麦麸中烷基间苯二酚诱导HepG2细胞自噬和凋亡

采用制备色谱从麦麸中制备烷基间苯二酚同系物(alkylresorcinols,ARs),研究其诱导HepG2细胞自噬和凋亡作用。结果表明:经液相色谱-质谱确认制得的烷基间苯二酚为C19:0、C21:0同系混合物;细胞毒性实验结果显示,10～320 μg/m L的ARs能显著抑制Hep G2细胞生长(P<0.05、P<0.01、P<0.001),且呈剂量依赖效应;与对照组相比,160 μg/m L ARs作用24 h,Hep G2细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),剪切型Caspase3、Bax/Bcl-2蛋白表达高度显著升高(P<0.001),Beclin-1、LC3II蛋白表达极显著升高(P<0.01),p62蛋白表达极显著降低(P<0.01)。这些结果表明,ARs可以诱导Hep G2细胞自噬,激活Caspase通路诱导Hep G2细胞凋亡,抑制Hep G2细胞生长。     

天然产物通过细胞自噬调节抑制癌症的研究进展

传统的化疗手段在抑制肿瘤细胞生长的同时也会损伤到正常细胞,所以其临床治疗效果受到很大限制。新型天然产物抗癌化合物基于其安全性和有效性,将会成为人工合成化合物的替代物。临床前和临床研究已经证实一些植物天然产物（如白藜芦醇、姜黄素、人参皂苷等）具有抗癌潜力。本文综述具有代表性的天然产物如何通过靶向细胞内自噬通路诱导肿瘤细胞死亡及其涉及到的信号通路,为其进一步开发应用于原发性和转移性肿瘤的治疗提供新的思路。     

竹节参总皂苷通过激活自噬抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡

观察竹节参总皂苷(total saponins of Panax japonica,TSPJ)对自然衰老大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并从自噬角度探讨其作用机制。取18月龄SD雄性大鼠随机分为模型组、TSPJ低、高剂量组,每组10只;TSPJ低、高剂量组分别投食给予TSPJ 10、30 mg/kg,模型组每天投食等量正常饲料,持续给药至24月龄;同时取10只6月龄大鼠作为对照组。与青年对照组相比,自然衰老组心肌细胞排列紊乱,肌纤维断裂,心肌细胞凋亡指数增加3倍。TSPJ能有效改善衰老大鼠心脏组织的形态结构和心肌细胞凋亡下降55%;衰老模型组Bax、Caspase-3、Caspase-9、p62蛋白表达分别升高了9.5,1.8,4.1,3.4倍,Bcl-2、Bcl-2/Bax及、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1分别下降了98%,99%,70%,48%;TSPJ组中Bax,Caspase-3,Caspase-9和p62分别下调87%、65%,70%和65%,Bcl-2,Bcl-2/Bax比值,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1表达分别升高了12.75,138.5,5.68和2.6倍。结果表明,竹节参总皂苷能有效地改善衰老大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与TSPJ激活衰老大鼠心肌细胞自噬相关。     

皱纹盘鲍内脏脂质对人肝癌细胞HepG2脂质调节作用研究

本研究探讨了皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)内脏脂质(Haliotis discus hannai visceral lipid,HDHL)对人肝癌细胞HepG2的脂质代谢的影响,对HDHL脂肪酸成分、HepG2细胞活性、细胞内胆固醇和甘油三酯含量以及脂肪酸代谢相关m RNA基因的表达情况进行了研究。研究发现HDHL中不饱和脂肪酸占总脂肪酸含量59.50%,其中多不饱和脂肪酸占29.71%。HDHL与HepG2细胞共孵培养24 h及48 h后,浓度为0～240μg/m L的HDHL对HepG2细胞无毒性影响。30～240μg/m L HDHL可显著降低HepG2总胆固醇含量,30～120μg/m LHDHL共孵HepG2细胞后,细胞内甘油三酯含量显著降低。q PCR结果显示HDHL可显著降低HepG2细胞脂肪酸合成相关基因SREBP1c、ACC1、FAS和脂肪酸转运吸收相关基因CD36 m RNA水平的表达,提高线粒体脂肪酸氧化基因CPT1的表达。因此,HDHL可能通过抑制脂肪酸合成和脂肪酸转运,增强线粒体中脂肪酸氧化等途径有效调节细胞脂质代谢,该研究为脂质调节功能食品的开发提供理论依据。     

