增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24体外杀伤肝癌细胞的研究

研究溶瘤腺病毒SG511携带由热激蛋白70(hsp70)启动子调控IL-24构成的增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24对人肝癌细胞株的体外杀伤效果.实验采用ELISA法检测不同MOI值感染肝癌细胞SMMC-7721和Hep3B细胞3 d后IL-24的表达;MTT法检测SG511、Ad11-IL24以及SG511-pHSP70-IL24对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B以及人正常成纤维细胞株MRC-5及BJ增殖的抑制作用;并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况.ELISA检测到SG511-pHSP70-IL24感染SMMC-7721和Hep3B细胞后,IL-24有明显表达;MTT实验结果表明SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.同时结晶紫实验也证明了SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24相比腺病毒Ad11-IL24以及SG511,对肝癌细胞有较明显的生长抑制和凋亡诱导作用.     

典型城市夏季碳组分污染特征与来源解析

为了研究京津冀地区典型城市PM2.5及其碳组分的污染特征和来源,选取北京和唐山具有代表性的5个监测点于2012年7月3日至30日进行了PM2.5样品采集.分析研究了PM2.5、有机碳(OC)和元素碳(EC)的质量浓度及变化特征,采用OC/EC最小比值法估算了二次有机碳(SOC)的质量浓度,并使用因子分析法解析了碳组分来源.结果表明:采样期间北京市PM2.5、OC和EC质量浓度分别为76.2±38.5μg/m3、7.0±2.2μg/m3和3.0±1.4μg/m3,均低于唐山的97.7±38.8μg/m3、11.7±6.3μg/m3和7.0±5.0μg/m3;北京灰霾天气PM2.5、OC和EC浓度分别为非霾天气的2.0、1.2和1.8倍,唐山相应为1.4、1.5和1.6倍;北京和唐山SOC质量浓度分别为3.0μg/m3和5.1μg/m3,分别占OC质量浓度的42.9%和43.6%;北京和唐山PM2.5中碳组分主要来源于燃煤和机动车尾气,其贡献量均超过75%,因此要进一步加强清洁能源替代、控制机动车保有量的增长及提高车用油质量.     

IRES连接双基因在溶瘤腺病毒中的抗肝癌作用

单基因治疗癌症可能杀伤力还嫌不够，故使用两个基因在癌症治疗中具有重要价值。利用IRES将双基因连接起来在溶瘤腺病毒中表达，构成ZD55-IL-24-IRES-TRAIL。研究发现，该病毒在多种肝癌细胞中能有效地介导外源双基因表达，并在很大程度上杀死肿瘤细胞，而对正常细胞WI38无明显杀伤力。并且，该病毒可以有效地抑制体内肿瘤生长，有的肿瘤甚至完全消失。     

K562/ADR细胞的5型腺病毒感染率研究

腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究.比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制.流式细胞术及荧光显微镜观察,结果显示,5型腺病毒对K562/ADR的感染效率明显高于K562;Real time PCR定量分析表明K562/ADR细胞株表面的CAR表达水平约为K562的1.33倍(P<0.05),而整合素αν表达则是K562的4.36倍(P<0.01).     

腺病毒E1区对病毒生产能力影响的初步研究

腺病毒载体具有高效转染和低细胞毒性的特点,已成为基因治疗研究中应用最广泛的载体之一.作为最新一代腺病毒载体,第三代腺病毒载体由于其生产效率低下,难以生产临床使用的治疗剂量,所以一直没有临床实验的结果报道.为了提高腺病毒的生产效率,文章研究E1区对腺病毒在CA293细胞中生产能力的影响,结果发现E1区基因拷贝数和蛋白表达与腺病毒的产量呈正相关,而不影响病毒DNA在CA293中的复制能力,推测E1区影响病毒DNA复制后的装配和释放过程,为改进腺病毒的生产方法提供理论基础.     

溶瘤腺病毒与抗癌药物联合治疗肝肿瘤的可行性研究

通过抗肿瘤药物PHA-767491联合溶瘤腺病毒AdCN305-HcRed开展针对肝癌细胞系HepG2的杀伤效率研究.通过PHA-767491单独及其与AdCN305-HcRed联合共同杀伤肝癌细胞来探究细胞周期抑制性化疗药物与溶瘤腺病毒联合使用的可行性.细胞杀伤实验结果发现PHA-767491能抑制溶瘤腺病毒在肝肿瘤细胞HepG2内的增殖,从而影响溶瘤腺病毒的增殖溶瘤作用.结果表明:溶瘤腺病毒与抑制细胞周期的化疗药物联合在肝肿瘤中的应用需要慎重.     

