植物激活蛋白对烟草抗病促生和品质的影响

本文研究了植物激活蛋白对烟草花叶病毒病的盆栽和田间诱抗效果以及激活蛋白对烟草生长和品质的影响。结果表明:植物激活蛋白能显著诱导烟草抑制花叶病的发生和发展,枯斑抑制率达70.18%;小区第2次和第3次处理后7d调查的诱抗效果分别达48.49%和53.7%,与菌克毒克效果相当,高于抑毒星;大田施药后20d和45d后调查的诱抗效果分别达72.87%和73.4%植物激活蛋白能明显促进烟草生长,表现为株高,留叶数和叶面积增加,其中株高增长7.42%,中上部叶面积分别增加10.35%和14.8%;激活蛋白对烟叶品质有较明显的影响,其中可溶性糖、还原性糖、蛋白质含量以及施木克值比对照高,其化学物质含量符合优质烤烟质量指标,对改善烤烟品质有明显作用。      

印度梨形孢诱导烟草的抗病性分析

内生真菌印度梨形孢(Piriformospora indica)能够增强植物体抗生物和非生物胁迫能力.为了明确印度梨形孢对诱导烟草抗病性的作用,分别进行了接种病原菌长柄链格孢、胶孢炭疽菌、终极腐霉和茄丝核菌后印度梨形孢定殖的烟草对赤星病、炭疽病、猝倒病和立枯病害的抗性试验,同时分析了接种长柄链格孢后烟叶中丙二醛(MDA)和脯氨酸(Pro)含量、抗氧化酶活性以及病程相关蛋白基因表达水平.结果表明:印度梨形孢定殖的烟草,接种长柄链格孢后,烟叶病斑显著减小,烟叶中MDA含量显著降低,Pro含量显著升高,病程相关蛋白基因PR-1a,PR2,PR3和PR5的表达量明显提高;接种胶孢炭疽菌后,烟叶病斑减小;终极腐霉和茄丝核菌对烟草的危害症状显著减轻.印度梨形孢能诱导烟草产生抗病性,是通过维持生物膜系统的完整性、稳定细胞内渗透压以及膜脂过氧化在较低水平、并调控病程相关蛋白基因的表达来实现的.     

沼液在烟叶生产上的应用研究初报

在中式浓香特色烟叶生产中,为替代化学肥料和农药,在潍坊市的诸城、安丘和高密3个产烟县(市)进行了沼液在烟叶生产上的使用效果试验。初步结果表明,沼液能够促进烟苗生长,提高烟苗茎高、茎围和根重,同时可以改善烤烟株高、叶数和腰叶面积等农艺性状;沼液处理能较好地改善烟叶等级结构,提高烟叶产量、产值、均价和上等烟比例,平均分别提高了4.02%、8.59%、4.38%和8.15%;沼液对烟草病毒病、黑胫病和赤星病有较好的防治效果,病害发病率分别降低了59.96%、55.56%和19.05%,对烟蚜也有一定的防治效果,沼液处理后,烟蚜虫口数量明显下降。综合分析,沼液对促进烟草生长、防治烟草病虫害、提高烟草质量有积极作用,具有一定应用前景。     

低氮胁迫诱导烟草亲环素基因表达的研究

为研究低氮营养对烟草生长的主要影响,分别在移栽后50d到70d期间测量了低氮胁迫和正常营养条件下烟株中部叶片的叶宽、叶长和50d与60d时的株高,同时应用实时荧光定量PCR方法分析了移栽后50d到70d期间烟草叶片中胁迫响应基因亲环素mRNA的表达量.结果发现低氮营养下叶长、叶宽和株高都小于正常营养条件下的叶片,但是叶长、叶宽平均生长增幅显著大于正常营养下的叶片,而株高的增长幅度则没有明显差异.低氮胁迫下叶片亲环素基因mRNA表达量与正常条件下的基因转录表达量相比有显著增加,最高为正常条件下的6.9倍,并且在移栽后50d到70d期间相对转录水平呈递增趋势.水培实验也证明低氮胁迫可显著诱导叶片亲环索基因的转录表达,诱导表达量达2.0倍之多.结果表明低氮营养胁迫对烟草叶片的生长影响较为显著,且低氮营养可以诱导烟草叶片亲环素基因mRNA表达大量增加,推测低氮营养胁迫下亲环索基因的大量诱导表达可能参与了对烟草叶片生长的调节过程.     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