基于HPLC-MS脂质组学研究棕榈酸 对人正常肝细胞脂质代谢的影响

对棕榈酸（PA）处理的人源肝细胞中的脂质进行脂质组学分析,探讨PA对肝细胞脂质代谢的影响。采用基于HPLC-MS的脂质组学技术,识别和量化PA处理人正常肝细胞后改变的内源性脂质代谢产物,并利用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果表明,通过脂质组学分析共检测到1 000多种脂质代谢物,又可细分为22种质类别,根据正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）显示有628种脂质代谢物含量存在显著差异。其中PA处理组中溶血磷脂酰胆碱（LPC）、磷脂酰肌醇（PI）、神经酰胺（Cer）、己糖神经酰胺（Hex1Cer）、鞘氨醇（SPH）、甘油二酯（DG）、甘油三酯（TG）、酰基肉碱（AcCa）和N-酰基乙醇胺（AEA）含量显著升高,鞘磷脂（SM）、二己糖神经酰胺（Hex2Cer）和胆固醇酯（ChE）含量显著下降。与对照组相比,PA处理组G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞比例上升,即细胞周期发生阻滞。综上,PA显著改变了肝细胞的脂质代谢谱,诱导细胞G2/M期阻滞。     

山茶油对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂质代谢的影响

目的:探究山茶油对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂质代谢的影响。方法:首先,利用CCK8法测定不同浓度山茶油对HepG2细胞活性的影响以选定适宜浓度进行后续实验。其次,采用不同浓度山茶油对HepG2细胞进行24 h干预,再使用0.5 mmol/L游离脂肪酸处理24 h诱导建立脂肪肝细胞模型。然后,通过油红O染色法判断各组间的脂滴生成情况,并参照相关试剂盒测定各干预下细胞内脂质水平的变化情况。最后,通过qRT-PCR法测定细胞内脂质代谢相关基因的表达,以探讨山茶油调节脂质代谢的作用及其可能的机制。结果:与正常对照组相比,造模干预组细胞内的甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著降低(P<0.05);与造模干预组相比,茶油预处理显著逆转了游离脂肪酸诱导细胞内TG、HDL-C和LDL-C含量的变化(P<0.05)。qRT-PCR结果表明,与造模干预组相比,山茶油预处理显著降低了游离脂肪酸诱导的HepG2细胞内脂肪酸转运酶(CD36)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(...     

天然产物通过调控miRNA和自噬延缓阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种与年龄增长密切相关的神经系统退行性疾病,发病后将严重影响老年人的健康生活,但AD的病理机制十分复杂,至今临床上常用的抗AD药物也只能改善中、轻度AD患者的症状,并不能预防、终止和逆转AD进程的发展。因此研究已逐渐转到能够将预防和治疗结合为一体的天然产物上,并且已有众多研究证实天然产物能够改善AD的两大病理特征——老年斑块和神经纤维缠结,而目前越来越多的研究发现了天然产物与AD相关的miRNA和自噬的关联。miRNA与自噬是目前AD研究的两大最新靶点,而随着自噬和miRNA在AD中的作用机制逐渐清晰,进一步证实了天然产物在AD防治方面发挥的重要作用。     

不同脂肪酸对自噬作用的研究进展

脂肪酸是机体赖以生存的物质之一。自噬是细胞的一种自我保护程序,也是与凋亡、焦亡、坏死等并列的细胞程序性死亡。对不同种类脂肪酸与自噬之间的关联及脂肪酸对自噬调控的方式进行综述,以期为部分疾病的治疗开辟新的途径。     

鼠尾草酸通过激活AMPK降低游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪积累

目的:探究鼠尾草酸对游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导的Hep G2细胞脂肪积累的作用机制。方法:采用FFAs(油酸-棕榈酸浓度比2∶1)诱导建立HepG2细胞高脂模型,使用不同浓度的鼠尾草酸(15、20μmol/L)、FFAs(1mmol/L)、AMP依赖的蛋白激酶(adenosine5’-monophosphateactivatedproteinkinase,AMPK)抑制剂(2μmol/L)处理细胞24h后,通过测定细胞内脂肪含量、细胞活力、总胆固醇(totalcholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量,脂肪代谢相关基因的转录表达水平以及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶的表达水平,研究鼠尾草酸的降脂作用机制。结果:15、20μmol/L的鼠尾草酸,1mmol/L的FFAs单独或共同处理细胞24h对细胞的活力没有显著性影响;与正常组相比FFAs处理细胞24h,油红O染色结果显示,FFAs能显著增加细胞内的脂肪含量;FFAs能增加细胞内TC、TG含量,增加脂肪合成相关基因的表达水平,降低脂肪分解相关基因的表达水平(P<0.0...     

