单宁酶降解五倍子制备没食子酸的工艺优化

以五倍子为原料,单宁酶酶制剂为酶源,研究酶解温度、酶浓度、酶促反应时间以及酶促反应体系pH对单宁酶降解五倍子制备没食子酸得率的影响,再通过响应曲面法优化单宁酶降解五倍子制备没食子酸的工艺参数。结果表明,对没食子酸得率影响较大的因素依次为酶浓度、酶促反应时间、酶促反应体系pH以及酶解温度,最优工艺技术参数为酶浓度16.26 U/g,酶促反应时间5.88h,酶促反应体系pH 5.78,酶解温度40.70℃。在该参数条件下,没食子酸的得率为59.32%。     

一株产单宁酶酵母菌株的筛选

单宁酶全称单宁酯酰水解酶(Tannase,EC 3.11.20),能水解水解性单宁酸和没食子酸酯类中的酯键和缩酚羧键,生成没食子酸和葡萄糖。本实验从青柿、未完全成熟的香蕉、茶叶、茶园土壤等富含单宁酸的环境中取样,采用富集培养技术分离筛选出69株产单宁酶的菌株,并对其菌株的外在特性和产酶活力进行了研究和测定,最终获得一株产单宁酶活力较高的酵母菌株FC6-1。在未进行发酵条件优化前,该菌株所产单宁酶酶活达到2.86U/mL。采用薄层色谱法和SBA-40D生物传感分析仪等方法对该酶酶解产物分析,结果表明该菌株产生的单宁酶能够有效的水解单宁酸生成没食子酸和葡萄糖。     

茶条槭叶没食子酸提取工艺优化及抗氧化活性

为探索茶条槭叶没食子酸的提取技术,以确立其最佳提取工艺,以单宁酶耦联超声-微波协同提取为方法,60%乙醇溶液为提取溶剂,在提取时间、单宁酶添加量、微波功率、提取温度、料液比以及pH 值6 个单因素试验的基础上,以没食子酸得率为评价指标,通过响应面法对提取工艺进行优化,采用离子交换树脂重结晶的方法进一步纯化没食子酸。以DPPH 和ABTS+自由基清除率为指标,评价没食子酸和抗坏血酸（vitamin,VC）的体外抗氧化活性。结果表明,茶条槭叶没食子酸的最佳提取工艺参数为提取时间40 min、单宁酶添加量4.3%、料液比1∶60（g/mL）、微波功率520 W、提取温度60 ℃、pH7。在此条件下没食子酸得率为（26.25±0.41）%,与理论推测值26.64%接近,经纯化后没食子酸的纯度达到90%以上。在DPPH 和ABTS+自由基清除试验中,茶条槭叶没食子酸的清除率均比VC 的清除率高。研究表明单宁酶耦联超声-微波协同提取法能够提高茶条槭叶没食子酸得率,茶条槭叶没食子酸具有较强的抗氧化能力。     

黑曲霉N5-5产单宁酶的酶学性质与固定化

本实验室自主分离的黑曲霉N5-5所产单宁酶已发现对没食子酸丙酯具有良好酶解效果。为了单宁酶的工业化应用,本次研究大批量培养单宁酶,探究其对单宁酸的酶解效果及酶的固定化效果。发酵采用先液体扩培后固体发酵的形式,提酶后利用陶瓷膜过滤技术纯化、浓缩酶液,并对比冷冻干燥和喷雾干燥两种不同干燥方式,还使用树脂载体对酶进行固定化。实验表明,纯化后单宁酶酶活达258.53 U/mL,可水解10%至50%浓度的单宁酸,其中30%以下底物浓度酶解效果较好;冷冻干燥对酶活影响不大而喷雾干燥使酶活降为174.02 U/mL;另外,单宁酶通过树脂载体固定化后,在实验条件下可重复使用至少4次。研究为提高黑曲霉N5-5发酵所产单宁酶的媒介效率、降低酶解反应成本、实现商业化生产建立了理论基础。     

抗氧化剂没食子酸的酶法转化生产研究

没食子酸及其衍生物是一种重要的抗氧化剂,可以用作食品添加剂,也可作为化工原料,用于医药工业、饲料工业、化妆品等工业.没食子酸的传统生产方法是酸水解法和碱水解法,而近年来,微生物发酵法和酶转化法研究正在兴起.黑曲霉B0201直接生料固体发酵五倍子原料,未能检测到没食子酸产物.如果先采用生料固体发酵生产单宁酶,然后再用酶法制备没食子酸却是可行的.研究结果表明,分步制备没食子酸反应4h,0.5L反应液中积累了3.83g的没食子酸.没食子酸的制备过程为:生料发酵生产单宁酶--单宁酶的提取--酶法制备没食子酸,初步构建了一种微生物酶分步制备没食子酸的工艺.     