自表达SIRPα-Fc融合蛋白对T细胞功能的影响

探讨携带SIRPα-Fc(SF)融合基因蛋白基因的重组腺病毒Ad35-SF感染T细胞后对T细胞功能的影响。腺病毒Ad35-SF感染Jurkat T细胞后,通过Western blotting及ELISA方法检测细胞上清中SF融合蛋白的大小与表达量;通过流式分析技术检测细胞表面CD47的封闭情况;通过CCK8方法检测细胞的增殖与对肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明,Ad35-SF构建成功,其感染Jurkat T细胞后,能在其内表达并分泌产生大小约为48kD的SF蛋白,细胞上清中SF的表达量可到达19.1μg/mL。Ad35-SF(MOI=1)感染Jurkat细胞18h后,细胞CD47阳性比例从97.06%下降到15.32%;当Ad35-SF感染复数增加至5,10时,CD47阳性比率进一步降低至2.94%和1.73%。相对于空病毒对照组,Ad35-SF感染Jurkat细胞48h后其增殖效果提高了29%,对肝癌细胞株Hep 3B的杀伤作用提升25.6%(p0.01)。结果表明构建的重组腺病毒Ad35-SF能有效感染Jurkat细胞并在其内表达分泌SF蛋白,封闭细胞表面的CD47,同时显著提高Jurkat细胞的增殖能力和对肝癌细胞的杀伤作用。     

维生素C对内皮细胞和平滑肌细胞增殖的影响

药物洗脱支架(Drug-eluting stent,DES)释放抗增殖的药物来抑制平滑肌细胞(Smooth muscle cells,SMCs)增殖,阻止内膜增生。但这些药物不可避免地会延迟内皮化,因此有必要寻找合适的药物选择性的抑制SMC增殖,同时促进内皮细胞(Endothelial cells,ECs)增殖。维生素C(L-ascorbic acid,L-AA)是一种用于口服或是直接加入细胞培养的药物,因此实验中在培养过夜的EC和SMC细胞中加入浓度为300μg/mL的L-AA、浓度为100μg/mL的雷帕霉素(Sirolimus,SIR)、高糖培养基(Dulbeccos modified eagle medium,DMEM)、杜氏磷酸缓冲液(Dulbeccos phosphate buffered saline,DPBS)和乙醇各100μL,培养7d观察,结果表明:SIR能够抑制EC增殖,而L-AA能够显著促进EC的增殖,同时也能够抑制SMC的生长;在培养过夜的EC和SMC细胞中加入100μL不同浓度的L-AA(1、100、300、500μg/mL和1000μg/mL),培养7d后,1、100μg/mL和300μg/mL的L-AA有利于EC增殖,而500μg/mL和1000μg/mL的L-AA会抑制EC增殖,并且300μg/mL和500μg/mL的L-AA可以显著抑制SMC增殖。由此表明维生素C可以成为潜在的用于药物洗脱支架的药物。     

二氯乙酸钠联合ONYX-015对结肠癌细胞株的杀伤性研究

研究小分子药物二氯乙酸钠(dichloroacetate,DCA)联合ONYX-015对人结肠癌细胞株的体外杀伤效果,实验采用MTT法检测DCA、ONYX-015以及二者联合对结肠癌细胞株HCT116、SW620、HT29以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对联合处理的细胞进行凋亡形态学观察;通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况。实验结果表明:DCA联合ONYX-015处理4d后对结肠癌细胞株HCT116、SW620的增殖抑制率达到75%,对HT29也达到近54%的杀伤效率,并且联合治疗并未增加对人正常细胞株L02的毒性。同时结晶紫实验也证明联合治疗对肿瘤细胞的杀伤力要强于用DCA或ONYX-015单独处理。     

