蜜环菌的活性成分研究及其在功能性食品中的应用

蜜环菌(Armillariamellea)是一种与传统中药天麻(GastrodiaelataBlume)共生的著名的药用真菌。经国内外多年的研究,分离得到了蜜环菌多糖、倍半萜类化合物和嘌呤类化合物等多种活性成分并对其理化特性和生物活性进行了研究。经功能性实验证明,蜜环菌具有较强的神经调节功能,有明显的镇静作用,抗惊厥作用等,并可提高机体免疫功能。现已开发了大量的蜜环菌产品,包括脑心舒口服液、蜜环菌浸膏、蜜环菌片、蜜环菌糖浆等。本文主要介绍了蜜环菌的研究近况以及蜜环菌在功能性食品中的应用前景。     

蜜环菌水溶性多糖的抗氧化活性研究

目的:通过蜜环菌水溶性多糖对·OH、O2-·和DPPH·三种自由基清除作用,评价其抗氧化性能,为蜜环菌药物制剂的活性研究及其产品的质量检测标准提供重要参考。方法:经热水浸提、除蛋白等步骤分离纯化到水溶性多糖,以抗坏血酸和TBHQ为对照,采用分光光度法评定其抗氧化特性。结果:蜜环菌水溶性多糖对三种自由基均有不同程度的清除活性,对三种自由基的清除能力是DPPH·>·OH>O2-·,当清除率达到90%以上时,清除DPPH·、·OH和O2-·的所需的多糖浓度分别为1.0、5.0、6.0mg·mL-1,蜜环菌多糖的清除能力显著。结论:蜜环菌水溶性多糖在体外具有较明显的抗氧化活性,在实验浓度范围内,抗氧化效果与浓度呈显著的线性相关。作为一种重要的天然活性物质,蜜环菌多糖的抗氧化活性和抗衰老作用将具有较高的应用价值。     

响应面法优化酶法提取蜜环菌多肽及其抗疲劳活性

以蜜环菌子实体为原料,采用酶解法制备蜜环菌多肽。在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken中心组合实验设计原理,以水解度为响应值,研究底物浓度、加酶量、酶解时间、酶解温度对响应值的影响。通过游泳实验建立小鼠疲劳模型,考察蜜环菌多肽对小鼠游泳时间、肝糖原、肌糖原、尿素氮(BUN)、乳酸(LA)、乳酸脱氢酶(LDH)等指标的影响。结果表明:酶解法提取蜜环菌多肽的最佳工艺为:底物浓度7.4%,加酶量2%,酶解温度51℃,酶解时间4.6 h,水解度为35.61%,与理论值接近。以中剂量组为例,相对于空白组,蜜环菌多肽可以使小鼠肝糖原和肌糖原的含量分别提高109.01%和58.33%,显著降低代谢产物尿素氮水平36.99%、乳酸水平30.33%,乳酸脱氢酶的活性提高9%,以上数值p0.05。综上蜜环菌多肽具有提高抗疲劳能力的作用。     

硒对蜜环菌的作用规律及其在多糖中的积累

采用不同硒浓度对蜜环菌进行了补硒培养,研究了硒对蜜环菌生长、蜜环菌多糖产率的影响以及蜜环菌对硒的积累。结果表明:浓度为10mg/L以下的硒能够促进蜜环菌的生长,超过该浓度之后,硒对蜜环菌的生长产生阻碍;在所设计的浓度范围内,硒能够促进蜜环菌胞内外多糖的合成和分泌。蜜环菌胞内外多糖中硒质量分数都随着硒处理浓度的增加而增加,但硒积累量变化趋势不尽相同。胞内多糖的硒积累量在硒处理浓度为10mg/L时后趋于稳定;胞外多糖硒积累量在硒处理浓度超过5mg/L后仍有增长趋势。     

蜜环菌抑菌作用的初步研究

采用滤纸片法、液体培养法和活菌计数法,研究了蜜环菌菌索提取液对常见微生物的抑制作用。通过测定MIC值,蜜环菌的抑菌能力依次为:大肠杆菌>金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌>啤酒酵母菌。15%的蜜环菌浸提液可抑制细菌生长,高于20%的蜜环菌浸提液可对霉菌和酵母菌产生抑制作用。     