塔拉单宁酶解生产没食子酸的工艺优化

没食子酸在食品、化工和医药领域具有广泛的应用。相比传统化学法生产,酶法生产具有环境友好、副产物少的优点。本文利用前期开发的热稳定单宁酶Tan1,开发并优化塔拉单宁同步浸提-酶解工艺,实现没食子酸的高效酶法生产。首先通过单因素试验确定了初步浸提-酶解条件为塔拉粉料液比1:30、反应温度60 ℃、加酶量4 mL和反应pH=5。在此基础上,采用Plackett-Burman试验设计,考察不同因素对浸提-酶解反应条件的影响,研究发现温度、pH和料液比是影响提取过程的主要因素。进而,通过响应面试验确定最佳酶解方案为塔拉粉料液比1:40,反应温度65 ℃,pH=4,在此条件下没食子酸得率达到65.98%。此外还研究了在最佳浸提-酶解条件下的连续多次投料反应,结果表明在六次连续投料过程中,塔拉单宁均能被高效水解为没食子酸。此研究为塔拉单宁酶解生产没食子酸的工业化奠定基础。     

黑曲霉B0201产单宁酶生物转化没食子酸工艺研究

该文对微生物产单宁酶发酵五倍子合成没食子酸进行了研究.并对五倍子诱导黑曲霉产生单宁酶进行了生物转化实验研究,开展了产酶条件优化实验,对酶反应转化的最适pH值、温度、反应时间、底物浓度等进行研究,得出了最佳培养条件和微生物酶法制备没食子酸的工艺,为开发五倍子的生物化工加工技术提供参考.     

利用微生物酶两步法生产没食子酸的初步研究

没食子酸及其衍生物是食品、医药等工业的一类重要原料。以黑曲霉B0201为菌种,以五倍子为原料,直接生料固体发酵法不能生成没食子酸,但是,先用生料固体发酵生产单宁酶,再用酶法制备没食子酸是可行的。研究表明,分两步制备没食子酸反应4h时,100mL单宁酶酶液中积累了0.77g没食子酸,建立了一种黑曲霉单宁酶两步法生产没食子酸的制备工艺。     

辣木叶酶法水解提取蛋白质工艺优化

为了优化纤维素酶与果胶酶水解提取辣木叶中蛋白质的提取工艺,以提取率为考察指标,运用单因素与正交试验研究了酶解温度、加酶量、pH、底物质量浓度与酶解时间5个因素对辣木叶蛋白质提取率的影响。结果表明:纤维素酶各因素对辣木叶蛋白质提取率影响的主次顺序为:酶解温度 > 底物质量浓度 > pH > 酶解时间 > 加酶量,最佳工艺条件为:酶解温度40℃、加酶量800 U/L、酶解pH5.0、底物质量浓度7.0 g/L、酶解时间70 min,在此条件下的提取率达到了43.85%。果胶酶各因素对辣木叶蛋白质提取率影响的主次顺序为:加酶量 > 底物质量浓度 > 酶解时间 > 酶解温度 > pH,最佳工艺条件为:酶解温度50℃、加酶量1400 U/L、pH4.0、底物质量浓度9.0 g/L、酶解时间50 min,提取率达到了32.26%。纤维素酶与果胶酶各因素对辣木叶蛋白质提取率的影响均达到了极显著水平（P<0.01）。在最佳工艺条件下,纤维素酶水解辣木叶提取蛋白质的效果优于果胶酶。     

豆渣中水不溶性膳食纤维的提取及性质研究

以豆渣为原料,采用酶法提取豆渣中水不溶性膳食纤维(IDF),并对IDF的性质进行初步研究。其中由单因素试验和正交试验得出豆渣IDF酶法提取的最佳提取工艺为:蛋白酶酶解温度50℃、时间5 h、用量25 mg/g,α-淀粉酶酶解温度70℃、时间1 h、用量6 mg/g,糖化酶酶解温度50℃、时间30 min、用量5 mg/g,此工艺条件下提取率为80.13%。酶法提取豆渣IDF成品的功能特性较好,其持水力为9.66 g/g,溶胀性为4.94 m L/g,持油力为4.92 g/g。     