蝇蛆几丁低聚糖抗烟草黑胫病研究

在室内进行了蝇蛆几丁低聚糖对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasiticavar.nicotianae)的抑制效果和诱导抗性试验。试验结果表明:①蝇蛆几丁低聚糖对烟草黑胫病菌具有抑制作用,不同浓度的蝇蛆几丁低聚糖的抑制效果有差异,在一定范围内,随着几丁低聚糖浓度的提高,其抑制率也相应提高,1.0mg/mL的蝇蛆几丁低聚糖抑制效果显著,10d后抑制效果达到97.0%;②蝇蛆几丁低聚糖能够诱导接种烟叶对黑胫病产生抗性,浓度为1.0mg/mL的蝇蛆几丁低聚糖处理烟叶,第6d其诱抗效果达82.9%。     

土壤中烟草疫霉的分离与量化测定

从温室盆栽接种试验土和烟田土中分别取样，在室温下晾干，研碎并通过１ｍｍ直径的网筛，用选择性培养基土壤稀释平板法和叶片诱饵法分离烟草疫霉菌株；用土壤稀释平板法测定了云南主要烟区土样的烟草疫霉密度。结果看出，连作烟田的病菌密度高于轮作田，低凹烟田高于山地烟田。叶片诱饵法试验表明，以烟茎切片的诱集效果最好，其次是烟叶和马铃薯叶，番茄叶和辣椒叶的诱发效果相似，花生叶诱集不到烟草疫霉。     

酶解蝇蛆低聚几丁糖抗烟草黑胫病及对寄主同工酶的影响

对酶解蝇蛆低聚几丁糖抗烟草黑胫病茵(phytophthora nicotiana)及其作用机制进行了初步研究.结果表明,酶解蝇蛆低聚几丁糖对烟草黑胫病菌茵丝形态、产孢能力具有重要影响,引起茵丝生长扭曲、细小以及分支膨大,同时可抑制游动孢子囊的产生.烟苗经过酶解蝇蛆低聚几丁糖处理后,再接种烟草黑胫病菌,酶解蝇蛆低聚几丁糖能够诱导接种烟株对烟草黑胫病产生抗性,过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)同工酶活性增强,喷施酶解蝇蛆低聚几丁糖后接种病原茵的烟株,同工酶表现为酶带较多、色浓.由此可认为酶解蝇蛆低聚几丁糖抗烟草黑胫病与此两种同工酶有关.     

茉莉酸甲酯对烟草α-淀粉酶抑制剂的诱导作用

研究了不同浓度的茉莉酸甲酯(MeJA)对烟草α-淀粉酶抑制剂诱导的时间及浓度效应。在斜纹夜蛾取食不同浓度的MeJA诱抗处理的烟草叶片1～3d后,对中肠α-淀粉酶活性进行了检测。结果显示,0.01,0.1,1.0,4.0mmol/L和10.0mmol/L5种浓度的MeJA处理烟草后,烟叶α-淀粉酶抑制剂含量明显增加,而4.0mmo1/L MeJA诱抗处理48h时诱导烟草产生的α-淀粉酶抑制剂活性最强。离体检测结果表明,斜纹夜蛾取食MeJA处理的烟草叶片后,中肠α-淀粉酶活性降低。     

镉在烟草中的积累分配及其对烟草生长的影响

为了探明镉在烟草中的积累分配规律,采用盆栽试验,调查了不同镉浓度处理下烟草全生育期的生长及镉在烟草中的分配积累规律。结果表明,随着镉浓度的提高,同一时期烟草叶片的干物质量显著降低(p<0.01),茎部干物质量先升高后降低,根部干物质量在生长前期(30 d和45 d)逐渐降低,生长后期(60 d和75 d)先升高而后降低。各添加镉处理后,叶片镉含量均显著高于茎和根部,而对照镉含量根>茎>叶。烟叶中的镉含量表现为:下部叶>>中部叶>上部叶。烟草镉积累速率随着镉浓度的增加而升高,烟草各部位的镉积累规律为:快速积累-快速降低-缓慢积累。     

