体外培养兔骨髓间充质干细胞的超微结构观察

本文对体外培养的新西兰大白兔骨髓间充质干细胞 (ＭＳＣｓ)的超微结构进行了电镜观察 ,为选择良好的细胞生长状态 ,应用于组织工程提供实验依据。分别对原代和传代后第二、三、四、五代细胞进行了透射电镜观察。结果原代及第二、三代细胞胞核呈圆或卵圆不规则形 ,双层核膜完整 ,核仁大而明显 ,部分细胞见有 2～ 3个核仁 ,常异染色质分布均匀。胞浆丰富 ,呈中等电子密度 ;细胞器较简单 ,但数量丰富 ,结构清晰 ,如粗面内质网、滑面内质网、线粒体等 (图 1)。第四、五代细胞透射电镜下见有部分细胞开始出现结构异常现象。有些细胞的细胞核内异…     

间充质干细胞修复损伤肌腱的超微结构观察

肌腱损伤、缺损是外科常见问题之一 ,常用肌腱移植术进行修补治疗 ,但自体肌腱来源有限 ,且会造成供区功能缺失 ,异体肌腱又存在不同程度的排异问题 ,无法满足临床需要。随着组织工程学的发展 ,构建组织工程化人工腱可以为临床损伤肌腱的修复开辟一条新的治疗途径。腱细胞是肌腱的基本功能单位 ,分化程度很高 ,但体外增殖能力有限 ,不能满足肌腱组织工程对其数量上的要求。间充质干细胞(ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ,ＭＳＣｓ)是一种分化程度低、具有多向分化潜能的细胞 ,它可以向骨、软骨、肌腱、脂肪等组织分化[1] ,同时具…     

应用AFM对人骨髓间充质干细胞的形态学研究

骨髓多能基质干细胞叉称骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)。MSCs在特定的培养条件下可以分化为多种细胞：成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、内皮细胞、神经元、神经胶质细胞、成纤维细胞及肝卵圆细胞等。此前人们多用扫描电镜、透射电镜及倒置显微镜对其进行观察研究。     

人骨髓间充质干细胞的分离培养及其形态学特点

利用Percoll梯度分离、贴壁筛选法及单克隆培养法分离、培养人骨髓间充质干细胞（mesenehymal stem cells,MSCs）;采用流式细胞术检测MSCs免疫学表型;采用细胞组织化学和免疫荧光技术观察MSCs的一般形态学特点;利用透射电镜和扫描电镜观察MSCs的超微结构。结果表明,分离、培养出高度同源性的MSCs具有独特的细胞免疫学表型,即CD73、CD105、CD44、CD166、CD90阳性,CD34、CD31、CD45阴性;细胞组织化学MSCs PAS-过碘酸雪夫氏染色阳性,苏丹黑-B（SB）及碱性磷酸酶（AKP）染色阴性;免疫荧光见细胞CD73、CD105阳性;透射电镜下MSCs表面有微绒毛,相邻细胞间有缝隙连接,细胞器丰富;扫描电镜下MSCs呈长梭形、鱼群状排列,表面有许多微绒毛。实验结果为MSCs的诱导分化及应用提供了形态学基础。     

扫描电镜在人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞生长形态学研究中的应用

利用扫描电镜观察MSCs在HAM上的生长情况,确立合适的接种密度和培养时间,对采用HAM负载Mscs构建皮肤真皮替代物修复皮肤严重创伤,为进一步提高创伤的救治水平,解决大面积软组织及皮肤损伤患者的皮源,用组织工程的原理构建或预制皮肤组织提供实验依据。     

Cytodex-3微载体负载人骨髓间充质干细胞的培养及扫描电镜样品的制备与观察

人骨髓间充质干细胞（human Mesenchymal stem cells，hMSCs）在特定的培养条件下能定向诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞以及成纤维细胞等，在组织工程学中具有广阔的应用前景。应用扫描电镜观察hMSCs在Cytodex-3微载体上的生长情况为实验提供依据。采用悬浮细胞常规制样技术得到的样品，镜下显示Cytodex-3微载体和Cytodex-3微载体上负载的hMSCs的数量均极少，且负载在Cytodex-3微载体上的hMSCs的体积和表面形态结构变化较大。为了避免这类问题对实验结果的影响，我们对样品制备技术进行了改进，取得了显著的效果。     

平场定量相位显微镜在骨髓间充质干细胞线粒体动力学观察中的应用研究（特邀）

分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代纯化后接种至共聚焦培养皿,置于自主研发搭建的平场定量相位显微镜下,利用荧光及相位双通道证实线粒体特征后,进行长时间无标记观察,分析平场定量相位显微镜观察到的线粒体分裂、融合过程,以及细胞凋亡过程中的线粒体变化。平场定量相位显微镜无标记观察到的线粒体可与荧光标记的线粒体完全重叠,表明平场定量相位显微镜可以清晰观察线粒体并进行无标记高分辨率成像。同时,平场定量相位显微镜可以对培养条件下的骨髓间充质干细胞进行长时间无标记观察,并高分辨率记录线粒体分裂、融合过程。此外,还利用平场定量相位显微镜首次完整记录了CCCP作用下线粒体的变化,该变化直观地呈现了线粒体途径的细胞凋亡过程。平场定量相位显微镜可以对培养的细胞进行长时间无标记高分辨率观察,为线粒体动力学的研究提供了一种新的观察手段。     

