镱-169通过DTPA标记γ-球蛋白和单克隆抗体的化学研究

本文研究了~(169)Yb标记羊抗人IgG的化学条件,考查了影响标记率的各种因素。~(169)Yb不能直接稳定地与IgG结合。我们采用了环状酸酐法将双功能螯合剂DTPA连接到蛋白质分子上,再与~(169)Yb结合,制成了稳定的标记物~(169)Yb-DTPA-IgG。影响标记率的主要因素是DTPA环状酸酐与IgG的摩尔比(C/P)。摩尔比越高,连接到蛋白质分子上DTPA越多,络合金属越多。     

EM>N-/EM>琥珀酰亚胺-3-碘［S

研究能有效降低抗体的体内脱碘的标记方法。碘标记N-琥珀酰亚胺-3-(三正丁基锡)苯甲酸酯(ATE)前体,得到N-琥珀酰亚胺-3-碘[125I]苯甲酸酯(S125IB),分别与人IgG和抗人肝癌单抗(Hepama-1)进行偶联,探索最佳标记条件,并测定标记物的稳定性和生物活性,研究直接标记和间接标记的Hepama-1在正常小鼠体内的生物学分布。结果表明,用N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)法125I标记ATE前体,在ATE用量为25～100μg、NCS用量为10～20μg、磷酸盐缓冲溶液(PBS)用量为10～20μL、反应时间为5 min时,标记率大于95%;S125IB和人IgG的偶联率最高可达75%,偶联产物稳定性、生物活性良好;与Hepama-1偶联率可达75%以上。生物分布的对比实验证明,1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯甘脲(Iodogen)直接标记的Hepama-1在甲状腺的放射性摄取率(脱碘显示)最高是S125IB间接标记的Hepama-1的87.9倍。这说明以ATE为前体的放射性碘间接标记蛋白质方法与传统的碘直接标记方法相比较,在解决体内严重脱碘问题上具有明显的优越性。     

希土放射性核素通过TTHA标记I_gG和单克隆抗体——Ⅰ.标记方法研究

本文提出了用三乙撑四胺六乙酸(TTHA)环状酸酐(CTTHAA)作为双功能螯合剂,预先连接到免疫球蛋白G(IgG)上,再络合希土放射性核素,标记IgG和单克隆抗体的方法。并对影响标记的因素,如金属与CTTHAA摩尔比,pH和反应时间作了详细研究。标记物RE-TTHA-IgG仍保持免疫反应活性。     

~3H标记喜树碱、10-羟基喜树碱和石吊兰素的制备

本文用氚溶剂交换法制备了氚标记喜树碱(Ⅰ),10-羟基喜树碱(Ⅱ)和石吊兰素(Ⅲ)。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分别与CF_3COOH/T_2O_2,DMSO/T_2O或(CH_3COOH/T_2O加热各得到氚标记的Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ。     

L-(甲基-~3H)-蛋氨酸的研制

L-(甲基-~3H)-蛋氨酸是重要的标记氨基酸之一,用于生命的起源、氨基酸在体内的合成与代谢等学科研究中,不少文章报道了用它来研究烷基取代的生化过程。 特定在甲基上标记的蛋氨酸一般都采用标记的碘甲烷与相应的去甲基化合物——高半胱氨酸在液氨溶液中反应而得。氚标记的碘甲烷是制备氚标记化合物的关键化合物,关于它的制备方法,文献上已有较多的报道,但我们根据实验室现有的条件,设计了一条合成     

D_(12)-孔雀石绿的合成

以CD_3OD为起始原料,经甲基化、缩合、氧化等步骤合成稳定同位素标记D_(12)-孔雀石绿。以消耗CD_3OD计算,稳定同位素标记D_(12)-孔雀石绿的总收率为50.1%。产品结构经高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)及核磁共振波谱(NMR)等仪器表征确定,D_(12)-孔雀石绿色谱纯度高于99.0%,氘同位素丰度大于99.0%,结果表明,D_(12)-孔雀石绿可作为食品安全领域检测用同位素内标试剂。     

人血清IgG的188Re标记条件初探

以含葡萄糖酸钠配体的SnCl2为还原液,还原Na188ReO4后,标记人血清IgG,在pH=3的条件下,1g/L的蛋白质用高于5000倍摩尔过量的抗坏血酸(AA)还原2h后, 与2.6×10-28.0×10-2mol/L的SnCl2-葡萄糖酸钠溶液及188ReO4-反应3h,可以得到90%的标记率,在该标记条件下,对影响标记率的因素作了初步的研究和探讨。     