蜜环菌水溶性多糖的分离鉴定与发酵条件优化

目的:筛选出产蜜环菌多糖和菌丝体生长的最适碳氮源,对蜜环菌水溶性多糖进行结构和组成分析。方法:改变蜜环菌发酵的不同种类碳氮源,测定多糖含量和菌体干重,经热水浸提、除蛋白等步骤分离纯化到水溶性多糖,利用紫外、红外光谱、气相衍生化法分析其基本结构信息。结果:红薯粉和豆粕的组合最适合产多糖,玉米浆和玉米粉的组合菌丝体得率最高;多糖结构由吡喃葡萄糖组成。结论:在富含天然类成分的培养基中,蜜环菌菌丝体生长和产多糖能力较高;提取到的水溶性多糖,成分单一;糖醇乙酸酯气相衍生化法可简便、准确地测出蜜环菌多糖中所含的各种单糖。     

固态发酵生产蜜环菌饮料

以蜜环菌固态发酵物为原料制得一种蜜环菌饮料。以蜜环菌固态发酵物为原料,提取其中的多糖等营养和药效成分,进行风味调配,通过正交试验和感官评价的方法确定蜜环菌饮料的配方。该发酵饮料的培养基配方为:白砂糖1.5%,大米80%,黄豆1%,麸皮10%,红薯7.5%;饮料配方为:蜜环菌发酵液添加比例为30%、白砂糖为20 g/L、柠檬酸0.6 g/L、黄原胶0.2 g/L,测得成品饮料中各成分的含量为:多糖0.049 mg/mL,还原糖0.042 mg/mL,蛋白质53.0 mg/mL,氨基酸1.226 mg/mL。饮料的感官指标、理化指标和微生物指标均达国家标准。     

蜜环菌液体培养基配方优选及其活性成分和抗氧化活性研究

目的 从4种蜜环菌液体培养基配方中筛选出最佳液体培养基配方,并测量其菌丝提取物和发酵液提取物的活性成分含量及抗氧化活性。方法 采用目前4种较常用的液体培养基配方在相同温度、转速、时间条件下对蜜环菌进行液体发酵,制备菌丝提取物和发酵液提取物,通过紫外分光光度法测量其主要活性成分含量和抗氧化活性。结果 4种配方菌丝生物量、生物活性物质含量及抗氧化能力差异显著。其中配方1菌丝生物量最高,为1.21 g/L,显著高于其余3种配方(P<0.01, P<0.001)。4种配方菌丝提取物总黄酮、总三萜、总酚含量差异显著,均为配方2最高且显著高于子实体(P<0.001,P<0.01);发酵液提取物主要活性物质含量,配方4总黄酮和总酚含量最高,配方2总三萜含量最高,均显著高于子实体(P<0.01, P<0.001)。抗氧化能力方面,配方1菌丝提取物·OH清除率及总还原力最高;配方4发酵液提取物总还原能力表现最佳,且抗氧化能力表现更为稳定。结论 针对不同目标产物筛选出了具体的最佳蜜环菌液体培养基配方,对后续蜜环菌的研究提供参考借鉴意义,也为今后蜜环菌的开发利用奠定基础。     

四种食用菌菌丝体富集有机钙能力的研究

目的:从硫磺菌、茯苓、红曲和蜜环菌中筛选富钙率和钙有机化程度高的食用菌,并研究富钙高的硫磺菌液体培养时富钙对主要活性成分齿孔酸含量的影响。方法:采用生物富集方法研究无机钙的添加对四种食用菌生长的影响,采用静置浸出法分析菌丝体钙有机化程度,并用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）分析硫磺菌主要活性成分齿孔酸的含量。结果:固态培养时,在适宜的加钙量下,硫磺菌的生长均优于茯苓、蜜环菌、红曲。液态培养在加钙量为100 mg/L时,硫磺菌的富钙率显著高于茯苓、蜜环菌和红曲。硫磺菌液态培养加钙量为100 mg/L时,可以达到93.51%的富钙率、85.85%的钙有机化程度和18.34 mg/g的齿孔酸含量,因此硫磺菌具有成为功能性新型补钙产品开发利用的潜质。     

蜜环菌菌粉中甘露醇测定方法的比较与优化

目的：比较对蜜环菌菌粉的不同预处理方法和甘露醇含量测定方法,筛选更有效的方法对蜜环菌菌粉中甘露醇含量进行测定。方法：用醇提取、水提取和超声波破碎法对蜜环菌菌粉进行甘露醇提取比较,并选出最优者;使用浓盐酸与样品液共热去除果糖干扰;采用碘量法和分光光度法分别对蜜环菌菌粉进行甘露醇含量测定比较。结果：以水为溶剂,80℃下对蜜环菌菌粉进行超声波破碎,相对醇提取法和水提取法能有效提高甘露醇测定值;浓盐酸与样品液沸水共热可有效去除果糖干扰;在存在葡萄糖等单糖对甘露醇干扰的情况下,分光光度法测定值相对碘量法更准确。结论：以超声波破碎预处理、浓盐酸去除果糖干扰,采用分光光度法为具体测定方法的组合方式为最佳测定方法。     

