内蒙古奶豆腐中潜在益生性乳酸菌的筛选

对从内蒙古奶豆腐中分离的16 株乳酸菌进行16S rDNA分子鉴定,其中9 株鉴定为乳酸片球菌、5 株为屎肠球菌、1 株为植物乳杆菌、1 株为鼠李糖乳杆菌。进一步对分离得到的菌株进行模拟人工胃液和胆盐耐受性、疏水性、体外降胆固醇和抗氧化特性研究。结果表明：植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对模拟人工胃液有较高的耐受性;屎肠球菌M7-1、M8-1和M8-2具有较高的胆盐耐受性;植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对甲苯和十六烷的疏水性显著高于其他菌株。体外功能性实验结果表明,屎肠球菌M1-1、植物乳杆菌M1-2、乳酸片球菌M1-3和M2-1的体外降胆固醇能力较高,胆固醇降解率均超过30%;鼠李糖乳杆菌M6-1对过氧化氢的耐受性、羟自由基（•OH）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除能力最高。综上所述,植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1具有较好的益生特性,可作为今后开发功能性产品的潜在益生菌株。     

一株产γ-氨基丁酸屎肠球菌的筛选和发酵条件优化及其益生特性分析

为拓宽产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)微生物资源,以四川泡菜为分离源从中筛选高产GABA乳酸菌菌株,并对高产乳酸菌菌株进行生理生化、分子生物学鉴定,高产GABA发酵条件优化及其益生特性分析。结果表明:采用高效液相色谱对菌株产GABA能力分析发现菌株AB157的GABA产量最高为1.08 g/L。生理生化和16S rRNA鉴定菌株AB157为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。通过单因素实验和响应面优化,确定屎肠球菌AB157的最佳培养条件为L-谷氨酸钠底物浓度5.2 g/L、发酵温度31 ℃、初始pH7、发酵时间70 h,在此条件下,屎肠球菌AB157的GABA产量达到1.60 g/L。屎肠球菌AB157的益生分析表明,其在pH2.0和3 g/L的胆盐环境中的存活率分别为39%和59%,胆固醇的脱除量为18.09 μg/mL,说明该菌株具有良好的耐酸和耐胆盐特性以及较强的降胆固醇能力,可作为潜在功能性乳酸菌资源进行后续研究开发。     

降胆固醇优良菌株的筛选及其胆盐水解酶特性研究

对已证实具有降胆固醇能力并能产生胆盐水解酶(BSH)的3株乳酸菌进一步筛选,综合模拟人工胃肠液的耐受性、疏水性能力和去结合胆盐能力三个指标,筛选出一株具有优良的降胆固醇综合性能的潜力菌株,并对其产生的BSH的部分特性进行研究。结果表明,屎肠球菌90-1作为降胆固醇潜力菌株其综合性能较好,其所产的BSH最适反应pH为6.0,最适反应温度为37℃,最适底物浓度为7mmol/L,最适三磷酸腺苷二钠(ATP)浓度为2.5mg/mL。     

屎肠球菌R40产胆盐水解酶发酵动力学及底物特异性分析

该研究以产胆盐水解酶的屎肠球菌（Enterococcus faecium）R40为研究对象,模拟人体胆盐条件,对其发酵动力学进行分析。采用Logistic、Luedeking-Piret、Luedeking方程描述屎肠球菌R40发酵过程中菌体生长、产物生成、底物消耗的内在关系,并比较不同胆盐条件对屎肠球菌R40生长和降胆固醇能力的影响,判断其产生的胆盐水解酶是否存在底物特异性。结果表明,拟合模型的相关系数R2均＞0.9,效果良好,模型预测值与试验测量值的误差均＜10%,说明可以通过建立发酵动力学模型对屎肠球菌R40产酶情况进行预测和描述。胆盐的添加有利于屎肠球菌R40发挥降胆固醇作用,使菌株R40提前4 h进入对数生长期,且提高了菌株R40的生物量。不同胆盐对菌株R40生长的影响存在差异性,甘氨酸脱氧胆盐虽能提高生物量,但未缩短适应期。牛磺酸胆盐和甘氨酸胆盐缩短了菌株R40的适应期,但对生物量并无显著影响,说明菌株R40产的胆盐水解酶具有一定的底物特异性。     

