水解牛乳酪蛋白的抗原性研究

采用间接竞争抑制Elisa法测定水解酪蛋白中的残留抗原性,从而间接测定其致敏性。选择7种蛋白酶在各自适宜条件下酶解酪蛋白,观察酪蛋白抗原性随酶解过程的变化情况,并讨论了水解酪蛋白的抗原性随分子质量的变化以及深度水解酪蛋白与适度水解酪蛋白的抗原性。结果表明,不同蛋白酶对酪蛋白的抗原性影响不同,这可能是由于不同的蛋白酶具有不同特异性,其中,中性蛋白酶降低酪蛋白抗原性的效果最佳,抗原抑制率为20.91%;水解酪蛋白的分子质量越小,其残留抗原性越小,当其分子质量小于3 000Da时,抗原抑制率仅为6.61%;深度水解酪蛋白的抗原性较适度水解酪蛋白低,这主要是由于水解度及分子质量的不同。     

胰蛋白酶水解对乳蛋白抗原性影响的研究

以胰蛋白酶为水解用酶,利用小鼠动物模型从体外和体内两个方面研究了水解作用对牛乳蛋白抗原性的影响。结果表明,胰蛋白酶水解的最适条件为50℃,E/S为0.6%下水解1.5 h。此水解条件下乳蛋白的总致敏性降低最多,分别为α-乳白蛋白(α-LA)抗原性降低率为80.16%,β-乳球蛋白(β-LG)抗原性降低率为51.94%,酪蛋白(CN)抗原性降低率为73.26%。动物实验表明:酶解组小鼠过敏症状较未水解的牛乳蛋白组相比明显减轻。与乳蛋白相比,酶解物显著抑制特异性IgE的产生,IgE质量浓度下降了42.36%。血浆组胺实验表明,酶解物降低血浆中组胺的释放,组胺质量浓度比乳蛋白组下降了32.77%。     

超高压及酶解对虹鳟鱼I型胶原蛋白抗原性的影响

采用超高压及酶解两种方法处理虹鳟鱼过敏原I型胶原蛋白,并研究对其抗原性的影响。结果表明：经超 高压处理后,I型胶原蛋白抗原性随着压力的升高呈现先降低后上升的趋势,200 MPa、25 ℃超高压处理10 min时, I型胶原蛋白抗原性最高降低42.66%。比较木瓜蛋白酶、α-糜蛋白酶以及胰蛋白酶酶解对I型胶原蛋白抗原性的影 响,得到最佳酶解条件为胰蛋白酶在45 ℃、pH 8.0,酶与底物质量比为1∶10时,I型胶原蛋白抗原性消减97.69%。 上述结果表明超高压及酶解均能有效降低虹鳟鱼I型胶原蛋白抗原性,且酶解更为有效。本研究结果为消减过敏原 提供借鉴。     

酶解作用对牛乳乳清蛋白抗原性影响的研究

为了探明胰蛋白酶水解作用对乳清蛋白致敏性或者抗原性的影响,利用小鼠动物模型从体外和体内两个方面研究了水解作用对乳清蛋白致敏性的影响.结果表明,酶解物中β-乳球蛋白抗原性降低率为53.92％,α-乳白蛋白抗原性降低率为82.31％.酶解组小鼠过敏症状较未水解的乳清分离蛋白(WPI)组相比明显减轻.与WPI组相比,酶解物显著抑制特异性IgE的产生,IgE质量浓度下降了40.55％.血浆组胺实验表明,酶解物降低血浆中组胺的释放,组胺质量浓度比WPI组下降了28.72％.     

加热联合酶解大豆7S蛋白的分子结构及抗原性研究

选用不同加热预处理条件、不同蛋白酶处理大豆7S蛋白,SDS-PAGE考察酶解后大豆7S蛋白的降解情况,间接竞争ELISA法考察酶解物的抗原性。结果表明:加热预处理联合酶解可显著增大β-伴大豆球蛋白的降解程度,β亚基消化程度得到极大提升,α亚基、α'亚基几乎完全被降解,在相同酶解时间下,胰蛋白酶的酶解速度快于胃蛋白酶;加热预处理联合酶解大幅降低了β-伴大豆球蛋白的抗原性,胰蛋白酶的效果优于胃蛋白酶,经80℃加热10 min预处理再经胰蛋白酶处理,大豆7S蛋白的抗原性降低了79.99%,而胃蛋白酶最优条件下最多仅降低50.4%; SDSPAGE结果表明,胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解物中出现了抗消化肽段,经过质谱鉴定,均来自于β-伴大豆球蛋白的α亚基。     