响应面法优化“酶法-超声波”连续提取核桃青皮多酚

为了优化核桃青皮中多酚类物质的"酶法-超声波"连续提取工艺,在单因素试验基础上,通过Design Expert8.05软件进行响应面设计与优化,得到了预测数学模型。结果表明,酶法提取最佳工艺条件为:采用纤维素酶,酶解温度55.00℃、酶解p H 5.00、酶解时间75.00 min、酶添加量15.00 U/m L、液料比30∶1 m L/g。酶解后继续采用超声波辅助二次提取,以50%"乙醇-水"为提取液,超声时间45 min、超声温度50℃、超声功率100 W,此条件下多酚提取率为61.36%。     

裙带菜孢子叶岩藻黄质提取工艺与抗氧化活性的研究

以裙带菜孢子叶为原料,采用超声波法和酶解法复合提取工艺制备岩藻黄质。考察提取溶剂、料液比、超声时间、酶解时间和酶解温度等因素对岩藻黄质提取量的影响,确定最优条件为:提取剂为乙醇:丙酮(3:1)、料液比1:30(w:v)、超声时间10 min、酶解时间35 min、酶解温度50℃时,岩藻黄质提取量达到最佳(0.75±0.03)mg/g。同时采用电子自旋共振波谱技术检测岩藻黄质对DPPH、羟基自由基的清除率,结果表明,岩藻黄质对DPPH和羟基自由基的清除能力随浓度的升高而增强,对DPPH清除率的IC50为3.93μg/m L,对羟基自由基清除率的IC50为30.07μg/m L,表明岩藻黄质具有较强的抗氧化性。     

单宁酶及其应用研究进展

单宁酶（Tannase EC3.1.1.20）全称单宁酰基水解酶（Tannin Acyl Hydrolase）是一种细胞膜结合酶,可水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚键,生成没食子酸和葡萄糖。是酶解转溶＂茶乳酪＂的专一酶类,近年来伴随着茶饮料工业的迅猛发展而得到深入地研究。美国食品与药物管理局已确定单宁酶为安全产品,在日本单宁酶已通过FAD批准应用。本文就单宁酶的研究情况作一综述。单宁酸广泛应用于制革、酿酒、医药、饮料等领域[2].     

姜辣素的酶法提取及其对亚硝酸盐清除的研究

以生姜为原料,采用酶解法辅助乙醇提取生姜中的姜辣素,以酶解时间、酶解温度、纤维素酶的添加量以及料液比为自变量,以姜辣素提取率为试验指标,通过正交试验确定酶解法提取生姜中姜辣素的最佳工艺条件为酶解时间90 min、酶解温度50℃、纤维素酶添加量0.95%、料液比为1∶50(g/m L)。在最优工艺条件下生姜中的姜辣素提取率最高达到1.85%。提取得到的姜辣素粗提物可用于清除亚硝酸盐,通过正交试验得到姜辣素粗提物清除亚硝酸盐的最优反应条件为:反应体系温度100℃、反应时间15 min、姜辣素粗提物质量浓度为17.5 mg/m L。在该反应条件下姜辣素粗提物对亚硝酸盐的清除率可达(99.32±0.22)%,与1 mg/m L同体积的抗坏血酸溶液对亚硝酸盐的清除能力相当。     

五倍子单宁脂质体的制备及质量评价

以超声波辅助溶剂提取法提取五倍子单宁,逆相蒸发法制备五倍子单宁脂质体,研究制备脂质体最佳工艺,并对在优化条件下制备的脂质体进行理化性质评价。结果表明优化条件为:卵磷脂与胆固醇的质量比(SPC/CH)为2∶1、有机相与水相体积比(O/A)为6∶1、缓冲液p H6.5。在此条件下质量浓度为1mg/m L的五倍子单宁溶液制备的五倍子单宁脂质体包封率为72.26%。结构描述:有效粒径为(79.39±11.62)nm,Zeta电位为-44.7m V,稳定性:4℃条件下储存稳定性良好。逆相蒸发法制备脂质体工艺简单可行,包封率高,粒度均匀,稳定性好,可用于五倍子单宁脂质体的制备。     

