高效液相色谱-电感耦合等离子质谱法分析富硒茶叶中硒的形态

建立富硒茶叶中硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基-硒代半胱氨酸（SeMC）、亚硒酸根（Se（IV））、硒代蛋氨酸（SeMet）、硒酸根（Se（VI））5?种硒化合物的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱的分离检测方法。方法利用Hamilton?PRP-X100色谱柱对富硒茶叶中5?种硒化合物进行分离,利用电感耦合等离子体质谱对硒元素进行检测,外标法定量测定5?种硒化合物的含量。研究采用蛋白酶K溶液为提取剂,超声提取60?min,以柠檬酸溶液为流动相,梯度洗脱,5?种硒化合物在15?min内得到了有效分离。5?种硒化合物标准曲线的线性相关系数不小于0.999?8,检出限为0.13～1.09?μg/L。该前处理方法样品加标回收率在91.8%～109.4%之间。方法操作简便、分离效果好、检出限低,适用于富硒茶叶中硒的形态分析。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法检测富硒苹果中5种硒形态

目的建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(high performance liquid chromatographyinductively coupled plasma mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)测定富硒苹果中5种硒形态的方法。方法对样品提取方法、流动相的类型、浓度、p H值等条件进行考察及确定,采用柠檬酸超声提取的方式处理样品,流动相为浓度为5 mmol/L、p H=5.0的柠檬酸溶液。选用Hamiltion PRP-X100阴离子分析柱,色谱进样量为100μL,质谱采用碰撞池模式进行测定。结果本方法在15 min内可以完全分离5种硒形态,硒代胱氨酸(Se Cys2)、甲基硒代半胱氨酸(Me Se Cys)、亚硒酸根(Se(Ⅳ))、硒代蛋氨酸(Se Met)、硒酸根(Se(Ⅵ))的检出限分别为0.6、0.7、1、0.9、1μg/L,样品加标回收率范围为82.1%~98.3%,相对标准偏差为1.6%~3.8%。结论本方法可以简单、快速、准确地测定富硒苹果中硒的5种形态。     

高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用技术测定富硒大米中的5种硒形态

目的建立高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法(high performance liquid chromatographyhydride generation-atomic fluorescence spectrometry,HPLC-HG-AFS)检测富硒大米中硒代胱氨酸(Se Cys2)、甲基硒代半胱氨酸(Me Se Cys)、亚硒酸根(Se IV)、硒代蛋氨酸(Se Met)和硒酸根(Se VI)的方法。方法选择Hamilton PRP-X100阴离子交换色谱柱,对流动相浓度、p H值以及提取条件进行选择优化。样品采用链霉蛋白酶E水解超声提取方式,使用40 mmol/L的磷酸氢二铵溶液(p H 6.0)作为流动相。结果 20 min内可以完全分离5种硒形态,各种硒形态标准曲线线性相关系数(r)均大于0.999,检出限分别为3.7、1.7、1.2、4.2、7.2μg/L。加标回收实验显示富硒大米中硒的主要存在形态即硒代蛋氨酸回收率范围在95.1%~98.2%,其他4种硒形态回收率范围均在80.4%~102.5%。结论本方法可以快速、准确地测定大米中硒的5种形态。     

阴离子交换色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定片剂类富硒保健品中4种形态硒

目的建立了阴离子交换色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定富硒保健品中硒酸根[Se(Ⅵ)]、亚硒酸根[Se(Ⅳ)]、硒代胱氨酸(SeCys_2)和硒代蛋氨酸(SeMet)的方法。方法采用Hamilton PRP-X100阴离子交换柱(250 mm×4.1 mm,10μm),以40 mmol/L磷酸氢二铵(pH=6.0)为流动相,在12 min内可完全分离4种硒形态。结果 Se(Ⅳ)、Se(Ⅵ)、SeCys_2和SeMet的检出限分别为0.85、1.07、0.91和1.73μg/L,标准曲线相关系数均0.999 5,加标回收率为80.2%~108.7%,相对标准偏差(RSD)均5.0%。比较了不同提取方法对片剂类富硒保健品中4种硒形态的提取效果,以亚硒酸盐为硒源的样品采用0.6 mol/L盐酸提取效果理想,提取率92%;含有有机硒的保健品采用蛋白酶K提取,提取率82%。结论本方法快速、简单、准确,适用于测定片剂类富硒保健品中硒形态,为监督富硒保健食品的质量提供技术支持。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定富硒食用菌中的4种硒形态