酶水解降低牛乳蛋白抗原性的研究

利用胰蛋白酶和风味蛋白酶对牛乳单酶一步或双酶两步酶解,研究两种酶解方法对牛乳中αs-酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白抗原降低效果的影响。对酶解过程中3种蛋白抗原降低率进行测定及水解物的蛋白质分布进行分析,结果表明:双酶两步水解法与单酶一步水解法相比,可显著降低牛乳蛋白抗原性。水解液的SDS-PAGE分析显示双酶两步水解液中αs-酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白残留量较单酶一步水解液中的这3种蛋白残留量少。水解液的高效液相色谱分析显示双酶两步水解液中有较多相对分子质量低于6 500的肽类,而单酶一步水解液中有较多相对分子质量大于12 300的蛋白。     

胰蛋白酶制备乳蛋白水解物的研究

为降低牛乳蛋白中的致敏蛋白含量,制备婴儿配方乳,本研究利用蛋白酶水解牛乳蛋白,在筛选出最佳酶解用酶的基础上,以胰蛋白酶浓度、酶解时间、酶解温度为影响因子,在单因素实验结果的基础上．应用Centure—Composire Design中心组合方法进行三因素三水平的实验设计,以牛乳蛋白水解度为响应值,运用响应面法对水解条件进行进一步的优化。结果表明：酶解浓度、酶解时间对牛乳蛋白水解度影响显著;牛乳蛋白质水解的最佳工艺为：以胰蛋白酶为水解用酶,水解温度为55℃,酶添加量为0．8％,酶解时间为47min。牛乳在此条件下水解后,对其水解物进行SDS—PAGE分析及抗原性测定,表明αs-酪蛋白和β-乳球蛋白含量均有不同程度的减少,抗原性也有不同程度的下降。     

酶解对乳清蛋白抗原性影响的研究

研究了酶解对乳清蛋白抗原性的影响。选择了7种常见蛋白酶在同一水解模式下水解乳清蛋白，用竞争ELISA法测定水解物的残留抗原性，从而间接测定其过敏性变化。结果表明，酶解能有效降低乳蛋白抗原性，但水解物仍能与特异抗体反应，保留一部分抗原性。不同酶对乳清蛋白过敏原的影响不同，酶的特异性对乳清蛋白水解物的抗原性有较大的影响，碱性蛋白酶降低乳蛋白抗原性的效果最佳，对抗β-乳球蛋白（β-LG）和抗α-乳白蛋白（α-LA）抗体的抗原性分别降低了50．02％和99．72％。     

酪蛋白三种组分的酶解特性研究

酪蛋白由3种成分组成,即αs-酪蛋白,β-酪蛋白,κ-酪蛋白。本文对酪蛋白的三种组分进行分离,用SDSPAGE电泳进行检测,得到相对纯度分别为89.50%、96.51%、90.99%。酪蛋白三种组分用胰蛋白酶进行酶解,对酶解物的水解度和粒度分布进行测定,酶解物的粒度分布用激光粒度分析仪测定。得到的结论是:在三种组分的酶解物中,αs-酪蛋白酶解物的水解度最高,随着酶解时间的延长,αs-酪蛋白酶解物中的粒径越来越小。β-酪蛋白酶解物在前12h水解度增加最少,β-酪蛋白酶解物在前6h粒度变化也不明显。κ-酪蛋白酶解物的水解度以线性形势增加,且κ-酪蛋白酶解10min内,粒径变化明显。      

山羊酷蛋白不同酶解产物特性的研究

比较了四种酶(胰蛋白酶、胃蛋白酶、Alcalase及自制的枯草芽孢杆菌蛋白酶)对山羊酪蛋白的水解能力.水解度动态测定发现,酶解速度从高到低依次为Alcalase、枯草芽孢杆菌蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶;当40℃水解3h左右,水解度即达到相对稳定的最大值,依次为34.61%、25.28%、19.08%和7.22%.酶解物的SDS-PAGE分析发现,Alcalase、枯草芽孢杆菌蛋白酶能将山羊酪蛋白充分降解成小肽或游离氨基酸,而胰蛋白酶和胃蛋白酶的酶解物中还包含14kDa左右的大肽.山羊酪蛋白对四种酶的敏感程度均高于牛酪蛋白.山羊酪蛋白的胃蛋白酶解物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有一定抑制作用,枯草芽孢杆菌蛋白酶酶解物具有较强的超氧负离子自由基(O2-·)清除能力,清除率达到50.22%,是相同浓度维生素C(73.73%)的68%,四种酶解物清除O2-·的能力与水解程度呈正相关.     