疫霉葡聚糖激发子Gep1诱导烟草对烟草花叶病毒的抗性研究

烟草花叶病毒病是危害烟草的重要病害,可通过激发子诱导烟草产生抗病性。利用乙醇沉淀、DEAE-52、SephadexG-100柱层析的方法,从疫霉菌中分离纯化出一种葡聚糖类激发子Gep1。Gep1诱导后,烟草叶片产生和积累H₂O₂、酚类物质;烟草叶片苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性均有不同程度的提高。Gep1可以诱导烟草抗TMV。盆栽实验表明,4 mg/mL Gep1的防效为67.4%,降低了发病率,推迟了发病时间。半定量RT-PCR结果显示,Gep1激发子诱导烟草抗病相关基因的上调表达,表明Gep1可激发烟草防卫反应,诱导烟草产生系统抗性,提高烟草对病毒的抗性。     

抗赤星病烟草的防卫基因的表达与基因组DNA结构的变化

用赤星病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｍａｔａ）毒性菌株产生的ＡＴ毒素诱导烟草,可使寄主获得对赤星病８０．４％的系统抗性,比病菌弱毒株ＴＢＡ１６孢子诱导的效果高约２０％。烟草品种ＮＣ８９心叶叶碟在含ＡＴ毒素６０％和７０％的ＭＳ培养基上经２轮胁迫筛选和植株再生,得到抗病品系ＮＣ８９－ＴＴ。用５种防卫基因的ｃＤＮＡ探针检测了不诱导、受ＡＴ毒素诱导、受病菌弱毒株激发子诱导的ＮＣ８９和诱导与不诱导的ＮＣ８９－ＴＴ第４代植株５种基因的转录活性,结果表明,苯丙氨酸氨裂解酶（ＰＡＬ）基因在ＮＣ８９中不能组成型表达,可被ＡＴ毒素诱导激活,但不受激发子诱导;病程相关蛋白（ＰＲ蛋白）ＰＲ－ｌａ、查尔酮合成酶（ＣＨＳ）、脂氧合酶（ＬＯＸ）基因在ＮＣ８９中表现为诱导转录或诱导后转录活性增强;这４种基因都在ＮＣ８９－ＴＴ中组成型表达     

一个受青枯病菌诱导的烟草功能基因NtCNGC1的克隆与表达分析

前期转录组研究发现1个环核苷酸门控离子通道（CNGC）基因在抗青枯病烟草品种DB101中上调表达,推测可能参与抵抗烟草青枯病菌侵染的防卫反应。为进一步研究该基因在烟草诱导防御反应中的作用,本研究采用PCR扩增法从DB101中获得烟草CNGC基因的cDNA和基因组序列,命名为NtCNGC1基因。生物信息学和基因表达分析表明,该基因含有8个外显子和7个内含子,编码区（CDS）全长2154 bp,编码717个氨基酸,蛋白分子量为83 kD,理论等电点为9.35。在NtCNGC1基因起始密码子上游1500 bp的核苷酸序列区间预测到防御与应激反应、病原菌应答、水杨酸响应、真菌激发子响应及伤口响应等应答元件。NtCNGC1基因在烟草根中表达最高、茎中其次、叶中最低。受青枯病菌诱导后,NtCNGC1基因在抗病品种（DB101）中的表达量明显高于感病品种（红花大金元）。初步证实NtCNGC1为烟草青枯病抗性相关基因。      

Trichothecium roseum蛋白激发子诱导杏果抗黑斑病的作用机理

研究非亲和菌株粉红单端孢（Trichothecium roseum）菌体蛋白激发子对杏果实抗黑斑病的诱导效果及其作用机理。以‘兰州大接杏’为试材,通过处理后不同时间损伤接种杏果黑斑病菌（Alternaria alternata）,研究T. roseum蛋白激发子对杏果实黑斑病抗病性的诱导及其时效性,同时进一步研究最佳处理质量浓度对杏果实组织活性氧及抗性相关酶的影响。结果表明,T. roseum蛋白激发子处理可显著抑制损伤接种杏果病斑的扩展（P＜0.05）,其中14.4 μg/mL蛋白激发子的控制效果最好,且诱导处理72 h时杏果产生最大抗性。T. roseum蛋白激发子处理后杏果组织O2－·的生成速率和H2O2含量分别在48 h和72 h出现明显的峰值,同时处理的果实组织超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性均有所增强。T. roseum菌体蛋白激发子处理能显著增强杏果组织的抗性,其可能是通过激发活性氧爆发和提高杏果实抗病性相关酶的活性来实现的。可见T. roseum蛋白激发子可以作为一种有潜力的诱抗剂应用于采后病害的控制。     