目的建立富硒食用菌中硒代胱氨酸(Se Cys)、4价硒(Se(IV))、硒代蛋氨酸(Se Met)、6价硒(Se(VI))4种硒形态的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma-mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)的分析方法。方法以Hamilton PRP-X100为色谱分离柱,以40mmol/L磷酸氢二铵(pH 6.0)为流动相,对富硒食用菌中4种硒形态进行分离,利用电感耦合等离子体质谱法对质量数为77的硒同位素(~77Se)进行定量检测,样品提取采用蛋白酶(来源于地衣芽孢杆菌)为提取剂,60℃水浴提取1 h。结果 4种硒形态在0~100μg/L浓度范围内线性良好,相关系数r~2大于0.997,检出限在2μg/L以下。结论该方法适用于富硒食用菌中硒的形态分析。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定植物性富硒食品中7种硒元素形态的含量

目的 考察微波辅助下酶解法的提取效果, 基于动态反应池(dynamic reaction cell, DRC), 建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry, HPLC-ICPMS)同时测定植物性富硒食品中7种硒元素(硒酸根、亚硒酸根、硒代胱氨酸、L-硒甲基硒代半胱氨酸、L-硒代蛋氨酸、甲基亚硒酸、硒代乙硫氨酸)形态的含量。方法 样品经微波辅助胰蛋白酶酶解, 高速离心后取上清液过水相滤膜。采用HPLC-ICPMS仪, 以甲烷为反应气体DRC模式消除质谱干扰, 内标校正, 以外标法进行定量分析。优化色谱和质谱条件, 从酶的种类、酶的用量、萃取温度、萃取时间、加标回收率等方面考察前处理方法对待测物的提取效果。结果 7种目标物在0.5~100 μg/L范围内呈良好线性关系, 相关系数r均大于0.9998, 平均回收率为91.45%~102.75%, 检出限为0.10~0.30 μg/kg, 定量限为0.30~0.90 μg/kg, 日间日内精密度(n=6)分别小于5%和9%。结论 该方法准确、灵敏, 适用于食品中7种硒元素形态的同时检测。     

液相色谱——氢化物发生原子荧光光谱法测定富硒稻谷中硒的形态

建立了富硒稻谷中硒代胱氨酸(SeCys)、亚硒酸根(Se(IV))、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒酸根(Se(VI))4种硒形态的高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱分析方法。稻谷样品采用链霉蛋白酶E酶解提取,40 mmol/L磷酸氢二铵为流动相,经汉密尔顿阴离子交换柱分离后的溶液引入仪器进行氢化物发生-原子荧光光谱法测定。结果表明,4种硒形态标准曲线线性关系良好(R~2≥0.999 0),方法检出限为0.008 01-0.059 25 mg/kg,回收率为85.9-103.9%,RSD3%。本方法前处理简单,灵敏度高,能有效地分离并检测出稻谷中多种硒形态含量。     

高效液相色谱法检测富硒酵母中的硒代蛋氨酸

建立了高效液相色谱法测定富硒酵母中硒代蛋氨酸的分析方法。采用酶解提取法提取富硒酵母样品中的硒代蛋氨酸,丹磺酰氯柱前衍生,C18色谱柱(4.6 mm×250 mm i.d.,5μm)分离,以10 mmol/L磷酸二氢钠缓冲液(含4%N,N-二甲基甲酰胺,pH=6.55)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,荧光检测(激发波长:320 nm;发射波长:523nm)。硒代蛋氨酸的检出限为(S/N=3)1μg/L,定量限为(S/N=10)5μg/L。在1 mg/L~50 mg/L范围内的线性关系良好(R≥0.999 6)。加标回收率在91.12%~107.83%,方法相对标准偏差<1.2%。本方法具有专属性好,灵敏度高,适用于富硒酵母原料及相关产品中的硒代蛋氨酸的定量测定。     