山羊乳酪蛋白酶解物制备及体外抗氧化活性研究

以自由基清除能力、金属离子螯合能力和抗脂质过氧化能力为指标,采用均匀试验研究山羊乳酪蛋白酶解物的制备及其体外抗氧化活性,并且比较自由基清除能力的方法。结果表明：山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺为在60g/kg的底物浓度下,中性蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为4000U/g和250U/g,45℃、pH7.5条件下酶解24h。山羊乳酪蛋白经酶解后其体外抗氧化活性显著增强。山羊乳酪蛋白酶解物 ·OH清除率的EC50值是其蛋白的3.59倍,ABTS＋ ·的清除能力是其蛋白的158.72倍,螯合Fe2＋的能力是其蛋白的5.44倍;在亚油酸体系中抗脂质过氧化能力强于TBHQ,与VE相当。清除 ·OH、DPPH自由基、O2－ ·和ABTS＋ ·的方法不能相互替代。     

基于酪蛋白免疫快速检测的羊奶鉴伪方法建立

为了能够快速、灵敏、低成本和方便地对市场上的羊奶进行鉴伪,本文基于竞争法原理开发了牛源酪蛋白胶体金免疫层析试纸条并对其进行了评价.通过在纯羊奶中添加不同比例的牛奶,获得含有不同浓度牛源蛋白的羊奶溶液并进行免疫层析试纸条测定,评价了该方法的检测范围和灵敏度,分析了奶制品经蒸煮和酶解处理对试纸条检测结果的影响,评价了该方法...     

Debittering of enzymatic hydrolysates using an aminopeptidase from the edible basidiomycete Grifola frondosa

Bitter peptide solutions, prepared by the enzymatic hydrolysis of soy protein and milk casein, were treated with an aminopeptidase from the edible basidiomycete Grifola frondosa. As the incubation time elapsed, the amount of free amino acids released increased and the bitterness of the enzyme reaction mixtures decreased. However, the debittering of the milk casein hydrolysate by the aminopeptidase was less effective than that observed for the soy protein hydrolysate. Hydrophobic amino acids such as valine, leucine, phenylalanine, tyrosine, and isoleucine were preferentially released from the bitter solutions by the action of the aminopeptidase.     

不同因素对酪蛋白酶解产物与锌盐螯合效果的影响

本研究采用酶解法制得酪蛋白酶解产物,分析了不同锌源、酶解产物浓度、酶解产物与Zn2+质量比、反应体系pH值、反应温度、螯合时间等因素对酶解产物与锌盐螯合效果的影响,确定了酪蛋白酶解产物与Zn2+螯合的适宜反应条件。研究表明,ZnSO4·7H2O与酪蛋白酶解产物的螯合能力显著高于醋酸锌或氯化锌与酪蛋白酶解产物的螯合能力(p<0.05)。当酶解产物浓度为0.04g/ml、酶解产物与Zn2+质量比为4:1、反应pH值为6.0、反应温度为40℃、螯合时间为20min时螯合效果较好。     

Biological activity of camel milk casein following enzymatic digestion

The aim of this study was to investigate the effects of enzymatic hydrolysis with digestive enzymes of camel whole casein and beta-casein (β-CN) on their antioxidant and Angiotensin Converting Enzyme (ACE)-inhibitory properties. Peptides in each hydrolysate were fractionated with ultra-filtration membranes. The antioxidant activity was determined using a Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) scale. After enzymatic hydrolysis, both antioxidant and ACE-inhibitory activities of camel whole casein and camel β-CN were enhanced. Camel whole casein and β-CN showed significant ACE-inhibitory activities after hydrolysis with pepsin alone and after pepsinolysis followed by trypsinolysis and chymotrypsinolysis. Camel β-CN showed high antioxidant activity after hydrolysis with chymotrypsin. The results of this study suggest that when camel milk is consumed and digested, the produced peptides start to act as natural antioxidants and ACE-inhibitors.     

COMPARISON OF THE LYMPHOPROLIFERATION ACTIVITY OF YAK MILK CASEIN HYDROLYSATES HYDROLYZED BY MICROBIAL-DERIVED AND ANIMAL-DERIVED PROTEINASE

To select a kind of practical protease that can be used for the production of yak milk casein enzymatic hydrolysates with a high‐immunoregulating activity, the effects of casein trypsin, pepsin, alcalase hydrolysates and their separated fractions on the lymphoproliferation activity and Interleukin‐2 production of murine splenocytes in vitro were studied. Results showed that, compared with casein trypsin and pepsin hydrolysates, casein alcalase hydrolysate had higher immunoregulatory activity, degree of hydrolysis and peptide yield. The molecular weights of the separated fractions of casein hydrolysates were lower than 1,500 Da. Considering the low price and commercial availability in a large supply of alcalase, yak milk casein alcalase hydrolysate is more practical as a functional food ingredient in industry.     