转几丁质酶基因烟草遗传稳定性研究

从转几丁质酶基因烟草株系(NPTII基因是选择标记基因)对卡那霉素的抗性,及外源几丁质酶基因表达蛋白的活性(Western Blot检测)两个方面对转基因株系的遗传稳定性进行了分析研究。在卡那霉素抗性检测试验中,检测了13个T₂转基因株系,其中9个株系被检测种子100%对卡那霉素(100 mg/L)具有抗性;T₃和T₄转基因株系各检测了10个,100%被检测种子在含卡那霉素100 mg/L的MS培养基上长成了烟苗。Western Blot检测了11个T₂株系,检测结果表明,6个株系被检测植株100%含有外源几丁质酶蛋白,2个株系被检测植株80%含有外源几丁质酶蛋白,2个株系被检测植株50%含有外源几丁质酶蛋白,1个株系被检测植株19.05%含有外源几丁质酶蛋白。在温室内将转基因烟草与未转基因烟草密植在一起,种植2代,烟株开花期模仿自然风力对烟株吹风,进行了转基因烟草是否可以通过花粉进行基因漂移的研究。研究结果表明,在自然风媒条件下未发现转基因烟草可进行基因漂移。      

沃益多微生物菌肥对烤烟生长发育和抗病性的影响

为了解沃益多(HYT)微生物菌肥对烤烟生长发育、产质量和抗病性的影响,通过一系列的田间试验进行了研究。结果表明,HYT能显著改善烟株农艺性状,提高烟叶的质量和产值以及增强抗病性。烤烟施用HYT后,烟株的株高、根系鲜重分别增加7.47 cm、61.2 g/株,产量、产值分别增加222.60 kg/hm²、7937.10元/hm²,同时还降低了烟叶烟碱含量,提高了烟叶钾含量,使烤烟内在化学成分更趋协调;施用HYT后对烟草病毒病、烟草黑胫病和烟草根结线虫病的防效分别达47.13%、36.06%和65.62%。由此说明,HYT是一种较好的肥药双效产品。     

贝莱斯芽胞杆菌F10促生作用及对烟草青枯病的防治效果

为明确植物根际促生细菌（Plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR）对烤烟促生和抗病作用,以前期试验分离获得的贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）F10为材料,通过盆栽和田间小区试验考察其对烟草的促生作用和对烟草青枯病的防治效果。结果表明,生防菌F10处理后,烟草根系和地上部生长显著优于对照,烟草叶片过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性提高。盆栽和田间小区试验中生防菌F10对烟草青枯病的防治效果分别为60.49%和54.91%,大田烟叶产量、上等烟比例和上中等烟比例比对照分别提高11.82%、31.46%和13.17%。生防菌F10对烟草生长具有促进作用,对烟草青枯病具有较好的防治效果,烤烟经济效益显著提高。      

天达-2116在烤烟上的应用

为明确新型植物生长调节剂天达-2116在烟草上的应用效果,以晚花K326为供试材料,研究了天达-2116对烤烟农艺性状、经济性状、抗病性、产量及主要化学成分的影响.结果表明,喷施天达-2116能够增强烟株长势,改善烟叶农艺性状和经济性状,增加产量,提高烟株抗病性.其中喷施500倍液天达-2116,烟叶化学成分较为谐调,烟叶经济性状表现较好,产量比对照提高243.1 kg/hm²,产值比对照增加3719.7元/hm²,差异均达显著水平,上中等烟率比对照提高7%.因此,喷施天达-2116可提高烤烟产量和质量.     

枯草芽孢杆菌SH7 抑菌蛋白产生的最佳发酵条件及温室防效

枯草芽孢杆菌SH7可抑制烟草青枯病菌的生长,利用硫酸铵沉淀法从发酵液中提取抑菌蛋白质,测定其对烟草青 枯病菌抑菌活性,从而确定抑菌蛋白产生的最佳培养基和培养条件。本实验产生抗菌蛋白的最佳培养基为NA液体培养基, 最佳发酵条件为：pH 6.0,26 ℃,装液量100 mL,170 r/min振荡培养96 h。粗抑菌蛋白在pH为9.0和10.0时,其抑菌活性仍 保持为86%, 88%,对碱稳定;在100 ℃和121 ℃处理20 min,其抑菌活性仍保持为83.1%, 68.0%,具有良好的热稳定性。在 温室内,抗菌蛋白粗提液对烟草青枯病可取得70.8%的防效。