固定化辣根过氧化物酶生物传感器测定火腿肠中亚硝酸盐

制备以电子媒介体聚苯胺和纳米TiO2固定辣根过氧化物酶(HRP)的生物传感器,研究该传感器的电化学性质。结果表明,该传感器对H2O2和NaNO2都具有很好的电催化还原性。在含有0.01mg/L～100mol/L的NaNO2(pH=9)的磷酸盐缓冲溶液中,具有良好的线性相关性,其相关系数为0.994 6,检出限为0.001 mg/L。应用于火腿肠中亚硝酸盐的测定,回收率为94%~103%。     

磁性固定化辣根过氧化物酶脱除玉米赤霉烯酮的研究

本文制备了磁性Fe3O4-SiO₂-HPG-COOH复合载体作为固定化载体,共价固定辣根过氧化物酶(HRP),应用于玉米赤霉烯酮(ZEN)的降解。利用傅里叶红外光谱、X-射线衍射分析、扫描电镜等表征方法对固定化HRP进行表征,验证了HRP被成功固定在载体上。制备的纳米级载体Fe3O4-SiO₂-HPG-COOH具有均匀的尺寸和形状,良好的分散性和较强的磁性,饱和磁化值为25.80 emu/g,平均粒径为103.15 nm。与游离酶相比,固定化HRP具有更高的耐酸碱性和热稳定性,最适pH值从6.5提高到7.0,最适温度从30 ℃提升到35 ℃。将磁性固定化HRP应用于ZEN降解,利用单因素实验,探究反应温度、过氧化氢浓度、溶液pH值和反应时间与ZEN降解率的关系。结果表明:在反应温度35 ℃,过氧化氢浓度26 mmol/L,溶液pH 7.0,反应时间480 min条件下,ZEN的脱除效率为68%,固定化HRP具有良好的重复使用性,循环5次后相对酶活力仍保持在79.85%以上。研究表明磁性固定化HRP对ZEN具有良好的降解能力。     

辣根过氧化物印迹酶的活性和动力学研究

对辣根过氧化物酶(HRP)进行了生物印迹,并对影响印迹酶活性的因素和印迹后酶的动力学进行了研究。结果表明,印迹酶比游离酶催化活性提高了约6倍,催化效率增加约10倍,Km值减小约3倍。     

辣根过氧化物酶基因真核表达载体的构建

从辣根侧根中提取总RNA,以OligodT(18)为引物,通过反转录获得了辣根总mRNA的cDNA。以获得的cDNA为模板,利用设计的一对特异寡核苷酸引物P1和P2进行PCR扩增,得到了辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP,EC1.11.1.7)同功酶C2的结构基因(hrpC2)。将hrpC2与真核表达质粒载体pPICZα-A分别用限制性内切酶EcoRI和Xbal双酶切后连接,构建了重组质粒表达载体pPICZα-A-hrpC2。将pPICZα-A-hrpC2转化大肠杆菌筛选阳性克隆并测序。测序结果显示,pPICZα-A-hrpC2重组质粒构建成功。利用BlastN程序进行DNA序列分析,显示该序列为目的ORF框,无移码突变;与Fujiyama.K,Takemura.H等报道的hrpC2序列[D90115.1]有95%的同源性。     

辣根过氧化物酶基因真核表达载体的构建

从辣根侧根中提取总RNA,以OligodT（18）为引物,通过反转录获得了辣根总mRNA的cDNA。以获得的cDNA为模板,利用设计的一对特异寡核苷酸引物P1和P2进行PCR扩增,得到了辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP,EC1.11.1.7）同功酶C2的结构基因（hrpC2）。将hrpC2与真核表达质粒载体pPICZα-A分别用限制性内切酶EcoRI和Xbal双酶切后连接,构建了重组质粒表达载体pPICZα-A-hrpC2。将pPICZα-A-hrpC2转化大肠杆菌筛选阳性克隆并测序。测序结果显示,pPICZα-A-hrpC2重组质粒构建成功。利用BlastN程序进行DNA序列分析,显示该序列为目的ORF框,无移码突变;与Fujiyama.K,Takemura.H等报道的hrpC2序列[D90115.1]有95%的同源性。      

超高压处理对辣根过氧化物酶二级结构及其活力的影响

本文研究了超高压处理对辣根过氧化物酶活力的影响，测定了其CD谱，并分析了酶的二级结构与酶活力的关系。试验压力为0.1～500MPa，温度为20～60℃，保压时间为10min，酶溶液pH7．0。试验结果表明：(1)在处理温度为40℃、保压时间为10min和酶溶液pH7．0的条件下，压力对酶活力有显著影响；在100MPa附近的低压处理时，酶活力会反常升高；大于400MPa处理时，酶活力下降趋势缓慢。(2)在处理压力为500MPa、保压时间为10min、酶溶液pH7．0条件下，在40℃以下的温度范围内，酶的活力下降趋势缓慢：40℃以后，酶活力随温度升高下降迅速。(3)辣根过氧化物酶的活力与β-折叠的含量密切相关；超高压处理将降低酶构象中的β-折叠构象比例，从而使酶失活；温度协同超高压处理将加剧β-折叠的含量的下降，从而加速辣根过氧化物酶活力的降低。     