蛋白酶处理对脱脂乳感官品质及游离氨基酸的影响

以新鲜脱脂牛乳为原料,采用分光测色仪、电子舌及氨基酸自动分析仪等分析酶解处理对脱脂牛乳感官品质、游离氨基酸含量及组成的影响。结果表明：经风味蛋白酶处理的脱脂牛乳水解度高,达到24.61%;蛋白酶处理会导致其感官性状的改变,与脱脂牛乳相比,3?种酶解产物L*值均显著（P＜0.05）下降,a*（负值）显著上升（P＜0.05）,风味蛋白酶处理对脱脂牛乳色泽影响大于碱性蛋白酶、复合蛋白酶处理;不同酶解产物滋味轮廓之间存在较大差异,与脱脂牛乳相比其甜味值下降显著,且随酶解时间延长,苦味值上升,甜味值衰退,碱性蛋白酶处理的酶解产物以涩味及涩味回味为主,风味蛋白酶的酶解产物以咸、苦味及苦味回味为主,复合蛋白酶的酶解产物以酸味为主,苦涩等味觉较低,电子舌能较好地区分不同酶解物的滋味差异;酶解处理可使脱脂牛乳中的游离氨基酸及必需氨基酸含量显著增加,苦味氨基酸为主要呈味氨基酸。酶解处理及酶解进程会使脱脂牛乳色泽、滋味及游离氨基酸产生变化,其中风味蛋白酶处理产生的影响大于碱性蛋白酶和复合蛋白酶处理。     

Evaluation of the residual antigenicity of dairy whey hydrolysates obtained by combination of enzymatic hydrolysis and high-pressure treatment

Dairy whey was hydrolyzed for 15 min with five food-grade enzymes (Alcalase, Neutrase, Corolase 7089, Corolase PN-L, and Papain) at atmospheric pressure (0.1 MPa) and in combination with high pressure (HP) at 100, 200, and 300 MPa, applied prior to or during enzymatic digestion. The peptide profile of the hydrolysates obtained was analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and their residual antigenicity was assessed by immuno-blotting with anti-beta-lactoglobulin monoclonal antibodies and the sera from pediatric patients allergic to cow's milk proteins. Moreover, to evaluate the presence of residual trace amounts of casein in bovine whey hydrolysates, immunoblotting with anti-cow's milk protein polyclonal antibodies was performed. SDS-PAGE analysis showed that HP treatment increased hydrolysis by the proteases assayed, especially when it was applied during the enzymatic digestion. Positive reactions at the band corresponding to beta-lactoglobulin were detected for Corolase PN-L and Corolase 7089 hydrolysates, except for those obtained under 300 MPa by the last protease. However, the immunochemical reaction was lower in the hydrolysis products obtained under HP than in those obtained at atmospheric pressure and after the HP treatment. On the contrary, no residual immunochemical reactivity associated with beta-lactoglobulin was observed in the hydrolysates obtained by Alcalase and Neutrase under HP, and none was observed in any of the hydrolysis products obtained by Papain. The presence of traces of casein was not significant. These results suggest that HP combined with selected food-grade proteases is a treatment that can remove the antigenicity of whey protein hydrolysates for their use as ingredients of hypoallergenic infant formulae.     

酪蛋白水解物的类蛋白反应修饰及其产物ACE抑制活性特征

采用碱性蛋白酶水解酪蛋白,制备水解度为10.9%、IC50值为52.6μg/mL的酪蛋白水解物,并利用响应面法优化碱性蛋白酶催化的类蛋白反应修饰条件。修饰反应时间固定为6h时,适宜的条件为酶添加量3.1kU/g pro、底物质量浓度50g/100mL、反应温度25℃。制备9个修饰程度不同的修饰产物,结果显示：修饰产物ACE抑制活性均提高,并且活性最高的修饰产物的IC50降低至14.9μg/mL。该修饰产物离心分级后,上清液部分和沉淀部分的ACE抑制活性分别低于和高于修饰产物,表明沉淀部分是提高ACE抑制活性的主要原因;Tricine-SDS-PAGE电泳分析表明,修饰产物及沉淀部分有较大分子质量的肽分子生成;该修饰产物和上清液部分、沉淀部分的进一步酶水解处理则显示,酶水解会导致它们的ACE抑制活性降低,但是仍然高于最初的酪蛋白水解物。     

单酶水解豆芽蛋白及其产物的潜在致敏性

目的优化豆芽蛋白酶水解的条件,并探讨其致敏性的变化。方法利用Alcalase 2.4L碱性蛋白酶水解豆芽蛋白,以水解度为评价指标,根据单因素实验优化豆芽蛋白的酶水解条件,并通过IgG、IgE的结合实验评估酶解产物潜在致敏性的变化。结果酶水解豆芽蛋白的优化工艺条件:底物浓度为8%、酶与底物比(E/S)为1:20(m:m)、酶解时间为4 h。豆芽蛋白酶水解产物的抗原性低于大豆蛋白酶解产物的抗原性,但豆芽蛋白水解产物的IgE结合能力高于大豆蛋白酶解产物的IgE结合能力。结论大豆经过发芽处理后再用Alcalase2.4L轻度水解能有效降低大豆蛋白的潜在致敏性。