腺病毒介导的T细胞高效基因表达系统的构建

结合转基因修饰的手段,能有效提高细胞免疫治疗的疗效,但由于缺乏T细胞高活性表达系统,限制了该方法的应用。构建腺病毒介导的双荧光素酶启动子活性筛选系统,检测一系列常用强启动子(CMV、CMV(in)、CAG、EF1α及CASI)在T细胞株K562及Jurkat中的活性,发现EF1α启动子活性在T细胞株中的活性最高。在EF1α的基础上,增加mCMV增强子和hCMV增强子顺式作用元件,构成了2个新型嵌合型启动子CCEF及CCEF(in)。双荧光素酶检测系统检测结果表明,新构建的2个启动子在T细胞中的活性高于EF1α,且两者相比CCEF启动子活性更高(p0.05)。利用CCEF启动子控制PD-1全长抗体基因,并将此表达框插入腺病毒基因组,构建重组腺病毒Ad-CCEF-anti-PD-1。通过Western blotting及ELISA方法检测病毒感染T细胞株后,抗体基因的表达效率。结果表明,Ad-CCEF-anti-PD-1感染T细胞后,PD-1抗体能在T细胞中正确表达,且表达量较高(K562中11.019μg/mL,Jurkat中9.078μg/mL),表明该腺病毒介导的T细胞高效的基因表达系统成功构建,具有良好的应用前景。     

氯胺磷与井冈霉素对草坪褐斑病菌联合毒力测定

在室内恒温的条件下,用菌落直径法和毒力实验分别测定了氯胺磷、井冈霉素及其5种配比的混剂对草坪褐斑病菌（Rhizoctonia solani AG-1-IB融合群）的菌丝抑制作用和毒力．结果表明：质量分数85％氯胺磷原药和质量分数5％井冈霉素水剂对草坪褐斑病病菌的抑菌浓度区间分别为51．2～2000μg／mL、4．9～20000μg／mL,ECso分别为476．7μg／mL、488．6μg／mL,85％氯胺磷原药对草坪褐斑病病菌的毒力大于质量分数5％井冈霉素水剂;该两种农药以2：1混合时的ECso为275．8μg／mL,其增效系数达到了1．74．     

水质净化芽孢杆菌的筛选及培养条件优化

从养殖池底的海泥筛选出两株具有净化水质的细菌T01、T02,对其进行生理生化鉴定,确定均为芽孢杆菌。对T01、T02及复合菌株(体积比1∶1)降解氨氮和亚硝酸盐氮能力进行测试,菌株T01、T02均具有降解氨氮和亚硝酸盐氮的能力。选择生长状况较好的T02进行培养条件优化,在葡萄糖10g/L、淀粉15g/L、蛋白胨5.0g/L、豆粕10g/L、磷酸氢二钾1.5g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁1.0g/L、碳酸钙1.0g/L的培养基条件下活菌数达到最高,为1.54×109 cfu/mL。在接种量1%、培养温度30℃、转速180r/min、装液量2/5时,活菌数达到最高,为1.63×109 cfu/mL。     

紫甘薯花色苷对人肝癌细胞HepG2的作用

以人肝癌细胞HepG2为模型研究紫甘薯花色苷的抗肿瘤活性.通过MTT实验检测紫甘薯花色苷对HepG2细胞的生长抑制作用,HE染色观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期变化.MTT结果表明,不同浓度的紫甘薯花色苷处理HepG2细胞24、48、72,h后,低浓度的紫甘薯花色苷促进肿瘤细胞的生长,高浓度的紫甘薯花色苷抑制肿瘤细胞的生长,800,μg/mL花色苷处理72,h抑制率高达80%.HE染色结果表明,正常HepG2细胞的细胞核和细胞质清晰可见,而加入花色苷后,出现细胞核固缩、染色质浓集于核膜表面、形成新月形致密小斑块、细胞膜形态变得不规则等凋亡的特征.流式细胞仪分析结果表明,花色苷能够促进肿瘤细胞的凋亡,且细胞的凋亡率随花色苷浓度的增加而增大.     

Selective Anti-Hepatoma Treated with Titanium Oxide Nanoparticles in vitro

1　ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｏｍｅｉｎｏｒｇａｎｉｃｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｅｘｈｉｂｉｔａｎａｎｏｂｉｏｌｏｇｉ ｃａｌｅｆｆｅｃｔ[1,2 ] ,ｆｏｒｅｘａｍｐｌｅ ,ｗｉｔｈｉｎａｃｅｒｔａｉｎｓｉｚｅ ,ｐａｒｔｉｃｌｅｓｃａｎａｆｆｅｃｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌ’ｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｓｕｃｈａｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ[3] .Ｓｏｆａｒ ,ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＴｉＯ2ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｏｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｈａｓｎｏｔｂｅｅｎｒｅｐｏｒ…     