高效液相色谱–电感耦合等离子体质谱联用测定稻米中5种硒形态（网络首发、推荐阅读）

利用高效液相色谱–电感耦合等离子体质谱联用技术建立了富硒大米中5种硒形态的检测方法。采用反向C18 色谱柱，对流动相离子对浓度、洗脱盐浓度、pH值进行了优化，最终确定流动相组成为15 mmol/L乙酸铵溶液，pH5.5和0.2 mmol/L四丁基氢氧化铵（TBAH），硒–甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys）、硒代半胱氨酸（SeCys）、硒代蛋氨酸（SeMet）、四价硒Se(VI)和六价硒Se(IV)5种硒形态获得基线分离。大米样品用酶提法提取，通过对酶的种类、酶的用量及酶解时间等对提取效率的研究，确定样品与蛋白酶（protease）XIV酶量比为20∶1为最佳，且最佳酶解时间为20 h。结果表明本方法分离效率高，方法线性良好，灵敏度高，回收率为77.1%~107.3%，硒–甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys）、硒代半胱氨酸（SeCys）、硒代蛋氨酸（SeMet）的检出限和定量限分别为0.0015mg/kg和0.005 mg/kg，四价硒Se(VI)和六价硒Se(IV)检出限和定量限分别为0.002 5 mg/kg和0.009 mg/kg。为全面评价富硒大米质量和后续开展富硒大米膳食暴露评估提供技术支撑。     

液相色谱-电感耦合等离子质谱联用法测定大豆中的5种硒形态

目的建立液相色谱-电感耦合等离子质谱法(liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry,LC-ICP-MS)测定谷物类大豆样品中5种硒形态[硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代L-半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸根(SeⅣ)、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒酸根(SeVI)]的分析方法。方法样品采用超声水解,加入链酶蛋白酶E提取,经C_(18)反向色谱柱(4.6mm×150mm,5μm,100?)分离,以30mmol/L磷酸氢二铵、0.5mmol/L四丁基溴化铵、2%甲醇为流动相,流动相的pH用甲酸调节至5.8～6.0,通过ICP-MS测定5种硒形态。结果经方法优化后, LC-ICP-MS方法可以在8 min内将5种硒形态完全分离,且各个硒形态标准曲线的线性关系良好(r~2≥0.995),方法检出限为0.5～1.0μg/L,定量限为1.5～3.0μg/L,加标回收率为97.34%～100.33%,相对标准偏差为0.46%～1.2%。结论本方法具有前处理简单、快捷,灵敏度高,分析速度快等优点,适用于大豆食品中硒的形态分析。     

硒元素与健康

为了进一步阐明微量元素硒在人体中的重要作用,通过分析硒的分布及存在形式,介绍了硒与人体免疫、对血脂和血糖的影响、硒的生物化学功能、与视力和癌症的关系、如何合理补硒等硒元素与人体健康之间的关系,分析人体内硒元素含量与各种疾病的内在联系,得出硒元素缺乏或过剩都对人体有危害。     

富硒大米中硒形态分析

采用原子荧光光度法分析了天然富硒大米中硒的主要赋存形态、分布及含量.本实验中,硒的检测线性范围为4 μg/L～20μg/L,相关系数是r=0.999 3,总硒测定的相对标准偏差(RSD)为0.966％(n=6),总硒的加标回收率为103.12％.实验表明富硒大米中的总硒含量为206.708 μg/kg,达到60 μg/kg～300 μg/kg的富硒标准,而硒主要以对人体有益的有机硒形态存在,含量为168.875 μg/kg,占总硒的81.70％,而有机硒中最主要的赋存形态是蛋白硒,含量90.170 μg/kg,占53.40％,其次多糖硒占9.28％,RNA硒占1.86％,其它形态的有机硒占35.46％.     

以活化硒矿为硒源的灵芝生物富硒研究

对以活化硒矿为硒源的灵芝(Ganoderma lucidum)液体培养条件进行了研究。考察了不同碳源和氮源对灵芝生长的影响,利用正交试验确定了最佳液体发酵培养基并对温度、转速、pH等发酵条件进行了优化。试验结果表明:灵芝液体培养的最佳发酵培养基是:2%玉米粉,4%葡萄糖,3%麸皮汁,0.2%磷酸二氢钾,0.1%七水硫酸镁;最佳发酵培养条件是:温度28℃,摇床转速180r/min,pH6,接种量15%,菌丝生物量高达23.59g/L。当添加的硒矿水溶硒含量为5μg/g时,灵芝富硒效果最好,其总硒含量和富硒率分别达302.2μg/g和60.0%。     

原子荧光法测定硒强化营养盐中硒

实验首次建立了氢化物发生—原子荧光法测定硒强化营养盐中的硒的分析方法。方法检出限为0.047 mg/kg,RSD≤0.8%,平均回收率为103.4%。该方法简单易行、准确、稳定,十分适合硒强化营养盐中硒含量的测定。     