用^111In标记单克隆抗体和动物分布与显象研究

研究了用~(111)In通过DTPA环二酸酐标记单克隆抗体(McAb)的各个实验环节,制备了超纯~(111)In,得到了高比活度1.11GBq/mgMcAb、具有免疫反应活性的~(111)In-McAb。对用~(111)In标记的抗CEA McAb C14-C50、抗人结肠癌McAb 2C10和鼠IgG在荷瘤裸鼠模型体内分布及体外显象进行了研究。注射单抗的动物得到清晰的肿瘤显象,而注射普通IsG的动物的肿瘤不显象。     

羊抗人IgG和出血热单抗(E_5)在辐射改性的硅橡胶膜上固定化研究

本文用γ辐射技术,在硅橡胶膜(Silastic)上接枝丙烯酰胺单体(AAM),用不同接枝率的Silastic-AAM膜通过叠氮化后对羊抗人IgG和出血热单克隆抗体(E_5)进行了偶联固定化。同位素~(125)碘标记方法对固定在Silastic-AAM膜上的羊抗人IgG量与接枝率的关系,以及抗体量与其免疫活性的关系进行了测定,得到了适于固定化的抗体偶联反应液最适浓度和最佳接枝率范围;用ELISA法对Silastic-AAM膜固定化的出血热(E_5)单抗进行了免疫活性实验,得到了承某一实验条件下具有明显的阳性反应。结果表明,经适当改进,本法对临床诊断有一定应用价值。     

用于放射性砹(碘)标记蛋白质的偶联剂SPC的合成及表征

以5-溴烟酸为起始物，通过3步主要反应合成了一种适用于蛋白质放射性砹(碘)标记的偶联剂——5-(三正丁基锡)-3-吡啶甲酸N-琥珀酰亚胺酯(SPC)，并用核磁共振(NMR)、质谱(MS)、高效液相色谱(HPLC)等进行了表征。以该试剂为双功能偶联剂，实现了IgG的^125I标记，标记率达30％以上。标记产物在体外具有较高的稳定性。     

同位素标记敌百虫-甲氧基-D_6和敌敌畏-甲氧基-D_6的合成

以CD3OD为同位素源,经与三氯化磷酯化得到亚磷酸二甲酯,再进一步与三氯乙醛加成得到敌百虫-甲氧基-D6,碱解脱去氯化氢分子,重排后生成敌敌畏-甲氧基-D6。以消耗CD3OD计算稳定同位素标记敌百虫-甲氧基-D6和敌敌畏-甲氧基-D6提纯后总收率分别为57.7%和47.3%。产物经高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)和核磁(NMR)等仪器的鉴定为目标物质,化学纯度大于98.0%,同位素丰度高于98.0%,可作为食品安全领域检测用同位素内标试剂。     

99Tcm间接标记NGR—IFN-α2a的方法研究

以双半胱氨酸(L,L-ethylenedicystein,EC)作为双功能螯合剂,MDP作为转移螯合剂,采用两步法对NGR-IFN-α2a进行~(99)Tc~m标记,制备了~(99)Tc~m-EC-NGR-IFN-α2a,并对标记和非标记的NGR-IFN-α2a进行活性鉴定。结果显示,EC-NGR-IFN-α2a合成产额为87.5%,~(99)Tc~m-EC-NGR-IFN-α2a标记率86%,放化纯度96%,在2 h内,标记物体外较稳定;EC-NGR-IFN-α2a与~(99)Tc~m-EC-NGR-IFN-α2a的活性与NGR-IFN-α2a无差异。     

99mTc间接标记NGR-干扰素-α2a方法的研究

以双半胱氨酸(L,L-ethylenedicystein,EC)作为双功能螯合剂, MDP作为转移螯合剂,采用二步法对EC-NGR-IFN-α2a进行99Tcm标记制备99Tcm-NGR-IFN-α2a,对标记和非标记的NGR-IFN-α2a进行活性鉴定。以上结果显示EC-NGR-IFN-α2a合成产额为87%,标记率86%,放化纯度96%,在2小时内,标记物体外较稳定;EC-NGR-IFN-α2a与99Tcm-EC-IFN-α2a-NGR的活性与IFN-α2a-NGR无差异。     

