施用细菌菌株(WB5)对烟草特有亚硝胺含量变化的初步研究

分别对移栽成活的烟株进行细菌灌根处理,烟株砍收时进行细菌喷洒烟叶处理,并以砍收时进行清水喷洒烟叶为对照的田间小区试验,晾制期间对烟叶样品进行4种烟草特有亚硝胺测定,检测整个晾制期间烟叶中TSNA含量的动态变化.结果表明,晾制前期(晾制20d以前),烟叶中TSNA含量比较低且变化幅度较小,灌根处理的TSNA含量稍高;晾制中期(20～30d)期间,烟叶中TSNA含量都较高,灌根处理烟叶的TSNA含量最高;晾制末期,灌根和喷洒处理烟叶中TSNA含量明显降低,其中灌根处理比同一时期对照烟叶中TSNA含量降低了50.98%,喷洒处理比同一时期对照烟叶中TSNA含量降低了81.32%.     

利用细菌降低白肋烟叶TSNA

在晾烟中,人们认为TSNA是由烟叶调制期间硝酸盐经微生物还原形成的亚硝酸盐与烟草生物碱反应形成的。由此考虑可以通过利用反硝化细菌减少烟叶中的亚硝酸盐来抑制TSNA的形成,使亚硝酸盐还原为氮,以及可以利用TSNA分解细菌减少调制后烟叶中已有的TSNA。本实验利用来自烟草植株的2种细菌对TSNA含量的影响进行了研究。使用反硝化细菌中的一种名为Agrobacteriumradiobacter LG77的隔离种群分3次喷洒在白肋烟烟叶上,喷洒时间分别是烟叶收获后立即喷洒,收获3 d后和收获8 d后喷洒,然后进行调制。用未经细菌处理的调制烟叶组作为对照。与…     

硝态氮含量对烟叶高温贮藏过程中TSNA形成的影响

为研究硝态氮含量对调制后烟叶高温贮藏过程中TSNA形成的影响,设计白肋烟田间施氮肥量试验、室内对烤烟烟叶添加不同浓度硝酸盐试验,并对白肋烟和烤烟的叶片和烟梗分别取样,得到硝态氮含量差异较大样品。将样品在高温(45℃)条件下贮藏15 d,以在低温(10℃)条件下贮藏作为对照,测定所有样品的硝态氮和TSNA含量。结果表明:烟叶中硝态氮含量与施氮量呈正相关;新调制的烟叶硝态氮含量与TSNAs相关性较小,在高温贮藏15 d后,其相关性显著增加,烟叶硝态氮含量与高温贮藏期间TSNAs的增加量呈显著正相关;白肋烟和烤烟均表现出烟叶主脉中的硝态氮含量远高于叶片,高温贮藏15 d后,主脉TSNA增加量显著高于叶片;在人工添加硝酸盐的试验中,随添加硝酸盐量的增加,烤烟烟叶硝态氮含量及高温贮藏后TSNA含量显著增加。以上说明硝态氮含量与高温贮藏过程中TSNAs的形成有密切关系,通过农业措施降低烟叶硝态氮积累是减少贮藏过程中TSNA形成的有效途径。     

烟草贮藏过程中TSNA含量变化及对高温处理的响应

收集了我国云南宾川白肋烟和烤烟,四川达州白肋烟和晒烟,河南宝丰烤烟晾制后的上二棚叶为供试样品,在1年的自然贮藏过程中每隔4个月分别对白肋烟和晒烟取样,将三种不同类型的烟草进行45℃温度处理后分别取样,所取样品均进行TSNA总量及各成分含量的测定。结果表明,白肋烟和晒烟中的TSNA总量及各成分含量均随着贮藏时间的增加而增加,且在外界温度较高即4至8个月时,增加幅度最为显著,而各组分中NNN的含量变化最为明显,其中尤以白肋烟的变化幅度更甚。不同类型烟草中,硝酸盐含量较低的烤烟中TSNA总量及各成分含量很低且在45℃处理前后的变化不明显,硝酸盐含量较高的白肋烟和晒烟的TSNA总量及各成分含量也较高,在45℃处理后迅速增加,且其硝酸盐的含量均有所下降,亚硝酸盐含量明显升高。      