蜜环菌菌丝与菌索活性成分含量研究

目的 测定蜜环菌(Armillaria mellea)菌丝、菌索两种形态总多糖、总蛋白、总三萜、麦角甾酮、麦角甾醇、腺苷的含量差异.方法 采用紫外-可见分光光度法测定总三萜、总多糖及总蛋白含量.采用高效液相色谱法测定麦角甾酮、麦角甾醇、腺苷成分含量.结果 蜜环菌菌丝与菌索两种形态的大部分活性成分含量差异显著,其中总三萜...     

榛蘑与菌丝体中蜜环菌素的超声波辅助提取条件优化及其提取物中化合物分析

目的:为分析榛蘑与菌丝体中化合物差异,本研究以东北野生榛蘑子实体和液态菌丝体为研究对象,探究蜜环菌素的最佳提取工艺条件,并对提取物中化合物进行分析。方法:以提取物得率和蜜环菌素含量为指标,采用超声波细胞破碎辅助石油醚进行萃取,通过单因素实验和正交试验对提取工艺参数进行优化;采用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）技术,对液态菌丝体和榛蘑子实体中化合物进行分析和鉴定。结果:确定最佳提取工艺条件为料液比1:20 g/mL,超声波功率300 W,超声时间20 min,溶剂回流时间50 min,在该条件下液态菌丝体提取物得率为26.8%,蜜环菌素含量为0.74 mg/g;液态菌丝体和榛蘑子实体中化合物分别为305和592个。解析出16种蜜环菌素类和5种疑似蜜环菌素碎片物质,其中菌丝体中含有15种蜜环菌素和3种碎片,总含量分别为2.551和0.588 μg/mL;子实体中含有7种蜜环菌素和4种碎片,总含量分别为2.413和2.124 μg/mL。两者同有组分有6种蜜环菌素和2种碎片;液态菌丝体独有9种蜜环菌素和1种碎片为:10-dehydroxymelleoloede、蜜环菌辛素、Arnamiol、蜜环菌壬素、A52a、4-dehydroxyarmillarin、蜜环菌丙素、（4R,5S,7R,9S,13R）-2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin、4’-demethoxyarmillaribin以及碎片C;榛蘑子实体独有1种蜜环菌素和2种碎片为:Melledonal以及碎片D和E。结论:液态菌丝体蜜环菌素类化合物多于子实体中,为开发辅助功能食品及药物提供参考。     

蜜环菌子实体发生条件的初探

目的蜜环菌在人工培养过程中子实体发生条件的摸索;方法固体培养并给予不同的温度、光照、通气条件;结果在给予黑暗交替光照及充足空气的条件下蜜环菌可于18±1℃在三角瓶中萌发子实体;结论在湿度适宜的情况下,蜜环菌子实体的发生温度、光照、通气起关键作用。     

不同蜜环菌菌株酯酶同工酶及过氧化物同工酶的研究

研究不同来源蜜环菌菌株的酯酶同工酶及过氧化物同工酶图谱的变化规律;采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法;同一菌株在不同的培养天数同工酶谱带的条数不同,但具有一定数量迁移率(Rf)相同的谱带贯穿于整个培养时间。不同蜜环菌菌株具有各自特征性谱带。结果表明,同工酶谱带的多少及活性与菌丝的生产速度及代谢的强弱成正相关。     

银杏蜜环保健饮料的研制

以银杏叶、蜜环菌提取液为主要原料,用单因素试验、正交试验法对银杏蜜环保健饮料的生产配方进行了优化,并测定了饮料的成分。结果表明,适宜配方为12%银杏叶提取液、15%蜜环菌提取液、12%白砂糖、0.20%柠檬酸和0.15%CMC-Na。依此配方制备的饮料总糖、可溶性固形物、总酸、蛋白质、黄酮和蜜环菌多糖含量分别为122.13 g/L,12.09%,2.05 g/L,0.12 g/100 g,6.10 mg/L和0.27 mg/L,pH为3.6~4.0;颜色为棕黄色、味美可口、状态稳定。     