酶-微波联用法提取枸杞总黄酮

研究酶-微波联用法提取枸杞总黄酮的最佳工艺条件。采用纤维素酶提取枸杞总黄酮,在单因素试验基础上利用正交试验研究乙醇浓度、酶解温度和酶解p H值对提取率的影响,确定最佳酶解条件。在单因素试验基础上,通过正交试验确定微波提取的最佳工艺参数,采用微波法进一步提取酶解液中的枸杞总黄酮。酶解阶段最佳工艺参数为:乙醇浓度45%,酶解温度50℃,酶解p H4.0;微波阶段的最佳工艺参数为:液固比30 m L/g,微波温度65℃,微波时间4 min。该酶-微波联用法提取枸杞总黄酮的提取率达1.560%。     

榕树果总黄酮酶法辅助回流提取研究

对纤维素酶法提取榕树果总黄酮的工艺进行研究。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验法对酶法提取榕树果总黄酮的条件进行优化,考察酶用量、酶解温度、p H、酶解时间对榕树果总黄酮提取率的影响。结果表明:最佳提取工艺条件为酶用量25%,酶解时间30 min,酶解温度50℃,酶解p H5.5。在该条件下测定榕树果总黄酮的提取率为10.22 mg/g。     

黑曲霉B0201生料发酵产单宁酶的提取及酶学性质研究

对黑曲霉B0201利用五倍子为诱导物生料发酵产胞外单宁酶的提取及酶学性质进行了研究.结果表明:硫酸铵两步沉淀的饱和度为40%和90%;该酶的最适温度为40℃,最适pH为5.0,低于60%时的热稳定性高,60℃以上迅速失活.Zn~(2+)、Mg~(2+)、吐温80、EDTA等对酶活力无明显影响,Fe~(3+)、Cu~(2+)、Fe~(2+)、Ba~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)、Al~(3+)等对酶有抑制作用.以没食子酸丙酯(PG)为底物,单宁酶的米氏常数Km为0.514mmol/L,Vmax为71.8μmol/L·min.     

碱法预处理玉米芯糖化发酵转化酒精工艺优化

为了探究玉米芯碱法预处理糖化发酵转化酒精产量的影响,利用热水和碱过氧化氢（AHP）对玉米芯进行预处理,研究不同 酶解pH、底物浓度、加酶量对葡萄糖和木糖转化率的影响;对比热水处理前后玉米芯成分变化以及对不同发酵方式对酒精转化率的 影响。结果表明：在初始pH 值为5.2,10%底物浓度,纤维素酶添加量20 mg/g,50 ℃酶解24 h,能获得较高的葡萄糖（＞85%）和木糖转 化率（＞80%）;在此条件下进行分步发酵,80 h时酒精产量可达到16.84 g/L,为酒精转化率理论值的61.9%;半同步糖化发酵和同步糖 化发酵酒精产量分别达到了16.23 g/L和16.19 g/L。 表明不同发酵方式对酒精产量无显著差异。     

黑曲霉T3-5-1高活力单宁酶的制备及其性质研究

用黑曲霉T3-5-1生产单宁酶,将粗酶液分别采用硫酸铵沉淀法和透析法初步纯化,结果表明,使用截留分子量12 kDa的透析袋对粗酶液透析后的比活力(3108.58 U/mg),高于硫酸铵沉淀法处理后的比活力(2939.38 U/mg)。然后对透析样品用Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析法进一步纯化,得到纯度较高的单宁酶,通过与单宁酶A及单宁酶B进行GPC色谱图比较发现,其分子量基本一致,但黑曲霉T3-5-1单宁酶的比活力(5304.78 U/mg),远高于单宁酶A(1788.15 U/mg)和单宁酶B(935.07 U/mg)的比活力。该单宁酶性质研究表明:其最适pH值为5.0,最适反应温度为40℃,且其酸碱稳定性和热稳定性良好。当底物为没食子酸丙酯时,最大酶促反应速率Vmax为81.96μmol/(L·min),米氏常数Km为0.85 mmol/L。最后考察了该单宁酶的催化合成能力,结果表明,在AOT异辛烷反胶束体系中,该单宁酶可催化没食子酸和丙醇反应合成没食子酸丙酯。