具有降胆固醇功能的罗伊氏乳杆菌的筛选及其益生作用

为获得具有较强降胆固醇功能的益生菌株,试验从内蒙古呼伦贝尔满洲里通达牧场制作的奶豆腐中筛选分离菌株,并采用邻苯二甲醛法测定菌株降胆固醇的能力,从中选出降胆固醇能力强的菌株,通过形态学鉴定、生理生化及16S rDNA对菌株进行鉴定,并测定了其耐受酸、胆盐和胃肠液的能力。结果筛选分离出5株具有降胆固醇功能的菌株,其中一株菌对胆固醇降解能力最强,降解率达50.60%,经鉴定此株菌为罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）,将其命名为HCS02-001（CGMCC No. 19746）;经对酸、胆盐及胃肠液的耐受试验,该株菌在pH 3.0和pH 2.0的环境中培养17 h后存活率分别为86.80%和85.52%;在0.30%、0.50%的胆盐浓度环境中培养17 h后存活率分别为97.42%和95.17%;在人工胃液中作用3 h,存活率为96.74%;在人工肠液中作用4 h,存活率高达98.41%。该研究筛选出了一株具有较好降胆固醇功能的罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）,其具有较强的耐受酸、胆盐环境和胃肠液的能力,对关于降胆固醇功能方面的产品研究开发具有重要意义。     

长寿老人源降胆固醇肠球菌的生化特性研究

目的:以新疆和田维吾尔族长寿老人和一般人肠道中筛选出来的27株菌株为试材,采用耐胆汁盐,耐酸,降胆固醇等实验方法对该菌株进行综合性分析,并对其降胆固醇机理进行初步探讨。方法:采用硫酸铁铵法测定该菌株对培养基中胆固醇的脱除率,同时用吸光度法对候选菌株耐酸,耐胆汁盐以及蛋白酶的耐受性进行检测,筛选综合性能高的菌株。结果:27株实验菌都能从培养基中除去胆固醇,脱除率在22.32%～78.57%之间,平均脱除率50.63%,13株脱除率高于平均值(50.63%)。其中10株菌株脱除率高于52.58%,被选为后续研究的菌株;又通过胆汁盐耐受性,低pH耐受性和蛋白酶耐受性实验,从10株菌中筛选出综合性能比较高的R02-23,R03-13,S04等3株菌。结论:从长寿老人肠道中分离筛选的R02-23,R03-13,S04菌株均具有降胆固醇,耐胆汁盐,耐酸,耐蛋白酶能力。且胆固醇的降解机理研究表明它们都有吸收胆固醇和同化胆固醇的能力,但对病原菌的抑菌作用机理有待进一步研究。     

六堡茶乳酸菌多样性及其降胆固醇特性分析

探究六堡茶渥堆发酵过程中乳酸菌多样性并筛选具有降胆固醇活性菌株，旨在评价其作为潜在益生菌的体外降胆固醇能力，预防人体因饮食不均衡导致的高血脂症。采用高通量测序、纯培养法分析不同渥堆发酵时期六堡茶中乳酸菌多样性，并对其体外降胆固醇能力、胃肠耐受性进行研究。结果表明，从25 个样品中共检测到乳酸菌4 个属（乳杆菌属（Lactobacillus）、魏斯氏菌属（Weissella）、乳球菌属（Lactococcus）和肠球菌属（Enterococcus））5 个种，其中乳杆菌属为优势菌。共分离得到76 株乳酸菌，包括55 株戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、3 株铅黄肠球菌（Enterococcus casseliflavus）、5 株类肠膜魏斯氏菌（Weissella paramesenteroides）、8 株希腊魏斯氏菌（Weissella hellenica）、5 株台湾乳球菌（Lactococcus taiwanensis）。通过乳酸菌体外降胆固醇实验，发现胆固醇去除率为0%～30%，其中戊糖乳杆菌L131的去除胆固醇率最高，为（29.56±0.37）%；在pH值分别约为3.0、8.0的人工胃液、人工胰液中，L131有最高存活率，分别为（92.70±0.71）%和（77.54±4.81）%，显著高于其他菌株（P＜0.05）。本研究探明六堡茶渥堆发酵过程中乳酸菌的多样性，且发现具有降胆固醇特性的优良乳酸菌株，为健康黑茶产品和茶源益生菌的开发提供理论基础。     

降胆固醇乳酸菌的益生特性及其作用机理

考察了具有降胆固醇乳酸菌(乳酸乳球菌L14-3、鼠李糖乳杆菌118-1、粪肠球菌M53-2、植物乳杆菌117-1、植物乳杆菌23-1)的益生特性,且初探乳酸菌降胆固醇的作用机理。通过模拟胃液、胰液进行乳酸菌的耐酸耐胆盐测定,并评价了乳酸菌对抗生素的抗性。通过胆固醇、胆盐的共沉淀作用和菌体细胞吸收两种方式去除发酵液中的胆固醇,利用邻苯二甲醛法测定胆固醇的含量,确定胆固醇的去除率。结果表明:通过共沉淀作用和菌体吸收,乳酸乳球菌L14-3和鼠李糖乳杆菌118-1分别去除胆固醇的比例最高。在pH=2.0的人工胃液中,粪肠球菌M53-2和乳酸乳球菌L14-3的活菌数显著高于其他3株菌(P0.05)。粪肠球菌M53-2对pH 3.0的人工胃液有较好的耐受性,存活率显著高于其他4株菌(P0.05)。在pH=8.0人工胰液中,鼠李糖乳杆菌118-1和植物乳杆菌117-1的存活率显著高于其他菌株(P0.05)。植物乳杆菌117-1耐药性最好。因此,研究具有降胆固醇的益生菌具有广阔应用前景。     