不同氮素形态对烟草硝态氮含量和TSNA形成的影响

于2013 年设置盆栽试验研究不同硝态氮和铵态氮比例对白肋烟和烤烟硝态氮含量、常规化学成分及高温贮藏过程TSNA 形成的影响。结果表明:①白肋烟施用硝态氮肥比例越高,烟叶的硝态氮含量越高,高温贮藏后4 种TSNA 含量和TSNA总量也越高,晾制过程中硝态氮含量显著增加。在45℃条件下贮藏15 d 后的白肋烟四种TSNA 含量及其总量大幅高于低温贮藏烟叶,且TSNAs 的增加量均随硝态氮比例的增加而增加。②烤烟成熟过程和调制过程硝态氮含量则呈降低趋势,调制后各处理烟叶含有较低的硝态氮含量,烤烟烟叶硝态氮含量以及高温贮藏前后TSNA 含量与施用硝态氮比例无明显相关性,其中中部叶施硝态氮肥和铵态氮肥各50% 处理TSNA 总量最低,上部叶施100% 硝态氮肥处理TSNA 总量最低。③随着铵态氮比例的增加,白肋烟烟碱、总氮和蛋白质含量显著增加,烤烟化学成分变化缺乏规律性,但以施硝态氮肥和铵态氮肥各50% 处理烟叶的糖分含量较高,整体化学成分协调性较好。      

不同产地和品种白肋烟烟草特有亚硝胺与前体物关系

收集了我国4个白肋烟产区33份白肋烟晾制后上部叶样品,并以美国、马拉维样品为对照,测定了烟草特有亚硝胺(TS-NA)、生物碱和硝酸盐含量,以揭示TSNA含量与前体物之间的关系。结果表明,四川达州和云南宾川白肋烟TSNA含量水平较低,分别与美国和马拉维相当,不同产区间NNN和总TSNA含量差异较大,NNK、NAT和NAB含量差异相对较小。烟碱转化导致降烟碱含量升高是造成国内一些产区NNN和总TSNA含量较高的主要原因,随着总TSNA含量的增加,NNN所占比例增大。烟叶降烟碱含量、烟碱转化率与NNN和总TSNA含量呈极显著的正相关关系。NNK、NAT、NAB含量与硝酸盐含量呈显著正相关,同一产区不同烟叶样品NNK含量与硝酸盐含量呈极显著的正相关。品种间比较可知,鄂烟1号和鄂烟3号烟碱转化率较高,是导致其TS-NA含量升高的主要原因。     

非硝酸盐还原细菌K18 降低TSNA 机理的初步研究

对21 株烟草内生细菌还原硝酸盐和亚硝酸盐的能力进行检测,验证了非硝酸盐还原细菌K18 的内生性,并鉴定 为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)。结果表明,用K18 菌株对烟草进行移栽前浸根、团棵期喷施、旺长期喷施及采前喷施处理,可有效降低烟叶中TSNA 含量,降低程度与烟草品种有关。温室中TSNA 的降低作用与烟叶的细菌数量相关,K18 处理的云烟87,团棵期和旺长期烟叶细菌数量增高,TSNA 分别降低23.7%和9.1%;云烟87 和TN86 经K18 处理后,NN 降低百分率最高,而且对TN86 各组分的降低百分率高于云烟87。对于大田栽培的云烟87,旺长期喷雾和浸根处理可显著降低烟叶中TSNA 含量,与清水对照比较,分别使TSNA 含量降低了50.1%和39.6%。对于大田栽培的TN86,旺长期喷雾、调制期喷雾和浸根处理使烟叶中TSNA 含量分别降低52.6%, 51.1%和44.7%。     

通过可控环境调制减少晾烟中的亚硝胺

由于调制环境的差异，晾烟中烟草特有亚硝胺（TSNA）的浓度每年都有所不同。在特定晾制调制环境下（特别是高湿度环境），当叶片刚开始由黄色转变为褐色时，烟叶中的高含量硝酸盐通过细菌活动可能会转化为亚硝酸盐。在随后的着色阶段，亚硝酸盐和次生生物碱可能会结合形成TSNAs（Wahlberg，1999）。由于调制环境时刻都可能有变化，因此有理由相信只能通过对晾制环境的控制，     

白肋烟烟叶含水率与高温贮藏过程中TSNA形成的关系

对不同含水率的白肋烟烟叶进行高温贮藏试验,并分别向高含水率和低含水率烟叶添加硝酸盐和亚硝酸盐后高温贮藏,测定贮藏前后烟叶的TSNA含量。结果表明:1)经45℃高温贮藏15 d后,含水率越高的烟叶,TSNA含量越低,含水率超过17.5%后趋于稳定。2)细化梯度试验中,低含水率烟叶经45℃高温贮藏15 d后,随着烟叶含水率从7.7%增加到15.3%,四种TSNA含量和TSNA总量逐渐降低,烟叶含水率高于15.3%后,TSNA总量趋于稳定。3)添加亚硝酸盐再经60℃高温贮藏15 d的高含水率烟叶和低含水率烟叶TSNA含量均大幅度增加,而添加硝酸盐的高含水率烟叶处理TSNA含量增幅较小,低含水率烟叶处理TSNA含量增幅很大,所以低含水率烟叶硝态氮比高含水率烟叶硝态氮更易生成亚硝酸等氮氧化物是造成高温贮藏过程中TSNAs大量形成的主要原因。研究认为,在保证烟叶不霉变的前提下适当增加贮藏湿度有利于减少贮藏过程TSNAs的形成。     