188Re直接标记抗体方法研究

以2-巯基乙醇作为抗体的还原剂,葡萄糖酸钠作为中间弱配体,在pH5．0的条件下,以SnCl2快速还原”。ReO4^-,进行了单克隆抗体IgG的直接标记。探讨了影响标记率的因素。结果显示,优化后的标记条件为pH5．0,室温下标记3h,SnCl2用量2．66μmol,葡萄糖酸钠用量80μmol。该方法操作步骤简单方便,标记率较高,为94．4％±0．7％,标记物不需分离纯化,且有良好的体外稳定性,室温下可稳定保存8h。     

~(99)Tc~m标记2-甲基-2-异腈基-丙酸甲酯心肌显像剂的制备研究

一、前言~(99)Tc~m标记异腈类化合物用于心肌显像,具有易于生产、价格便宜、半衰期短、幅射剂量低等优点。其标记可用直接还原法和配体交换法。~(99)Tc~m-CPI是目前较好的心肌显像剂。本文采用自制的CPI与改进的配体交换法制备~(99)Tc~m-CPI。     

Rituximab的碘标记方法及其在正常小鼠体内的生物分布

采用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)方法对Rituximab(美罗华)进行标记,并优化标记条件。系统考察了反应时间、NBS用量、反应温度、反应体积、pH值及KI的加入等条件对125I-Rituximab标记率的影响,用ITLC-SG测定标记率和放化纯度。确定最佳条件为:反应时间2～3 min、pH 7.0、室温、反应体积80μL为反应最优条件。在最佳条件下,5次标记实验标记物的放化纯度为93.9%±1.6%。采用体外结合实验测定储存不同时间131I-Rituximab的免疫活性,结果表明随着131I-Rituximab储存时间的增加免疫活性下降。正常小鼠静脉注射131I-Rituximab后体内分布显示血液中放射性分布较高,并可持续6 d,表明131I-Rituximab体内稳定。异常毒性实验结果表明131I-Rituximab毒性低。     

用生物素-亲和素系统测定放射性标记生物物质的活性

分别用^131I和^188Re标记亲和素，测定其与生物素结合的能力，并与未标记的亲和素、罗丹明标记的新和素进行比较，测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量；探讨用生物素－亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明，未标记的亲和素、罗丹明标记亲和素、^188Re－亲和素和^131I－亲和素，它们与生物素的结合能力依次下降，与生物素半解吸量分别为21．9，19．5，25．7和47．9μg；放射性标记的亲和素与生物素结合的能力低于未放射性标记的亲和素和罗丹明－亲和素。由此推测，有可能用亲和素－生物素系统来评价标记方法对生物活性的影响。     

双功能偶联剂5-(三正丁基锡)-3-吡啶甲酸-N-琥珀酰亚胺酯的优化合成及其碘标记

为了改善碘标记生物分子在体内的脱碘问题,在无水无氧条件下合成了碘标记前体5-(三正丁基锡)-3-吡啶甲酸-N-琥珀酰亚胺酯（SPC）,并优化了合成条件,产率达到45%,并用核磁共振、质谱法进行了表征。在此基础上,合成了5-碘-3-吡啶甲酸-N-琥珀酰亚胺酯（SIPC）。对标记前体SPC的¹²⁵I 标记条件进行了摸索,最终标记率达到80%以上,经高效液相色谱（HPLC）分离后,放化纯度达到97％。标记后的¹²⁵I-SIPC在4℃保存24h,放化纯度仍在92％以上,稳定性良好。     

~(?)锝标记尿激酶活力测定

~(99m)Tc标记尿激酶(血栓显像剂),国内未见报道,我们于1984年研制成功,并应用于临床,得到较为满意效果。但尿激酶经过放射性核素标记以后是否仍然保持一定的生物活力,必须经过严格的活力测定才能判断。本文报道两种尿激酶活力测定方法:(1)气泡法,它是用时间差来进行计算的,即气泡上升时间减去放入水浴时间,将测试结果查标准曲线即得标记以后尿激酶效价单位。(2)纤维蛋白平板测定法,溶圈大小与尿激酶活力呈对数直线关系,在标准曲线上查出~(99m)Tc标记尿激酶效价单位。     

~(131)I标记新型小分子肽VP2

本文通过双功能偶联剂5-(三正丁基锡)-3-吡啶甲酸-N-琥珀酰亚胺酯(SPC)将131I标记到小分子融合多肽VP2上,研究了131I标记多肽VP2的体内外稳定性及在正常小鼠体内的代谢与分布。结果表明,该标记药物室温下放置48h后放化纯度仍可达97%,其在小鼠体内可通过胃肠道快速代谢,在甲状腺的摄取较低。用间接标记法得到的131I-SPC-VP2在体内外有良好的稳定性。