无锡市沙门菌报告病例的血清型特点和抗生素耐药性流行特征及变化趋势。方法 收集分离自 2017—2020年无锡市食源性疾病哨点监测医院腹泻病例（住院和门诊患者）标本中的216株沙门菌菌株,采用玻片凝集法对216株菌进行血清型鉴定及分析,并采用微量肉汤稀释法检测沙门菌对13种抗生素的药物敏感性。结果 216株沙门菌分为42种血清型,优势血清型分别为肠炎沙门菌28.70%（62/216）占比,鼠伤寒沙门菌26.39%（57/216）。耐药性分析结果显示,216株沙门菌对美洛培南、阿米卡星、阿奇霉素和头孢他啶高度敏感,高敏菌株占比均高于90%;所有沙门菌对氨苄西林的耐药率最高,达到68.06%,对美洛培南的耐药率最低,仅0.46%;沙门菌在2017—2020年对氨苄西林的耐药率呈逐年增高的趋势,且每年沙门菌分离株对氨苄西林耐药性最高;共130株菌株产生了多重耐药性（60.19%）,耐药菌株数最多的耐药谱为AMP-TET-STR,占比5.56%（12/216）,优势耐药谱不明显。结论 无锡市沙门菌的流行血清型以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,且沙门菌耐药性形势严峻,应该尽快建立高效的管控机制, 加强药敏监测, 优化治疗方案, 避免抗生素滥用。     

一起由副溶血性弧菌引起的聚集性腹泻事件的病原特征分析

目的 对2021年湖州市南浔区一起聚集性腹泻事件分离的副溶血性弧菌进行病原特征分析,为及时采取控制措施提供依据。方法 通过询问患者、医院核查等方法搜索到疑似病例59例,对采集的29份厨师、服务员和病例的肛拭子标本以及18份留存餐食进行病原学检测,采用血清学鉴定、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多重荧光聚合酶链式反应和微量肉汤稀释法分别对副溶血性弧菌分离株进行血清分型、分子分型、tlh/tdh/trh毒力基因检测和药敏试验。结果 从3份厨师和6例病例的肛拭子标本中分离到副溶血性弧菌,检出率为15.25%;分离株血清型均为O10:K4。所有菌株tlh、tdh基因均为阳性,trh基因均为阴性。9株分离株仅对氨苄西林耐药,对其他12种抗生素均敏感。经PFGE聚类分析,菌株间相似系数为100.0%,厨师分离株和病例分离株带型一致。结论 这是一起由O10:K4副溶血性弧菌引起的聚集性腹泻事件,分离株均携带tdh毒力基因,分离株之间的同源性高。     

2019—2021年兰州市腹泻患者肠炎沙门菌耐药特征及分子分型研究

目的 了解兰州市肠炎沙门菌的耐药谱及耐药特点,建立兰州市沙门菌基因型数据库,为有效预防沙门菌的感染及治疗提供科学参考。方法 对2019—2021年从兰州市食源性主动监测中分离到的94株沙门菌进行血清分型、生化鉴定;利用微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验,利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）检测41株肠炎沙门菌的指纹图谱;使用BioNumerics软件对41株肠炎沙门菌PFGE指纹图谱进行聚类分析。结果 94株沙门菌分属为20个血清型,其中肠炎沙门菌为优势血清群,占43.62%（41/94）。41株肠炎沙门菌对喹诺酮类萘啶酸的耐药率为100.00%,对青霉素类氨苄西林耐药率高达80.49%（33/41）,对头孢唑林的耐药率为39.02%（16/41）,对氨苄西林/舒巴坦、四环素的耐药率均为31.71%（13/41）,但对亚胺培南、头孢西丁的耐药率为0.00%;其中26株菌（63.41%,26/41）出现多重耐药,共产生18种耐药谱。41株肠炎沙门菌通过Xba Ⅰ酶切共获得19种带型,各带型之间的相似度为74.20%~100.00%,各带型所包含的菌株数不同,同一年份菌株间的同源性较高并且有100.00%相同带型。结论 兰州市沙门菌血清型呈多样性,其优势血清群肠炎沙门菌高耐药和多重耐药严重,PFGE带型复杂多样,呈现出一定的遗传多样性。     

徐州市市售生肉中单核细胞增生李斯特菌污染及其分子特征分析

目的 分析2018年和2020年徐州市市售生肉中单核细胞增生李斯特菌检出率及其分子生物学特征。方法 随机采集市区零售鲜或冷冻生禽肉及调理肉,按照GB 4789.30—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》对单核细胞增生李斯特菌进行分离、鉴定,并分析其血清型、耐药性、毒力基因型、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。结果 142份市售生肉中有40份检出单核细胞增生李斯特菌,检出率为28.2%（40/142）;血清型主要为1/2a型,占50.0%（20/40）;40株单核细胞增生李斯特菌共分为15种PT型;对氨苄西林及青霉素耐药菌株分别有4株和2株;所有菌株均携带多种毒力基因。结论 徐州市市售生肉中单核细胞增生李斯特菌污染较严重,存在小规模同源菌株,需进一步加强监测管理,以防食源性疾病的发生。     

2019—2022年包头市肉及肉制品中弯曲菌监测结果及病原学特征分析

目的 了解2019—2022年包头市市售肉及肉制品中弯曲菌（Campylobacter）带菌率,并对其分离菌株的抗生素敏感性、耐药基因及分子分型等病原学特征进行研究。方法 2019—2022年共采集市售肉及肉制品300份,分离培养获得弯曲菌,测定其抗生素敏感性、耐药基因及基因突变位点,并通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）对菌株进行分子分型。结果 300份肉及肉制品中共检出弯曲菌142株,其中生禽肉中检出率为65.71%（138/210）,结肠弯曲菌检出率显著高于空肠弯曲菌（χ²=12.48,P<0.01）;仅有3株弯曲菌对全部11种抗生素敏感,有26株细菌耐受全部11种抗生素并有130株发生多重抗生素耐药,主要耐药性表现在喹诺酮（萘啶酸、环丙沙星）及四环素类药物;在喹诺酮耐药弯曲菌中均检测到gyrA基因发生C-243-T的位点突变,并在91.09%的四环素耐药弯曲菌中检测到tetO耐药基因;142株弯曲菌分为105个PFGE型别,相似度在35.1%~100%,无明显优势型别条带。结论 包头市肉及肉制品中存在弯曲菌污染,且在生禽肉中污染尤为严重;弯曲菌对喹诺酮及四环素类抗生素耐药程度高且多重耐药情况较为严重,PFGE型别呈多态性。