缺氧诱导因子1α对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1表达的影响

目的：研究体外低氧实验中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1（Cbfα1）表达的影响。方法：将体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞分别置于常氧（含有5％c02的培养箱中）和低氧（含4％02、5％CO2和91％N2的三气培养箱中）中培养,分别于1d、3d、5d和7d用实时荧光定量PCR检测细胞内HIF-1α和CbfalmRNA的表达水平：用siRNA抑制细胞HIF-1αmRNA表达后用Westernblot法检测HIF-1α和Cbfal蛋白表达。结果：与常氧组相比,低氧组细胞HIF-1αanRNA的表达均增加（1d、3d、5d和7d：P〈0．05）,且3d达到最高峰;细胞CbfalmRNA的表达明显下降,3d尤为明显（P〈0．05）：低氧组细胞转染siRNA干扰HIF-1α表达后,能促进细胞内Cbfcd蛋白的表达（P〈0．05）。结论：低氧微环境抑制骨髓间充质千细胞的成骨向分化,细胞内HIF-1α反向调节Cbfal的表达。     

人胚胎小肠肌间神经丛超微结构观察

有关人胚胎小肠肌间神经丛组织发生超微结构的研究,国内外尚未见报道。本文用透射电镜观察了28例(8—28周)人胚胎空肠肌间神经丛的组织发生,现将结果报道如下:眙儿第10周的空肠内即可见明显的肌问神经丛。神经节稀少,断面多呈椭圆形,神经细胞和神经胶质细胞位于神经节的周边。神经节的中部或一端为大量并列走行的无髓神经纤维。神经节的周围,内由一薄层膜样神经胶质细胞突起包绕,外由数层幼稚的扁平状成纤维细胞包被,节内神经元咆体较大,形态不规则,细胞质较丰富,细胞器少,只有多量的核糖体与少量线粒体。胞核大而圆,位于细胞中央,异染色质少,着色淡,核仁明显,神经胶质细咆相对较多,胞质少,其内有一定量的粗面内质网,游离核糖体和线粒体等。胞核较小,着色深,形态     

阻断ERK1／2蛋白激酶可促进BMP9诱导的C3H10T1／2细胞成骨分化

目的：初步分析丝裂原活化蛋白激酶家族成员ERKl／2在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用及可能机制。方法：BMP9重组病毒感染巳H10T1／2细胞,Westemblot检测ERKl／2激酶的磷酸化。ERKl／2的特异性抑制剂PD98059阻断ERKl／2活性,细胞化学染色和活定量检测碱性磷酸酶（AlkalinePhosphatase,ALP）的表达情况;Westernblot检测骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）表达,茜素红染色检测钙盐沉积情;荧光素酶报告基因实验检测srn日d经典途径的变化。RNA干扰抑制ERK1／2表达,分析其对-于BMP9诱导的C3H10T1／2细胞ALP活性和钙沉积的影响。结果：BMP9可以促进ERK1／2激酶的磷酸化;ERK1／2抑制剂PD98059可增强由BMP9诱导的c3H10T1／2细胞早期和晚期成骨化,并促进由BMP9诱导的Smad经典途径的活化;RNA干扰导致ERK1／2基因沉默同样也可促进BMP9诱导的QHIOT1／2细胞成骨分化。结：BMP9可以促进ERKI／2蛋白激酶的活化,而阻断ERK1／2蛋白激酶可进一步增强BMP9诱导的GH10T1／2细胞成骨分化。腺性况盐分论     

Chediak-Higashi综合征的骨髓细胞超微结构观察

应用电镜对两例Chediak-Higashi综合征患儿的骨髓细胞进行了观察。观察结果表明其典型异常改变为胞装内含有许多大小不等电子致密颗粒,多较正常者大．其直径可连正常者的10倍以上。偶见吞噬体．胞策内细胞器变性及大的泡状结构．内含絮状物．电镜的检查对该病的确诊有重要的意义。     

人羊膜上皮细胞和间质细胞的分离培养

目的:探讨人羊膜上皮细胞和羊膜间质细胞的分离、培养及鉴定。方法:取足月妊娠剖宫产术中的羊膜组织剪成碎片,胰蛋白酶消化15min,共四次,取消化液1000rpm离心5min收集细胞。剩余羊膜组织加入1.0g/L的胶原酶和0.1g/L的DNA酶,39℃消化120min,消化液1000rpm离心5min收集细胞。用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养、传代。倒置显微镜下观察其细胞形态及细胞生长情况。通过免疫细胞化学的方法对细胞进行细胞鉴定。结果:通过不同的酶消化分离法可以将羊膜上皮细胞和间质细胞进行细胞分离培养,羊膜细胞体外一段时间内表现出良好的细胞增殖能力和传代能力。胰蛋白酶消化的细胞角蛋白染色呈阳性,波形蛋白染色呈阴性。胶原酶消化的细胞波形蛋白色阳性,角蛋白染色阴性。结论:羊膜上皮细胞和间质细胞能够在体外分离、扩增。这为羊膜细胞进行细胞治疗和组织工程技术奠定了实验基础。     