晾制期间白肋烟烟叶含氮化合物的变化

通过人工调控晾房湿度,对白肋烟晾制期间高、中、低3种湿度条件下烟叶含氮化合物(蛋白质、烟碱和叶绿素)的变化进行了研究。结果表明①烟叶中蛋白质含量的变化主要发生在晾制前期,中湿处理的烟叶蛋白质含量下降趋势较为明显,在变黄期仍有下降趋势。而高湿和低湿处理的烟叶蛋白质含量下降趋势相对平缓,仅在凋萎期内表现明显。高湿和低湿的环境条件均不利于烟叶中蛋白质的降解,晾制结束后蛋白质含量偏高;②在凋萎期高湿和低湿处理的上部和中部烟叶烟碱含量呈上升的趋势,中湿处理的白肋烟进入变黄期时烟碱含量还继续呈现上升趋势。与上部和中部烟叶相比,下部烟叶烟碱含量较低,晾制过程中烟碱变化较缓慢,在晾制后期各部位均稍有下降;③在凋萎期高湿和低湿处理的白肋烟上部和中部烟叶叶绿素含量呈明显下降的趋势,在凋萎期和变黄期中湿处理的上部和中部烟叶的叶绿素含量均有明显下降趋势。下部烟叶的叶绿素含量较低,在晾制期间变化不大。     

四川雪茄烟叶在成熟与晾制和发酵过程中烟草特有亚硝胺的积累动态

为明确雪茄烟叶在成熟、晾制及发酵过程中烟草特有亚硝胺（TSNAs）的积累及变化规律,以德雪3号（茄衣）和什烟1号（茄芯）为试验材料,在烟叶成熟、晾制及发酵环节对两种烟叶的中部叶及上部叶取样,并测定烟叶中的TSNAs含量（质量分数）。结果表明,德雪3号在3个生产环节TSNAs的积累量分别为153.53~208.26、574.10~597.50和647.40~1 090.73 ng/g。什烟1号在3个生产环节TSNAs的积累量分别为305.63~526.81、1 700.45~2 494.93和1 529.60~2 373.37 ng/g。两种雪茄烟叶TSNAs各组分和TSNAs总量在不同阶段积累差异较小,均表现为烟叶成熟前积累较少,调制和发酵阶段积累较多。在晾制和发酵环节茄衣品种德雪3号TSNAs总量的积累比例分别为30.65%~42.73%和46.29%~58.23%,茄芯品种什烟1号TSNAs总量的积累比例分别为45.26%~48.22%和40.71%~45.87%。随着烟叶晾制和发酵过程的推进,烟叶TSNAs含量呈现逐渐增加的趋势。因此,晾制和发酵时期是雪茄烟叶TSNAs积累的重要时期,也是调控其积累的关键时期。      

中美部分品牌烟草制品TSNA及其前体物的含量和关系

[目的]初步了解中美市售部分烟草制品TSNA及其前体物的含量及关系,为雪茄安全性研究提供参考.[方法]收集了中美市售卷烟及雪茄共37款烟草制品,对其TSNA以及其前体物含量进行测定,并进行相关分析.[结果](1)烟碱转化率美国雪茄最高,平均5.50％,中式卷烟样本烟碱转化率最低,平均为2.83％,且与美国雪茄样本存在显...     

烟碱转化率与卷烟感官评吸品质和烟气TSNA含量的关系

用具有不同烟碱向降烟碱转化能力的白肋烟鄂烟一号上部叶(2003年)和中部叶(2004年)分别卷制试验卷烟,研究了烟碱转化率与卷烟感官评吸品质和烟丝及烟气中TSNA含量的关系。同一年份的卷烟样品间总生物碱含量无显著差异,烟碱含量和降烟碱含量呈相反趋势变化,从而形成样品间烟碱转化率的梯度差异。感官评吸由5-6名评吸专家组成的评吸小组进行。结果表明,随着烟碱转化率的增高,白肋烟风格程度直线下降,香气质逐渐下降,香气量减少,烟气浓度变淡,生理强度下降,杂气有增加的趋势,余味变劣,口腔残余加重,但刺激性有减小的趋势。两年卷烟样品基本表现相同的趋势,但2003年样品,由于生物碱水平高,不同样品间烟碱转化率的幅度较大,所以各项评吸指标的变化更为明显。随着烟碱转化水平的增高,烟丝和烟气亚硝基降烟碱(NNN)含量和总的烟草特有亚硝胺(TSNA)含量大幅增加,而其它3种烟草特有亚硝胺含量无较大变化。      

烟草调制过程中相关物质的测定

为提高烟叶有益成分,降低烟叶有害成分提供依据,采用相同的栽培调制技术,对不同的烟草品种进行了系统的对比研究,分别测定了7个烟草品种的鲜,干叶片厚度,重量和表面蜡质含量,并测定了这些样品在调制后的烟碱,次生物碱,硝态氮含量,烟草特有亚硝胺(TSNA)总量及NNN,NAT,NAB,NNK含量.     

