筛选诱导烟草对烟草花叶病毒产生系统抗性的真菌

真菌产生的代谢产物可激活烟草体内抗病防御相兲酶的表达,诱导烟草产生系统抗性,增强烟草对病毒的抗性。本研究对38种植物病原真菌及45种分离自（恩施、襄樊）土壤、烟叶中的真菌进行了过敏性反应实验和系统抗性实验。结果表明,筛选出了对烟草花叶病毒抗性较强的真菌。在烟草上产生过敏反应的菌株有32个;系统抗性实验中对烟草花叶病毒抑制率较高的菌株有16个,其中,油茶炭疽菌、棉花黄萎病菌、esf-13、esf-3、小麦赤霉、立枯丝核菌、E1、esf-6、xfpf-6等菌株的抗性较高,枯斑抑制率均大于70%,最高可达96.44%。抗性较高的真菌可开发为烟草病毒病诱抗剂。     

卵寄生真菌刀孢蜡蚧菌对烟草根结线虫的生物防治

根结线虫卵的寄生真菌对根结线虫病害的生物防治具有很大的应用潜力.本研究采用卵寄生真菌刀孢蜡蚧菌Lecanicillium psalliotae CGMCC5329对南方根结线虫卵和雌虫的寄生性进行了测定,同时利用该菌的生物菌剂对烟草根结线虫病害进行了田间防效测定.结果表明,该菌能寄生根结线虫的卵和雌虫.其中,培养5 d对卵寄生率为83.29%;培养15 d对卵块相对孵化抑制率为91.41%.刀孢蜡蚧菌菌剂在田间施用15 kg/667m²时,相对防效达80%以上,刀孢蜡蚧菌CGMCC5329对烟草根结线虫病害具有较好的防治效果.     

烟草根结线虫病不同防控措施的田间筛选

为筛选防控烟草根结线虫病的措施,通过田间试验研究了5种植物、1种昆虫病原线虫、2种生防真菌对烤烟农艺性状、产量、产值及烟草根结线虫病防治效果的影响。结果表明,烤烟间作菽麻、间作猪屎豆,施用异小杆线虫和施用淡紫拟青霉在烤烟农艺性状、产量、产值及整个生育期对烟草根结线虫防治效果综合表现较好。除药剂对照外,整个生育期内施用淡紫拟青霉防效最好,平均防效61.2%;间作菽麻次之,平均防效60.4%;其次为1.46×10⁸Js/hm²的异小杆线虫,平均防效53.3%;最差为间作猪屎豆,平均防效为46.2%。     

3株拮抗烟草尖孢镰刀菌的木霉菌筛选鉴定及促生防病效果评价

  目的  为筛选对烟草镰刀菌根腐病菌具有较好拮抗效果的菌株。  方法  从河南省主要烟叶产区健康烟株根际土壤中,分离纯化对尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有一定拮抗作用的真菌菌株,对筛选出的拮抗菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定促生作用和防治效果。  结果  分离纯化得到的3株木霉菌分别为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）Ta-0101、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）Th-0201和毛簇木霉（Trichoderma velutinum）Tv-0207,具有较强的抑菌能力,对尖孢镰刀菌的抑菌率分别为91.24%、84.71%和82.48%。3株木霉菌对烟草种子根长和总长均有显著的促生效果,根长增长率分别为28.89%、25.92%和22.22%,根系活力也显著提高;对烟株最大叶面积和鲜重的促生作用明显,其中棘孢木霉Ta-0101促生效果最显著。3株木霉菌对尖孢镰刀菌的相对盆栽防效分别为78.95%、69.73%和69.73%,均高于70%甲基硫菌灵1000倍液处理的防效。  结论  3株拮抗木霉菌具有较好的抑菌效能和促生防病效果,应用前景良好。      

烟草灰霉病复合生防细菌的筛选

采用平板对峙法和孢子萌发法,测定470株烟草内生细菌对烟草灰霉病菌的抑菌活性,初筛出抑菌作用较强的27株菌株;利用烟叶组织法进行复筛,获得防治效果超过50%的12株菌株,属于芽孢杆菌属或假单胞菌属;测试了7株生防菌之间的亲和性,除菌株Y98外,其他菌株之间均表现亲和;根据菌株亲和性及生防效果,选择5株生防菌株进行混配,测定其对烟草灰霉病的防治效果,发现芽孢杆菌菌株Y11与假单胞菌菌株Y141在其比例为2:1时的防效较好,且高于单菌株处理。      