3D Manufacture of Gold Nanocomposite Channels Facilitates Neural Differentiation and Regeneration

Conductive nerve guidance channels are promising alternative therapies in peripheral nerve tissue engineering because they have excellent biocompatibility, biodegradation, and electrical conductivity. Gold, a kind of conductive material, is investigated widely concerning its potential roles in promoting peripheral nerve repair. In the present study, a polydopamine‐coated gold/polycaprolactone nanoscaffold is fabricated via a multilayer molding method and its proliferative, adhesive, and neural differentiation potential for bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and Schwann cells (SCs) in vitro is evaluated. Functional, electrophysiological evaluation, and morphological assessment all exhibit satisfactory recovery of sciatic nerves with increased thickness and number of myelinated fibers in vivo. In addition, increased microvessels are confirmed in gold nanocomposite channels, indicating their potential benefits in angiogenesis. Functional regeneration is further enhanced by neurotrophic growth factors released from BMSC and SC loading. The gold nanocomposite channel will have great potential in peripheral nerve restoration.     

Injectable Stem Cell‐Laden Photocrosslinkable Microspheres Fabricated Using Microfluidics for Rapid Generation of Osteogenic Tissue Constructs

Direct injection is a minimally invasive method of stem cell transplantation for numerous injuries and diseases. However, despite its promising potential, its clinical translation is difficult due to the low cell retention and engraftment after injection. With high versatility, high‐resolution control and injectability, microfabrication of stem‐cell laden biomedical hydrogels holds great potential as minimally invasive technology. Herein, a strategy of microfluidics‐assisted technology entrapping bone marrow‐derived mesenchymal stem cells (BMSCs) and growth factors in photocrosslinkable gelatin (GelMA) microspheres to ultimately generate injectable osteogenic tissue constructs is presented. Additionally, it is demonstrated that the GelMA microspheres can sustain stem cell viability, support cell spreading inside the microspheres and migration from the interior to the surface as well as enhance cell proliferation. This finding shows that encapsulated cells have the potential to directly and actively participate in the regeneration process. Furthermore, it is found that BMSCs encapsulated in GelMA microspheres show enhanced osteogenesis in vitro and in vivo, associated with a significant increase in mineralization. In short, the proposed strategy can be utilized to facilitate bone regeneration with minimum invasiveness, and can potentially be applied along with other matrices for extended applications.     

人参皂苷Rg1协同rhBMP-2对人牙髓干细胞成牙分化作用研究

目的：探讨不同浓度人参皂苷Rg1、重组骨形态发生蛋白2（rhBMP-2）及两者联合应用对体外培养的人牙髓干细胞（DPSCs）成牙分化的影响。方法：酶消化法获得DPSCs,采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测和实时荧光定量RT—PCR测定牙本质涎磷蛋白1（DSPP）和牙本质基质蛋白1（DMP1）mRNA的表达以检测不同浓度人参皂苷Rgt（0．1,0．5,2．5,5,10,20μmol／L）及rhBMP-2（25,50,100,200rig／ha）单独及联合应用对DPSCs成牙分化的影响。结果：人参皂苷Rg1（2．5,5和10μmol／L）组的ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,5μmol／L组ALP活性明显高于其它浓度组（P〈0．001）;浓度为50,100,200mg/ml的rhBMP-2其ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,100ng／ml rhBMP-2组ALP活性最强。联合应用人参皂苷Rg1（5μmol／L）和rhBMP-2（100ng／ml）DSPP和DMP1 mRNA的表达明显高于单独应用组（P〈0．001）。结论：人参皂苷Rg1可促进体外培养的DPSCs成牙本质分化,人参皂苷：Rg1协同rhBMP-2能明显增强DISCs成牙本质分化。     

露蜂房蛋白对急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞超微结构的影响

目的：观察中药露蜂房蛋白(NVP)成份对急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)超微结构的影响。方法：采用体外细胞培养,加入不同浓度露蜂房蛋白成分作用于AML患者BMMNC,培养72h收集细胞,常规制备超薄切片,透射电子显微镜下观察AML患者BMMNC的超微结构。结果：露蜂房蛋白各处理组细胞核染色质浓缩、边集,呈新月形或环状或细胞核碎裂呈块状。线粒体出现空泡样变及髓样变。结论：中药露蜂房蛋白成份有明显诱导AML患者体外培养BMMNC凋亡的作用,并呈现典型的细胞凋亡超微结构改变。