萜烯类化合物基于细胞自噬的初步探究

通过采用不同浓度的萜烯类化合物处理细胞,探究青稞酒中所含有的7种萜烯类化合物是否会对细胞自噬产生影响。LO2细胞设立对照组和不同质量浓度萜烯类化合物处理组;采用细胞增殖检测试剂盒8法检测细胞存活率;采用蛋白免疫印迹法检测LO2细胞中微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3,LC3)的表达情况;采用实时荧光定量(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测LC3和P62蛋白的mRNA表达水平;采用荧光免疫法观察LC3和P62/SQSTM1蛋白的表达水平。结果表明,在营养及饥饿条件下,α-蒎烯处理后的LC3蛋白表达水平和mRNA表达水平呈浓度依赖性上调,P62的mRNA表达水平降低。其余6种萜烯类化合物：香茅醇、β-石竹烯、月桂烯、罗勒烯、柠檬烯、β-紫罗酮对细胞自噬均无显著影响。在LO2细胞中,萜烯类化合物α-蒎烯或具有促进细胞自噬的作用,其具体作用机理仍需进行深入研究。     

(＋)-儿茶素与表没食子儿茶素没食子酸酯对乙醇诱导HepG2细胞脂代谢紊乱及氧化应激的影响

目的：体外对比(＋)-儿茶素（(＋)-catechin,(＋)-Cat）与表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）对乙醇诱导的HepG2细胞脂代谢紊乱及氧化应激的差异。方法：以HepG2细胞为实验对象,乙醇作用组（ETOH组）加入作用浓度300 mmol/L乙醇,(＋)-Cat＋ETOH组加入200 μmol/L (＋)-Cat和300 mmol/L乙醇,EGCG＋ETOH组加入200 μmol/L EGCG和300 mmol/L乙醇;另设相同浓度的(＋)-Cat组、EGCG组及正常组,各组均在37 ℃培养24 h。检测各组HepG2细胞甘油三酯（triglyceride,TG）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力和丙二醛（malondialdehyde,MDA）浓度;油红O染色观察各组HepG2细胞的脂滴状态;荧光定量聚合酶链式反应法检测各组HepG2细胞固醇调节元件结合蛋白1（sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1）、二脂酰甘油转移酶2（diacylglyceryltransferase 2,DGAT2）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisomal proliferators activate receptors α,PPARα）、肉毒碱棕榈酰基转移酶1（carnityltransferase 1,CPT1）mRNA相对表达水平。结果：ETOH组细胞发生氧化应激,同时TG含量明显高于正常组、(＋)-Cat组和EGCG组;(＋)-Cat＋ETOH组和EGCG＋ETOH组细胞氧化应激反应得到明显改善,同时TG含量显著低于ETOH组（P＜0.05,P＜0.01）,并且显著下调SREBP-1和DGAT2 mRNA表达量（P＜0.05,P＜0.01）,上调PPARα和CPT1 mRNA表达量（P＜0.05,P＜0.01）。结论：(＋)-Cat与EGCG均能改善乙醇诱导的HepG2细胞氧化应激反应和脂代谢紊乱,且EGCG的效果更好。     

高效液相色谱法测定大蒜肠溶片中蒜氨酸的含量

目的:测定大蒜肠溶片中蒜氨酸的含量.方法:采用Zorbax C18色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm),柱温25℃,流动相为甲醇:水(30:70),流速0.5ml/min,检测波长为214nm.结果:蒜氨酸浓度在0.0122～0.61mg/ml范围内线性关系良好,平均回收率为97.2%.结论:所建方法简便快速,准确可靠,可用于大蒜肠溶片的含量测定.     

高效液相色谱法测定大蒜中蒜氨酸含量

采用高效液相色谱法对大蒜中的蒜氨酸进行定性定量研究,利用微波灭酶、水煮灭酶、有机溶剂冷冻灭酶3种方法对大蒜中蒜氨酸进行提取。蒜氨酸的出峰时间为3.717min,测得蒜氨酸的含量为:0.823%、0.730%和0.156%。同时对大蒜破碎放置1d后体系中剩余蒜氨酸的含量进行了分析,测得剩余蒜氨酸含量占蒜氨酸总量的23.0%。通过向破碎的大蒜体系中添加磷酸吡哆醛(PLP),能够显著提高蒜氨酸的转化率。     