天麻蜜环提取物的抗炎活性

天麻蜜环是一种具有良好药用功效的传统药食用菌,然而关于天麻蜜环抗炎活性的研究甚少。作者探索了天麻蜜环的抗炎活性,为开发利用天麻蜜环的抗炎功效以及从中寻找新的天然抗炎化合物提供科学依据。采用MTT法检测提取物的细胞毒性,实验结果显示,仅天麻蜜环正己烷、氯仿高剂量提取物（300 μg/mL） 具有轻微细胞毒性（对细胞活力的抑制率分别为10.7%和17%）,其余各剂量提取物均无细胞毒性;采用脂多糖（LPS） 刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,分别用天麻蜜环正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物（0,30,100,300 μg/mL）干预以检测其抗炎活性,实验结果显示,天麻蜜环正己烷、氯仿、乙酸乙酯提取物均能呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的炎症介质一氧化氮（NO）和炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）的过量分泌,其中乙酸乙酯提取物既具有良好的安全性又有显著的抗炎活性。     

蜜环菌生长培养基的优化及杂菌的分离鉴定

为提高蜜环菌产量,采用正交试验法对蜜环菌生长培养基中葡萄糖、酵母粉、维生素B13个组分的添加量进行优化,利用平板法分离出影响蜜环菌生长的主要杂菌并采用分子生物学的方法对污染菌株进行鉴定。试验结果表明:葡萄糖45 g/L、酵母粉9 g/L、维生素B10.05 g/L为最佳配方。分离出两株霉菌,经过鉴定,分别为橘青霉Penicillium citrinum t1、塔宾黑曲霉Aspergillus tubingensis t2。     

蜜环菌对玉米加工副产物中玉米赤霉烯酮降解效果

以蜜环菌Am-07-22 为发酵菌株,以玉米皮和玉米黄粉为主要研究对象,以玉米赤霉烯酮的降解率为指标,考察不同发酵时间、发酵温度、料液比、接种量对玉米皮和玉米黄粉中玉米赤霉烯酮降解率的影响,并研究蜜环菌Am-07-22 对玉米皮和玉米黄粉不同比例混合物的毒素降解效果及产物中蛋白质和多糖的含量变化。结果表明：蜜环菌降解玉米皮中玉米赤霉烯酮的最佳条件为发酵温度27 ℃、料液比1∶1.5（g/mL）、接种量10%,玉米赤霉烯酮的降解率为93.63%,蜜环菌降解玉米黄粉中玉米赤霉烯酮的最佳条件为发酵温度27 ℃、料液比1∶2（g/mL）、接种量12.5%,玉米赤霉烯酮的降解率为96.60%。蜜环菌Am-07-22 固态发酵不同质量比的玉米皮、玉米黄粉（1∶1、1∶2、2∶1）中玉米赤霉烯酮的降解率分别为95.93%、96.62% 和96.97%,质量比为2∶1 的玉米皮、玉米黄粉中蛋白质和多糖含量提高,分别提高91% 和52%。蜜环菌Am-07-22 不仅对玉米加工副产物中玉米赤霉烯酮有良好的降解效果,同时提高产物中蛋白质和多糖含量。     

蜜环菌人工菌棒基质碳氮比对乌天麻产量及营养品质的影响

分析蜜环菌人工菌棒基质碳氮比对乌天麻产量及基本营养成分含量的影响,并对乌天麻氨基酸品质进行评价。方法 通过大棚内随机区组实验,测定不同种植模式下乌天麻的基本营养成分含量,对其进行单因素方差分析和多重比较,并通过氨基酸评分法对乌天麻中氨基酸营养价值进行评价。结果 蜜环菌人工菌棒基质碳氮比对乌天麻的产量、基本营养成分含量及氨基酸的营养品质均有显著的影响;蜜环菌人工菌棒基质碳氮比为75.94时种植的乌天麻,乌天麻各项营养指标接近对照种植的乌天麻的各项营养指标,显著大于蜜环菌人工菌棒基质碳氮比为60.69、126.39时种植的乌天麻的各项营养指标。蜜环菌人工菌棒基质碳氮比为75.94时种植的乌天麻,其乌天麻必需氨基酸含量与总氨基酸含量的比值为37.03%接近40%,必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量的比值为58.79%接近60%,必需氨基酸的氨基酸比值、必需氨基酸的比值系数分、必需氨基酸比值系数与联合国粮食及农业组织/世界卫生组织提出的氨基酸理想模式较接近。结论 利用蜜环菌人工菌棒种植乌天麻可以获得基本营养成分含量高、氨基酸丰富、必需氨基酸的组成比例相对合理、符合人体吸收利用需求、具有较高营养价值的乌天麻。     

“饮中王”蜜环菌营养保健饮料研制报告

利用蜜环菌的疗效作用和蜂蜜、果汁的保健营养作用，融合饮料的配制技术研制了一种饮料，商品名“饮中王”毒理试验表明，“饮中王”未见中毒症状，属无毒、无遗传、无毒性作用物质，并保留了蜜环菌本来的保健作用。