棘孢木霉与30%霜霉·嘧菌酯协同防治烟草镰刀菌根腐病

为筛选防治烟草镰刀菌根腐病高效、安全的复配剂,采用菌丝生长速率法测定生防棘孢木霉Tr-0111、化学杀菌剂30%霜霉·嘧菌酯对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的毒力及两者的相容性,同时测定两者混配对尖孢镰刀菌的毒力系数,并通过盆栽试验评价其对烟草镰刀菌根腐病的防治效果。结果表明,30%霜霉·嘧菌酯和棘孢木霉Tr-0111对尖孢镰刀菌均具有较强的毒力,其EC₅₀值分别为0.064 3 mL/L、2.36×10² cfu/mL,且两者相容性好。除V_{30%霜霉·嘧菌酯}∶V_Tr-0111=4∶6时无增效作用,其他8个混配比例均具有增效作用,其中V_{30%霜霉·嘧菌酯}∶V_Tr-0111=7∶3时增效比率最高,为1.16,抑菌率为68.37%。盆栽试验结果表明,V_{30%霜霉·嘧菌酯}∶V_Tr-0111=5∶5时,对烟草镰刀菌根腐病的防效最好,为78.18%,其次为7∶3和1∶9,防效分别为77.27%和72.7...     

生防真菌与氨基寡糖素组合对烟草黑胫病和根黑腐病的防治

针对烟草黑胫病和根黑腐病两种烟草土传病害日益加重的现状,利用生防真菌棘孢木霉MX菌株和产紫青霉Q2菌株分别与植物诱抗剂氨基寡糖素进行组合,在盆栽条件下测定了其分别在两种病害胁迫下的抗病效果。结果表明,产紫青霉Q2和棘孢木霉MX对烟草黑胫病菌和根黑腐病菌均有较强的拮抗作用,其发酵滤液能有效抑制两种病原菌的生长,与氨基寡糖素组合后能够更好地促进烟草幼苗的生长,对黑胫病和根黑腐病的防治效果均达到65%以上,能显著提高发病烟草中防御酶PAL、SOD、POD的活性。     

烟草赤星病拮抗菌Q96的筛选鉴定及其防病效果研究

为分离筛选对烟草赤星病有良好防效的拮抗菌,以烟草赤星病链格孢菌为靶菌,从蚯蚓粪中经初筛和复筛获得拮抗菌,通过形态、生理生化特征和16S rDNA分析鉴定拮抗菌种类,并对烟草赤星病的防治效果进行了研究。结果表明,筛选出一株拮抗菌Q96,初筛和复筛的抑菌率均超过60%,经鉴定为副地衣芽孢杆菌（Bacillus paralicheniformis）,其活菌液（稀释10倍）对孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别为73.33%和79.68%,粗发酵液离体防效可达60.04%。Q96菌株可作为抗烟草赤星病生防菌剂的菌种资源。     

烟草青枯病拮抗菌在有机肥中的定殖效率及田间防治效果

为有效防治青枯病,采用多种拮抗菌复配菌剂添加至生物有机肥,施用于烟田,研究其对烟田土壤中有益微生物、病原微生物的影响及对青枯病的控制效果。结果显示,30%茶枯+70%烟草秸秆粉碎物（生物有机肥C）中添加的拮抗菌有较好的定殖率,枯草芽胞杆菌JK-4、解淀粉芽胞杆菌JK-10菌株在生物有机肥C中的定殖率分别达到了945.7%、1970%,链霉菌LC-7菌株在生物有机肥C中定殖率达到496.7%,同时其防治青枯病的效果最好,在烟草旺长期防治效果达到57.40%,在青枯病发病高峰期防治效果为37.11%。     

诱导植物提高抗病毒作用制剂防治烟草病毒病试验研究

具有诱导植物提高抗病毒作用的生物及化学激发子农药是新兴的生物农药,研究了几种具有诱导烟草提高抗病毒作用的生物及化学激发子对烟草花叶病毒病的盆栽和田间诱抗效果.结果表明,该类农药能显著诱导烟草抑制病毒病的发生和发展,对病毒病有较好的防治效果.     