白肋烟低TSNA含量的品种筛选初探

研究了不同白肋烟品种的TSNA含量及组成、各组成成分之间以及它们与烟碱和总氮的关系。结果表明白肋烟中的TSNA主要以N-亚硝基去甲基烟碱（NNN）的形态存在,在TSNA总量中NNN含量所占比重最大,N-亚硝基新烟碱（NAT）和N-亚硝基假木贼碱（NAB）所占比重次之,4-（N-甲基-N-亚硝胺）-1（3-吡啶基）-丁酮（NNK）所占比重最小。TSNA含量在不同品种之间差异比较明显,可以将参试的15个品种分为3类,其中B21为高TSNA含量品种,Ky8959、Tn97、Ky907、20＃、21＃为低TSNA含量品种,其余品种为中等含量品种。TSNA和NNN与烟碱、总氮呈负相关,TSNA与NNN、NAT+NAB、NNK,NAT+NAB与烟碱和总氮都呈正相关,但是除了TSNA与NNN的相关性达到极显著外,其余的相关性均不显著。总之通过筛选来获得低TSNA含量的品种是可能的。      

烟叶生物碱组成差异对白肋烟高温贮藏前后TSNAs形成的影响

本研究选用TN86的不同烟碱转化株系,在相同的栽培、田间管理以及晾制方式下,选取生物碱组成差异明显的烟叶样品进行高温贮藏,测定贮藏前后烟叶TSNAs含量,探究贮藏过程中TSNAs积累及与生物碱含量的关系。结果表明:贮藏前取自90株烟叶的4类生物碱株间差异明显,且以烟碱和降烟碱株间差异最大。控制待测样品总生物碱、NO₃-N和NO₂-N含量相近,45℃高温贮藏12 d后,TSNAs含量远高于贮藏前。与贮藏前相似,NNN和NNK在贮藏期间的增加量分别与其前体物降烟碱和烟碱含量呈极显著正相关。随着降烟碱含量的提高,仲胺类降烟碱形成的NNN增加量显著大于叔胺类烟碱形成的NNK的减少量,使总TSNAs含量增加。相关分析和逐步回归的结果显示,烟碱转化导致降烟碱比例增加是影响高温贮藏后TSNAs形成的主要因素。在烟叶总生物碱、硝态氮和亚硝态氮含量相近的条件下,生物碱组成差异对贮藏过程中TSNAs积累有重要影响。      

TSNAs降解菌05-5402的筛选及其降解特性研究

为分离筛选能够降解TSNAs的微生物,探讨其降解特性,本研究采用替代底物平板稀释法分离和靶标底物点接法筛选相结合的分离筛选策略,筛选到能够利用NNK为唯一碳源和氮源而生长的细菌05-5402菌株,鉴定为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）。白肋烟浸提液经05-5402菌株处理后,TSNAs含量降低了22.2%,其中NNK和NAT的含量分别降低了47.4%和55.7%。晾制的烟叶经05-5402菌株处理后,TSNAs降低17.3%,其中,NAB的含量降低了52.2%。发酵过程中的烟丝经05-5402菌株处理,TSNAs含量下降12.2%。05-5402菌株能实现烟草特有亚硝胺的高效定向降解,具有较大的应用潜力。      

白肋烟烟碱转化及烟草特有亚硝胺形成

从烟草特有亚硝胺形成的化学,烟草特有亚硝胺与前体物的关系,调制过程、贮藏过程中烟草特有亚硝胺的形成,遗传改良降低烟碱转化和烟草特有亚硝胺,生物技术抑制烟碱转化降低烟草特有亚硝胺等方面综述了最新研究进展.     

不同氮素形态和用量对烤烟硝酸盐和亚硝酸盐含量的影响

研究了不同氮素形态和用量对烤烟硝态氮含量的影响.结果表明:鲜烟叶硝酸盐含量随硝态氮比例和施氮量的增加而呈现出上升的趋势,其含量相应低于烤后烟叶,并与烤后烟叶的硝酸盐和亚硝酸盐含量之间均存在着极显著的正相关关系;烤后烟叶硝态氮含量与硝态氮比例和施氮量之间均呈显著或极显著正相关,硝酸盐和亚硝酸盐含量的变化规律在不同部位的烟叶间表现一致,二者之间的相关也达到极显著水平,但中部叶的硝态氮含量明显高于上部叶.此外,烤后烟叶烟碱和总氮含量与施氮量均呈极显著正相关,与硝态氮比例的相关则未达显著水平.