产细菌素屎肠球菌SC-Y112的体外益生性及安全性评价

屎肠球菌SC-Y112是一种具有广谱抗菌性质的产细菌素乳酸菌，为更深入了解其菌株性质，本研究通过模拟胃肠液耐受实验、胆盐耐受实验、抗氧化活性测定、溶血活性测定、明胶液化实验、有害代谢物质检测、耐药性评价及肠球菌毒力基因检测对屎肠球菌SC-Y112的体外益生性质与安全性质进行分析评价。结果表明：屎肠球菌SC-Y112对模拟胃肠液耐受性强，在模拟胃液培养3 h存活率达73.66%，在0.3 g/100 mL的胆盐质量浓度下培养3 h后存活率达56.38%，其发酵24 h上清液总抗氧化能力达35.21 U/mL；此外，屎肠球菌SC-Y112不产生物胺、吲哚以及偶氮还原酶等有害代谢物质，无溶血现象，不溶解明胶，不携带常见肠球菌毒力基因，且对万古霉素敏感。研究结果可为菌株的进一步开发与应用提供科学依据。     

人源乳酸菌耐酸耐胆盐能力及降胆固醇作用研究

利用选择性培养基、人工胃液及含胆盐培养基,从如皋长寿地区的人群肠道中分离筛选出耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其降胆固醇能力及方式。结果表明,分离筛选的60株乳酸菌在pH 3.0的人工胃液中存活率均30%;来源于中年组、老年组及长寿组的乳酸菌存活率分别为69%,71%,70%,均显著高于青少年组(P0.05);在0.3%及0.5%胆盐培养基中的存活率均20%,老年组及长寿组的乳酸菌在0.3%胆盐培养基中的存活率分别为53.85%,55.26%,均显著高于青少年组和中年组(P0.05);来源于长寿组的乳酸菌降胆固醇能力显著高于中年组(P0.05),其中,乳杆菌属与魏斯氏菌属的胆固醇降解率显著高于肠球菌属(P0.05),其降胆固醇的主要方式为细胞吸收和共沉淀。来源于长寿地区人群的乳酸菌耐酸耐胆盐能力及降胆固醇能力较强,其中长寿组的乳酸菌要高于其他年龄组。     

降胆固醇乳酸菌的筛选及对大鼠血脂的影响

对分离自发酵品及肠道排泄物的乳酸菌进行降胆固醇体外筛选及体内评价。结果显示：所分离得到的菌株中,对MRS-CHOL培养基胆固醇降解率最高的是R-2菌株(26.97±0.51)%和I-2菌株(23.72±0.41)%;R-2和I-2菌株对酸(pH3.0)有一定耐受性,在0.3g/100mL胆盐质量浓度条件下培养6h后,I-2的活菌数为1.1×104CFU/mL,R-2的活菌数为2.2×106CFU/mL。与对照组相比,采用I-2菌株和R-2菌株饲喂高脂大鼠,均可明显抑制大鼠总胆固醇(TC) (P＜0.01) 和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P＜0.05)升高;经鉴定,I-2菌株和R-2菌株分别为海氏肠球菌(Enterococcus hirae)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)。     

乳酸菌胆酸盐耐受性及降胆固醇能力研究

研究了分离自内蒙古传统稀奶油的四株乳酸菌的胆酸盐耐受性和降胆固醇能力。结果表明,供试菌株对牛磺胆酸钠的耐受性与对照菌株相比差异显著(P<0.05),其中屎肠球菌KLDS6.0330的耐受性最强;粪肠球菌KLDS6.0335呈现胆酸盐促进其生长的现象。菌株间胆固醇去除能力不同,在恒定pH5.5条件下去除能力更强(P<0.05);其中KLDS6.0330在不恒定pH和恒定pH5.5条件下分别达到58.47%和61.92%。四株供试菌株均具有共沉淀作用、吸收作用和降解作用。其中,干酪乳杆菌KLDS1.0344以共沉淀作用为主,KLDS6.0330以吸收作用和降解作用最为显著。     