两株根际促生细菌对TMV的生防作用研究

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）是危害烟草的主要病毒之一,其寄主范围广、侵染力和抗逆性强,尚无有效的抗病毒药剂。利用植物根际促生细菌（PGPR）对寄主的促生以及对病毒的钝化作用进行病毒病早期预防,是控制TMV的有效途径。本文对筛选到的两株PGPR菌株Sa和Sk进行了菌株鉴定及促生和防病作用研究。结果表明:Sa为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、Sk为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。在霍格兰氏营养液中添加Sa、Sk的发酵上清液,能显著促进烟苗的根系发育和茎叶生长;“半叶法”试验结果显示Sa、Sk的发酵上清液能在体外钝化TMV,并且Sa的粗蛋白溶液、去蛋白上清、蛋白失活后的粗蛋白溶液对TMV的抑制效果分别为85.2%、83.1%、36.2%,说明Sa的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要包括蛋白和非蛋白两类;Sk的粗蛋白溶液、去蛋白上清抑制TMV的效果分别为88.0%、0%,说明Sk的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要为蛋白类。利用TMV30B侵染性克隆,观察到Sa、Sk发酵上清液能显著抑制病毒的初侵染。室内栽培烟株喷施Sa、Sk发酵上清后,对TMV的防效分别为27.71%和18.55%。芽孢杆菌Sa生防效果好于Sk,具备抗病毒剂的开发潜力。      

一株海洋梅久兰链霉菌的分离鉴定及其抗真菌作用研究

采用梯度稀释分离法从连云港海域海水、海泥、近海土壤、海洋动物以及海洋植物样品中,分离出海洋放线菌22株,采用平板对峙培养法测定不同放线菌菌株的抑菌作用,有9个放线菌菌株有抑菌作用。其中ZW-1菌株的抑制活性最强,该菌株及其发酵液对供试的小麦雪腐镰刀菌(Fusarium nivale)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、菠菜早疫病菌(Alternaria solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)等8种植物病原真菌都有较强的抑制作用,可导致病原真菌菌丝细胞壁膨大,原生质体收缩,同时可抑制菠菜早疫病菌(A. solani)分生孢子的萌发和芽管的伸长。通过培养特性、细胞形态观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析,将海洋放线菌ZW-1菌株鉴定为梅久兰链霉菌(Streptomyces mediolani)。     

烟草种子携带病原真菌的分离与鉴定

采用无菌滤纸培养烟苗的方法对贵州主栽的4个烤烟品种裸种进行了带菌检测,并对种子携带真菌进行了分离与鉴定。结果表明,K326、贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号的种子带菌率分别为15%、77.78%、21.67%和61.39%。分离和鉴定发现种子携带的真菌有链格孢菌属（Alternaria sp.）、拟茎点霉属（Phomopsis sp.）、支顶孢属（Acremonium sp.）、柄孢壳属（Zopfiella sp.）、曲霉属（Aspergillus sp.）、镰孢菌属（Fusarium sp.）、青霉菌属（Penicillium sp.）、赤霉菌属（Gibberella sp.）、芽枝孢菌属（Cladosporium sp.）、离蠕孢属（Bipolaris sp.）和Stagonosporopsis cucurbitacearum等。获得40株真菌中共有22种真菌,优势菌群主要为链格孢属、芽枝孢菌属、镰孢菌属和赤霉菌属。链格孢菌属在4个烤烟品种上均有发现。镰孢菌属主要来自于贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号,其中南江3号种子上最多。芽枝孢菌属仅来自贵烟4号。贵烟4号和南江3号种子上的真菌种类和数量较多。这些种子携带真菌的发现对烤烟种子的生产与加工具有重要的意义。     

Functional characterization, sequence comparisons and distribution of a polyketide synthase gene required for perithecial pigmentation in some Fusarium species.

Polyketides are a structurally diverse class of secondary metabolites produced by bacteria, fungi, plants and animals. The fungal genus Fusarium includes agronomically important plant pathogenic and mycotoxin-producing species and produces numerous polyketides. The study further characterized a polyketide synthase-encoding gene (PKS3 = PGL1) that was previously identified in F. graminearum and F. verticillioides. Disruption of the F. verticillioides PGL1 indicated that it is required for the production of the dark pigment in perithecial walls, as previously shown in F. graminearum. A third PGL1 orthologue was identified in the genomic sequence of N. haematococca (anamorph F. solani f. sp. pisi). Analysis of the carboxy-terminal end of the deduced PGL1 protein indicated that it had a functional domain related to dehydrogenases/reductases that is sometimes present in non-ribosomal peptide synthetases. Comparison of the genomic regions flanking PGL1 in F. graminearum, F. verticillioides and N. haematococca revealed that the extent of gene synteny in this region was greater between F. graminearum and F. verticillioides than between either of these species and N. haematococca. Southern blot analysis indicated that PGL1 occurs widely within the genus Fusarium including species with no known sexual stage.     