富硒酸奶

利用生物转化原理,将无机硒转化为有机硒,制成富硒粉,添加到奶液中,利用乳酸菌发酵可制成具有保健功能的新型酸奶。     

外源硒对茎瘤芥硒形态及硒吸收的影响

采用大田实验研究叶面喷施硒(0.0、1.0、2.5 mg/L)对茎瘤芥生长、硒形态、硒吸收和转化的影响。结果表明,叶面喷施1.0 mg/L的硒提高了茎瘤芥的产量,但未达到显著水平(P0.05)。叶面喷硒降低了茎瘤芥硝酸盐含量,在一定程度上增加了茎瘤芥游离氨基酸、VC、还原糖的含量,分别较对照增加了40.41%、13.36%和46.73%。叶面喷施硒后茎瘤芥中全硒和有机硒含量分别较对照增加了46.1%~193.9%和74.0%~271.5%,并且随外源硒质量浓度的升高而显著增加。随硒质量浓度的增加,茎瘤芥有机硒转化率显著提高,1.0、2.5 mg/L硒处理分别较对照增加了19.33%和23.57%。茎瘤芥吸收的硒主要以有机硒的形式存在,茎瘤芥全硒和有机硒含量与外源硒质量浓度呈极显著正相关(P0.01)。     

高硒浓度下两种螺旋藻对Se(Ⅳ)的吸收和代谢

对极大（S．maxima）和钝顶（S.platensis）两种螺旋藻在接种后第5d和第6d两天内添加Na2SeO2（累计加硒浓度分别为600、800和1000mg／L），获得了有机硒含量分别为474．37、562．93、645．98μg／g（DW）的S．maxima和352．68、501．85、1198．15μg／g（DW）的S．platensis。分别测定了螺旋藻藻体及培养液中的无机硒、有机硒和总硒含量，分析了无机Se（Ⅳ）经螺旋藻吸收、代谢后的分布状况。     

高硒浓度下两种螺旋藻对Se(IV)的吸收和代谢

对极大(S.maxima)和钝顶(S.platensis)两种螺旋藻在接种后第5d和第6d两天内添加Na2SeO3(累计加硒浓度分别为600、800和1000mg/L),获得了有机硒含量分别为474.37、562.93、645.98μg/g(DW)的S.maxima和352.68、501.85、1198.15μg/g(DW)的S.platensis。分别测定了螺旋藻藻体及培养液中的无机硒、有机硒和总硒含量,分析了无机Se(IV)经螺旋藻吸收、代谢后的分布状况。     

硒元素在绿豆芽中的富集研究

本研究根据绿豆芽的生长特点,设计出绿豆的发芽环境,同时选择不同浓度的硒溶液进行富硒试验,实验结果表明硒溶液浓度越大,豆芽生长速度就越慢,当浓度高于35ng/ml时,豆芽出现腐烂现象,而采用浓度低于20ng/ml的硒溶液淋浇时,对豆芽生长影响差异不明显。硒含量检测结果表明,与对照相比,富硒处理后的豆芽都达到了一定的富硒量。用浓度分别为20、35、50ng/ml硒溶液处理后的豆芽硒含量分别为27.03、100.7、155.6mg/kg。本实验还对不同富硒量对豆芽中SOD酶活性的影响进行了研究,结果表明豆芽的SOD酶活性先是随着硒溶液浓度的增大而增大,但硒浓度超过20ng/ml时又呈下降趋势,这说明过量的硒会抑制SOD酶活性。     

氢化物原子荧光法分析不同地区刺参总硒和无机硒含量及分布规律

为测定我国黄渤海海域刺参群体硒含量并探索其分布规律,采用氢化物原子荧光光谱法进行含量分析。结果显示,呼吸树为总硒和无机硒含量最高的组织,平均值分别为（14.171±3.412） mg/kg和（6.194±3.829） mg/kg,不同组织内的总硒、无机硒含量变化呈现一致的规律,硒含量由高到低为：呼吸树＞消化道＞肌肉＞内壁＞外壁,同时刺参体壁和肌肉（食用部分）中有机硒比例在75.6%～89.4%之间（除东营地区刺参群体肌肉组织的有机硒比例最低为53.6%）;5 个地区刺参群体同一组织内的总硒及无机硒含量有显著性差异,东营地区呼吸树、消化道和肌肉中无机硒含量较高。