用辣根过氧化物酶生物传感器测定啤酒中的过氧化氢

用一种新型的壳聚糖(CS)/聚乙烯吡咯烷酮(PVP)复合膜固定辣根过氧化物酶(HRP),以乙二醛作交联剂,二茂铁(Fc)作媒介体,制备过氧化氢生物传感器。采用循环伏安法对该传感器的性能进行研究。结果表明,传感器在H2O2浓度为3.00×10-8～3.00×10-4 mol/L的范围内具有良好的线性相关性。使用SBA-50生物传感分析仪测定啤酒中的H2O2,回收率为97.6%～101.8%。     

固定化过氧化物酶对生牛奶的保鲜研究

在常温下采集和运输鲜奶，因保鲜不好常会造成大量的鲜奶变质，而采用固定化过氧化氢酶保鲜技术对生牛奶保鲜，具有高效、安全、低耗、使用等特点，是一种值得推广的牛奶保鲜新方法。     

辣根过氧化物酶催化氧化法测定食品中没食子酸丙酯

建立了利用辣根过氧化物酶催化氧化测定食品中没食子酸丙酯的方法。测定范围为5μg/mL～30μg/mL,检出限为1.25μg/mL,考察了缓冲溶液的酸度、试剂用量以及温度等实验参数并讨论了共存离子对测定的影响。本方法简单、测定快速,容易操作。     

聚中性红辣根过氧化物酶传感器测定啤酒中的过氧化氢

制备了以电子媒介体聚中性红固定辣根过氧化物酶(HRP)的生物传感器,采用循环伏安法对该传感器的性能进行了研究。结果表明,辣根过氧化物酶在该电极上实现了稳定的直接电子转移反应,传感器在H2O2浓度为3.18×10-8～3.18×10-3mol/L的范围内具有良好的线性相关性,检出限为6.36×10-9mol/L。应用于啤酒中H2O2的测定,回收率为88.5%～98.6%。     

过氧化物酶在蔗汁澄清工艺中除酚脱色的研究

本文研究了pH值、温度、H2O2用量及辣根过氧化物酶(HRP)用量等因素对辣根过氧化物酶催化H2O2氧化多元酚类的影响,并分别用HRP处理亚硫酸法糖厂的混合汁、清汁、糖浆,考察其对糖汁的除酚脱色效果。试验结果表明,HRP催化H2O2氧化处理糖汁具有明显的除酚脱色作用。     

牛乳的过氧化物酶处理与凝固型酸奶品质的变化

利用辣根过氧化物酶和阿魏酸处理牛乳并制备凝固型酸奶,采用质构仪和流变仪分别对不同酸奶样品的质构和流变特性进行对比研究。研究结果表明,辣根过氧化物酶、阿魏酸和明胶的添加对酸奶样品的主要成分组成没有影响,但对酸奶质构和流变特性的影响较大。与对照样相比,添加明胶、添加酶和阿魏酸、添加酶酸奶样品的硬度分别增加38.03%、34.07%和17.08%,黏度分别增加45.13%、40.85%和28.36%,而乳清析出率分别降低12.02%、6.28%和3.41%。同时,酸奶的表观黏度、触变性和粘弹性也都增加,增幅最大者为添加明胶酸奶样品,其次是添加酶和阿魏酸的酸奶样品,增幅最小的是添加酶的酸奶样品。研究结果显示利用辣根过氧化物酶、阿魏酸处理牛乳可以改善凝固型酸奶的品质。     

高压脉冲电场对辣根过氧化物酶活性及构象的影响效果

本实验旨在研究高压脉冲电场(PEF)对辣根过氧化物酶(HRP)的活性及酶构象的影响效果。结果显示:HRP的活性随电场强度的增强和脉冲处理数的增加而降低。在25kV/cm、207个脉冲和22kV/cm、1214个脉冲的时候,HRP的活性分别降低了14.3%和33.2%。PEF处理后的酶液在4℃下贮藏24h和48h后,HRP的活性呈缓慢下降。圆二色谱和荧光光谱分析表明PEF处理后HRP的蛋白构象发生了改变。PEF和热处理后HRP蛋白二级结构的平均摩尔椭圆率都发生了变化,α-螺旋含量分别下降了29.3%和57.7%。荧光光谱分析表明HRP蛋白的荧光强度在PEF处理后也发生了改变。     