红树莓提取物降低油酸诱导HepG2细胞脂肪的积累

为研究红树莓对人肝细胞脂肪积累的影响,本文以红树莓果和籽的提取物为原料,测定了提取物中的活性成分,并通过体外油酸诱导建立HepG2细胞脂肪积累模型,以噻唑兰染色吸光度(OD值)、甘油三酯(TG)含量、细胞内脂质含量三个指标,探索红树莓果和籽提取物对肝细胞脂肪积累的影响。试验结果表明:红树莓果提取物中总酚15.18±0.94 mg GAE/g、黄酮1.25±0.05 mg RE/g、原花青素20.35±1.06 mg CE/g、花色苷1.15±0.70 mg CGE/g;红树莓籽提取物中总酚15.35±1.55 mg GAE/g、黄酮11.22±0.66 mg RE/g、原花青素27.08±0.99 mg CE/g、花色苷未检出;以牛血清白蛋白(BSA)作为溶剂配制的1000μmol/L油酸造模剂孵育HepG2细胞24 h可成功诱导肝细胞脂肪积累;红树莓提取物能显著降低1000μmol/L油酸诱导的肝细胞脂肪积累,其中200μg/mL红树莓果提取物处理细胞时,与模型组相比,胞内脂质含量降低了25.93%,TG含量降低了37.23%;4mg/mL红树莓籽提取物处理时,胞内脂质含量降低了47.12%,TG含量降低了46.23%。红树莓提取物中富含活性成分,能够降低高脂细胞模型内脂肪的积累,对脂肪肝等疾病具有一定的预防作用。     

咖啡碱和绿原酸对高脂饮食小鼠体质量、脂类沉积及肝脏脂质代谢基因表达的影响

研究咖啡主要成分咖啡碱和绿原酸对高脂饮食诱导的肥胖小鼠体质量、脂类沉积及肝脏脂类代谢基因表达的影响。50只雌性ICR小鼠被随机分成5组:对照组、高脂组、咖啡碱、绿原酸、咖啡碱+绿原酸,给药组分别在饮水中添加0.05%咖啡碱、0.2%绿原酸、0.05%咖啡碱+0.2%绿原酸,饲养14周。饲养期间每周测1次体质量。饲养结束后心脏采血,摘取脏器和腹腔内脂肪(intraperitoneal adipose tissues,IPAT)并称质量。测定血糖浓度、血中及肝脏中脂质含量。通过实时定量聚合酶链式反应测定肝脏中脂质代谢相关基因AMPK、HMG-CoAr、FASN、ACO的mRNA表达量。与高脂组相比,咖啡碱+绿原酸能明显抑制小鼠体质量和IPAT质量的增加;咖啡碱、咖啡碱+绿原酸明显降低血糖和总胆固醇浓度;绿原酸投喂小鼠血中低密度脂蛋白胆固醇浓度显著降低,而血中游离脂肪酸浓度上升;咖啡碱、咖啡碱+绿原酸显著降低肝脏中总胆固醇和甘油三酯的含量;咖啡碱和咖啡碱+绿原酸使AMPK基因相对表达量显著上升,FASN基因相对表达量显著下降;3组给药组的ACO基因相对表达量显著上升,HMG-CoAr基因相对表达量显著下降。咖啡碱+绿原酸的减肥作用可能通过调节肝脏脂质代谢相关基因的表达,来降低血中和肝脏中脂类的含量,抑制脂肪沉积,抑制小鼠体质量增加,且它们有协同作用。     

辣木异硫氰酸酯通过活化AMPK抑制3T3-L1脂肪细胞脂质积累

探究辣木异硫氰酸酯-4-[(α-L-rhamnosyloxy) benzyl] Isothiocyanates（MIC-1）抑制3T3-L1脂肪细胞脂质积累的作用及可能的调控机制。体外诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,用MIC-1干预48 h后检测细胞脂质积累情况,甘油三酯（TG）、甘油（Gly）和游离脂肪酸（FFA）含量;qRT-PCR检测脂代谢相关基因的表达;Western blot法测定腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）蛋白磷酸化水平和氧化物酶体增殖激活受体γ（PPARγ）蛋白表达水平。结果表明,MIC-1对3T3-L1前脂肪细胞存活率无影响;与对照组相比,MIC-1可降低脂肪细胞内脂滴分布及细胞着色程度,降低细胞内TG含量,减少FFA及甘油的溢出。MIC-1处理浓度达4 mol/L时,TG和FFA浓度分别下降64.00%和75.00%。同时,显著下调细胞中PPARγ（46.00%）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）（62.00%）的mRNA表达水平;显著上调AMPK蛋白磷酸化水平（64.47%）和下调PPARγ（52.10%）蛋白表达水平。以上结果表明,MIC-1通过促进TG分解和抑制TG的合成,从而抑制脂质积累,其机制可能与AMPK的活化有关。