泡菜中乳酸菌的分离鉴定及抗性筛选

该研究从泡菜中分离乳酸菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其进行人工胃液和胆盐耐受性试验,以期筛选性能优良乳酸菌。结果表明,从泡菜中共分离出71株乳酸菌,经鉴定分别为消化乳杆菌（Lactobacillus alimentarius）32株、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）27株、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentium）1株、棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）2株、有害片球菌（Pediococcus damnosus）9株。其中,植物乳杆菌和发酵乳杆菌可用于食品,且植物乳杆菌S74和S78具有较高的抗人工胃液能力,存活率分别为（94.73±4.56）%、（108.73±7.16）%;菌株S74在0.3%的胆盐中的生长效率[（7.41±3.28）%]低于菌株S78[（10.04±4.90）%]。说明植物乳杆菌S78在pH 3.0的人工胃液和0.3%的胆盐环境均具有良好的耐受能力,在功能性泡菜及益生菌产品方面具有一定的开发潜力。     

蒙古族奶嚼口与下层凝乳中乳酸菌的筛选和比较研究

该研究以蒙古族奶嚼口和下层凝乳为原料,对乳酸菌进行计数和分离,通过产酸凝乳、耐胆盐实验及基因分析筛选并鉴定优良发酵菌株。结果表明,奶嚼口和下层凝乳中乳酸菌活菌数为（12.60±0.78）lg（CFU/mL）和（12.31±0.35）lg（CFU/mL）;分离获得的200株乳酸菌中有19株产酸凝乳能力较好,其中12株来源于奶嚼口,7株来自下层凝乳;在0.3 g/L和0.6 g/L胆盐环境中,奶嚼口中筛选出的乳酸菌具有更强的胆盐耐受性;奶嚼口筛选出11株乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）和1株屎肠球菌（Enterococcus faecium）;下层凝乳筛选出的7株均为乳酸乳球菌。奶嚼口和下层凝乳中乳酸菌活菌数及种属并无明显差异,奶嚼口中分离的具有产酸凝乳能力的乳酸菌多于下层凝乳中所筛选的菌株,并有较强的胆盐耐受性。     

动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002益生特性的研究

该研究测定动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animails subsp. lactis）菌株HCS04-002对酸、胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性,并采用邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）法及甘油三酯试剂盒分别测定菌株的β-半乳糖苷酶活力和甘油三酯降解能力。结果表明,菌株HCS04-002在pH 2.0和pH 3.0环境下处理17 h,存活率达60%以上;在0.3%、0.5%、1.0%、1.5%的胆盐环境处理17 h,存活率达70%以上;经人工胃液和人工肠液消化后,存活率达99%以上;β-半乳糖苷酶活力为0.78 U/mL;甘油三酯降解率为43%。综上,动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002具有较好的耐酸、耐胆盐及耐胃肠液能力,进入人体后能够以较高存活率到达肠道发挥作用,并具有一定的缓解乳糖不耐受和降甘油三酯功能。     

Bile salt hydrolase activity of Enterococci isolated from food: screening and quantitative determination

One hundred seventeen enterococcal strains isolated from food (47 Enterococcus faecium, 48 Enterococcus faecalis, 16 Enterococcus durans, 2 Enterococcus gallinarum, 3 Enterococcus casseliflavus, and 1 Enterococcus malodoratus) were screened for bile salt hydrolase (BSH) activity on de Man, Rogosa, and Sharpe agar medium containing taurocholic acid and calcium chloride. The highest incidence of BSH-active strains was observed for E. faecalis (81%) followed by E. faecium (50%) and E. durans (44%). Isolates were grouped into four putative activity groups (no, low, medium, and high activity) based on the size of precipitation zones observed in the screening experiment. Our results showed that assumptions on BSH activity based on the size of bile precipitation zones in screening experiments did not correlate with actual activity as quantified by high-pressure liquid chromatography, but the screening assay is useful for assessing the presence or absence of BSH activity.     

渗透压胁迫对耐盐乳酸菌发酵特性的影响

采用传统分离培养法从新疆伊犁昭苏县土壤样品中分离筛选耐盐乳酸菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行鉴定,并探究高盐胁迫（7%、8% NaCl）下其生长速率、产酸性能、耐酸、耐胆盐胁迫能力的变化。结果表明,筛选得到4株耐盐乳酸菌,其中菌株a、b、c被鉴定为海氏肠球菌（Enterococcus hirae）,菌株d被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。在高盐胁迫（7%、8% NaCl）下,L. plantarum d的生长特性、产酸及耐酸性能最好,但耐胆盐能力最差,E. hirae a、b、c的耐胆盐胁迫能力更佳;在10%和12%的NaCl含量下胁迫3 h,4株菌的存活率均能维持在36%以上,其中E. hirae b的耐盐能力最佳,存活率最高。