Gelation and In Vitro Digestibility of Soybean Protein Isolate Treated by a Ternary System Containing Horseradish Peroxidase,Glucose Oxidase,and Glucose

The aim of the present study was to investigate the potential application of a ternary system containing horseradish peroxidase, glucose oxidase, and glucose for the oxidative cross-linking of soybean protein isolate. Protein content, reaction temperature, and original pH were fixed at 30 g/L, 37°C, and 7.0, while suitable glucose, glucose oxidase, horseradish peroxidase addition, and reaction time selected from single factor trials for the one-step treatment were 0.1 mmol, 4.0 U, 200 U/g protein, and 3 h, respectively. In the two-step treatment, glucose, glucose oxidase, and horseradish peroxidase addition were the same, but a reaction time of 1 or 2 h was used for the glucose oxidase or horseradish peroxidase treatment. Two modified soybean protein isolates obtained by the one- and two-step treatment contained some protein polymers, had relative dityrosine content of 414 and 381, respectively, and showed lower in vitro digestibility and less free sulfhydryl than the control soybean protein isolate. During acidification induced by glucono-δ-lactone, the modified soybean protein isolates showed shorter gelation time (57 and 61 versus 72 min), lower loss tangent and gelation point temperature (52.9 and 53.2 versus 62.7°C) but higher final storage modulus than the control soybean protein isolate. The acidified gels prepared from the modified soybean protein isolates also exhibited enhanced hardness, springiness, cohesiveness, and chewiness, and finer microstructural features. The ternary system was capable of treating protein ingredients to improve their gelation properties.     

大豆过氧化物酶研究进展

大豆过氧化物酶是从大豆中提取出来的一种Ⅲ类过氧化物酶，其结构与辣根过氧化物酶相似，但热稳定性和催化活性都明显高于辣根过氧化物酶。在本文中我们对大豆过氧化物酶的结构特点、分离纯化及应用进展进行了概括，并对今后大豆过氧化物酶的研究做了展望。     

辣根过氧化物酶催化表面修饰聚酰亚胺纤维及其润湿功能性

为了进一步提高聚酰亚胺(PI)纤维的润湿性及其在水介质中的分散性,本研究首先探究了在辣根过氧化物酶(HRP)催化作用下在PI纤维表面生长磷酸单酯长链(PMOEs)结构,比较了表面修饰前后纤维在水介质中的分散稳定性及纤维对极性溶剂的接触角。采用扫描电子显微镜(SEM)、原子力显微镜(AFM)和X射线光电子能谱仪(XPS)对纤维表面的物理和化学结构变化进行了分析,通过热重分析仪(TG)和X射线衍射仪(XRD)对纤维的热学性能和结晶性能进行了表征,并对纤维成纸孔径分布变化进行了分析。结果表明,在HRP催化作用下通过自由基反应在PI纤维表面成功生长出了PMOEs网状结构并得到PI-PMOEs纤维,与PI纤维相比,当PMOE加入量为25. 6 g时,PI-PMOEs-3纤维与去离子水的接触角降低了13. 6°,与乙醇的接触角降低了9. 9°,纤维分散度增加了40个百分点,纤维的亲水性能得到显著改善。     

电场对辣根过氧化物酶紫外-可见光谱及其活力指数的影响

用不同电场强度处理辣根过氧化物酶,测试电场处理前后的紫外-可见光谱和酶的活力指数。结果表明:辣根过氧化物酶紫外-可见光谱发生了明显变化,说明电场可以改变酶的构象;一定电场强度可使酶活力指数增加,活力指数的增加可能是由酶构象的改变引起。研究结果对解释静电宏观生物效应具有重要意义。     

纳米银/辣根过氧化物酶自组装免疫传感器测定蜂蜜中的青霉素

利用层层自组装技术,成功将氨基苯磺酸、纳米银和辣根过氧化物酶标记的青霉素抗体固定在玻碳电极表面。实现了聚氨基苯磺酸/纳米银放大型电化学免疫传感器的制备,建立了一种高灵敏度检测青霉素的电化学分析方法。辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化还原3,4-二氨基苯甲酸产生电流信号,进行电化学检测,实现蜂蜜中青霉素的定量测定。同时对测定缓冲液的pH、反应温度和时间等进行了优化,最佳条件下,在0.05~6.00μg/L浓度范围内传感器响应电流和青霉素浓度呈良好线性关系,线性方程为Δi(10-5A)=-0.7265C+4.1522,相关系数为0.9946,检出限为1.02μg/L。同时利用该传感器对蜂蜜样品中的青霉素进行了测定,测定结果与酶联免疫法进行了对比,可知该法测定青霉素灵敏度高,具有良好的选择性和稳定性,适用于检测蜂蜜样品中的青霉素残留。