雪茄茄芯烟叶工业二次发酵过程中细菌与真菌群落多样性变化分析

【目的】为分析茄芯烟叶在二次发酵过程中细菌和真菌群落多样性及菌群动态变化规律。【方法】以德雪三号初次发酵烟叶为试验材料,采用细菌16S rDNA和真菌ITS1的Illumina MiSeq高通量测序技术,分析烟叶二次发酵0、5、10、15和20 d时细菌和真菌群落结构及丰度信息。【结果】发酵0 d时细菌群落Chao1、ACE和Shannon指数最高,分别为423.38、424.40和4.67;发酵10d时真菌群落Chao1和ACE指数最高,分别为85.82、89.49。基于门水平,随着发酵时间的增加,细菌从以变形菌门（Proteobacteria）为优势转变为以厚壁菌门（Firmicutes）为主,真菌主要优势菌门为子囊菌门（Ascomycota）,相对丰度在71.61%～98.16%之间。基于属水平,葡萄球菌属（Staphylococcus）为整个发酵过程中的主要优势细菌属,在发酵15 d时相对丰度最大（91.25%）;次要优势细菌属由假单胞菌属（Pseudomonas）、马赛菌属（Massilia）等转变为芽孢杆菌属（Bacillus）、土地芽孢杆菌属（Terribacillus）...     

Multiplex polymerase chain reaction assay for the differential detection of trichothecene- and fumonisin-producing species of Fusarium in cornmeal

The genus Fusarium comprises a diverse group of fungi including several species that produce mycotoxins in food commodities. In this study, a multiplex polymerase chain reaction (PCR) assay was developed for the group-specific detection of fumonisin-producing and trichothecene-producing species of Fusarium. Primers for genus-level recognition of Fusarium spp. were designed from the internal transcribed spacer regions (ITS1 and ITS2) of rDNA. Primers for group-specific detection were designed from the TRI6 gene involved in trichothecene biosynthesis and the FUM5 gene involved in fumonisin biosynthesis. Primer specificity was determined by testing for cross-reactivity against purified genomic DNA from 43 fungal species representing 14 genera, including 9 Aspergillus spp., 9 Fusarium spp., and 10 Penicillium spp. With purified genomic DNA as a template, genus-specific recognition was observed at 10 pg per reaction; group-specific recognition occurred at 100 pg of template per reaction for the trichothecene producer Fusarium graminearum and at 1 ng of template per reaction for the fumonisin producer Fusarium verticillioides. For the application of the PCR assay, a protocol was developed to isolate fungal DNA from cornmeal. The detection of F. graminearum and its differentiation from F. verticillioides were accomplished prior to visible fungal growth at <10(5) CFU/g of cornmeal. This level of detection is comparable to those of other methods such as enzyme-linked immunosorbent assay, and the assay described here can be used in the food industry's effort to monitor quality and safety.     

人参根腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌活性

目的：从人参根际土壤中筛选出拮抗人参根腐病的菌株,初步研究其抑菌作用。方法：采用平板稀释法从人参根际土壤中分离获得菌株,以人参根腐病菌为靶标菌采用平板对峙法筛选出拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选出的拮抗菌进行鉴定;检测拮抗菌无菌发酵液对根腐病菌菌丝生长、孢子萌发的影响,同时测定拮抗菌的抑菌谱。结果：分离获得一株对人参根腐病原菌拮抗作用较强的菌株HB-3,经鉴定菌株HB-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株无菌发酵液对人参根腐病菌菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用;菌株HB-3的抑菌谱较广,对根腐病菌、疫霉病菌、锈腐病菌、菌核病菌、灰霉病菌均有一定的抑菌活性。结论：筛选得到一株解淀粉芽孢杆菌HB-3,能显著抑制人参根腐病菌的生长,对人参根腐病有较强的生物防治效果。     

传统发酵豆酱中产蛋白酶菌株的筛选

该研究从东三省各地采集家庭自制豆酱254份,通过分离培养,获得纯培养真菌菌株389株。采用脱脂牛奶平板初筛获得具有蛋白酶活性的菌株31株,其中曲霉属真菌12株、青霉5株、毛霉4株、镰孢菌3株、帚霉1株、芽枝孢3株、犁头霉1株、红曲2株。通过发酵复筛提取其粗酶液,用福林酚法测定粗酶液的蛋白酶活性,筛选出了两株具有较高蛋白酶活性的米曲霉。