阿霉素耐药的乳腺癌MCF-7／Adm细胞系的建立及其耐药特性

建立肿瘤耐药细胞系是研究肿瘤细胞的重要手段之一,也是探讨肿瘤多药耐药机制及其逆转的基础。采用大剂量间歇诱导法诱导 MCF-7细胞,建立 MCF-7/Adm耐药模型;MTT 法检测耐药倍数;流式细胞术检测MCF-7细胞和MCF-7/Adm细胞中阿霉素的积累量;real-time PCR检测MCF-7/Adm细胞中 A BCG2、A BCC1、A B-CB1基因的表达。结果显示,阿霉素抑制 MCF-7和 MCF-7/Adm 细胞存活的 IC50值分别为0．535μg/mL 和173.275μg/mL ,耐药倍数为324;MCF-7细胞中的阿霉素积累量较MCF-7/Adm明显高;MCF-7/Adm细胞中mR-NA水平 A BCB1基因表达明显上调,A BCG2和 A BCC1基因表达下调。成功获得对阿霉素耐药的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm ,为进一步研究乳腺癌多药耐药机制及其逆转提供有利工具,并且对乳腺癌化疗药物的筛选具有一定的意义。     

转移因子胶囊中多肽与核糖含量测定方法研究

研究了转移因子胶囊的多肽与核糖含量测定方法。分别对福林酚法和紫外-可见分光光度法测定转移因子胶囊多肽和核糖含量的方法进行了考察。福林酚法对牛血清白蛋白在30～300μg/m L范围内线性关系良好（r＝0．9990）,平均加样回收率为99．77％,RSD为1．31％;紫外-可见分光光度法对D-核糖2～10μg/mL范围内线性关系良好（ r＝0．9997）,平均加样回收率99．99％,RSD为1．02％。以上分析方法简便、快速、准确,可作为转移因子胶囊多肽与核糖含量分析的方法。     

离子浮选分光光度法测定水中痕量镉——计算机MSM法的应用

提出采用IBM-PC计算机调优的MSM法进行离子浮选分光光度法富集测定水中痕量镉离子,建立富集和测定镉离子浓度的最优化条件为1％SDS溶液5.60mL,0.02％5-Br-PADAP 11.30mL,无水乙醇1.00mL,氨性缓冲液(pH=11.0)22.5mL,N_2的流速0.035L/min。确定镉离子浓度的线性范围为0.00～0.05mg/L,回收率在95％～106％之间,相对标准偏差小于5％,镉离子的检出限为0.35μg/L。结果表明,方法可靠,重现性好,精密度、精确度和回收率均取得满意结果。     

双氯芬酸钠缓释微胶囊的制备与表征

以乙基纤维素为壁材,采用乳化-溶剂扩散技术制备双氯芬酸钠缓释微胶囊,通过考察包封率和载药量确定其制备工艺,并对微胶囊的形态和释放度等理化性能进行表征．结果表明,当有机相中乙基纤维素的质量浓度为3×10^-2g／mL,水相中乳化剂十二烷基硫酸钠的质量浓度为3×10^-3g／mL,双氯芬酸钠与乙基纤维素的投料比mEC：mDs为1：1,搅拌速度900r／min时制备出的微胶囊形态圆整,粒径范围6～24gm,药物包封率达25．12％,在人工肠液中可平稳缓释达8h．     

盐酸恩诺沙星对蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)的致毒效应研究

为探讨水产养殖中氟喹诺酮类药物残留对水生生物的毒性效应,研究了盐酸恩诺沙星对蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)的急性毒性。结果显示,各药物质量浓度组对蛋白核小球藻的生长均有抑制作用,并且随药物处理质量浓度的增大,藻细胞的生长逐渐降低,显示出明显的剂量—效应关系。盐酸恩诺沙星对蛋白核小球藻的24,48,72,96h的EC50值分别为184.83,341.07,457.84,171.38μg/mL,叶绿素a和b的含量随着盐酸恩诺沙星处理质量浓度的增大呈现相同的变化趋势。     

微波诱导Cu基催化剂催化H_2O_2氧化降解甲基橙模拟染料废水

以-γAl2O3为载体,采用浸渍法制备了负载Cu基催化剂,将其应用于微波诱导催化氧化处理模拟甲基橙废水。XRD表征及实验结果表明,在200℃下焙烧得到的碱式硝酸铜比氧化铜具有更高的催化活性。对于25 mL质量浓度为50 mg·L-1的模拟甲基橙废水,最佳的处理工艺条件为:微波辐照功率700 W,辐照时间7 min,催化剂加入量0.3 g,H2O2加入量2 mL。在此工艺条件下,水中甲基橙的脱除率达98.7%。催化剂连续使用5次后甲基橙脱除率仍达98%以上。