高速逆流色谱法分离纯化杜仲叶中绿原酸

目的:建立高速逆流色谱(HSCCC)法从杜仲叶中分离纯化绿原酸。方法:将杜仲叶用50%乙醇提取,乙酸乙酯萃取,减压浓缩得粗提物,绿原酸含量为16.15%,再进行HSCCC分离纯化。用HPLC考察了绿原酸在不同溶剂体系中的分配情况,选择正丁醇-乙酸乙酯-水(3∶1∶4)为HSCCC为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,主机转速850r/min,流速2m L/min,检测波长327nm。结果:从100mg杜仲粗提物中分离到8.27mg绿原酸,经HPLC分析绿原酸质量分数为86.20%,紫外、红外光谱扫描与对照品特征峰一致。结论 HSCCC法可用于杜仲叶中高纯度的绿原酸快速分离纯化。     

pH区带逆流色谱法分离纯化吴茱萸中的吴茱萸碱和去氢吴茱萸碱

目的分离纯化吴茱萸中的活性成分。方法应用p H区带逆流色谱,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(3:1:3:3,v/v)为两相溶剂体系,上相加入10 mmol/L盐酸作为固定相;下相加入5 mmol/L三乙胺作为流动相,转速850 r/min,流速2.0 m L/min,检测波长254 nm,所得馏分经HPLC检测,并经电喷雾电离(ESI)质谱和核磁共振谱(NMR)鉴定化合物的结构。结果从2 g吴茱萸粗提物中一次性分离得101 mg吴茱萸碱和304 mg去氢吴茱萸碱,其纯度为90.0%和93.1%。结论此法简便、快捷、重现性好、上样量大,适于制备性分离吴茱萸碱和去氢吴茱萸碱。     

高速逆流色谱法分离制备柿子中儿茶素及表儿茶素

采用HP2MGL大孔树脂对柿子中的儿茶素类物质进行初步分离,用高速逆流色谱进一步分离纯化柿子中的(-)-儿茶素、(-)-表儿茶素。结果表明,在以正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比为1:2:3)组成的溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,转速800r/min,流速1mL/min的条件下进行HSCCC制备,经高效液相法测定,从58mg样品中分离出7.25mg(-)-儿茶素和0.43mg(-)-表儿茶素,纯度分别为98.3%和97.9%。     

高速逆流色谱法快速分离花脸香蘑中细胞毒活性化合物

首次应用高速逆流色谱技术(High-speed countercurrent chromatography,HSCCC),选择石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(9:1:9:1,v/v)作为溶剂系统对花脸香蘑固体发酵乙酸乙酯粗提物进行了分离纯化,在2 mL/min流速、900 r/min转速和25℃分离条件下,固定相保留率达到76.7%,从100 mg粗提物中一次性分离得到活性化合物4.3 mg,纯度为95.6%,回收率为97%,并通过MS和NMR等波谱技术鉴定所分离得到的活性化合物为1-羟基-6-甲基-9,10-蒽醌。细胞毒活性结果表明,1-羟基-6-甲基-9,10-蒽醌对人肺癌A549、人骨肉瘤MG63、人结肠癌Sw480和人肝癌Hep G2细胞具有中等细胞毒活性,IC_(50)分别为48.2、114.8、108.1、112.3μg/mL。1-羟基-6-甲基-9,10-蒽醌为首次从花脸香蘑中分离获得。     

RP-HPLC同时检测发酵液中7-脱氢胆固醇与胆固醇的研究

7-脱氢胆固醇是维生素D3的直接前体,试验研究了RP-HPLC同时检测发酵液中7-脱氢胆固醇及其前体胆固醇的方法和条件.应用Waters sunfire C18(φ416×150 mm,5μm)色谱柱,乙腈异丙醇=80:20(v:v)为流动相,1.0mL/min流速,38℃柱温,于波长210 nm紫外检测器检测.在此条件下,7-脱氢胆固醇和胆固醇呈现较好的分离和重现性,其保留时间分别为8.248min和9.598min左右,最低检测浓度分别为8mg/L和10 mg/L,平均回收率分别为99.53%和97.67%.     

加压毛细管电色谱测定糕点中富马酸二甲酯

建立了利用加压毛细管电色谱(pCEC)测定糕点中富马酸二甲酯(DMF)的分析方法。样品采用甲醇超声提取,提取液经反相毛细管电色谱柱分离,流动相乙腈-水(3∶7,v/v),泵流速0.05mL/min,分离电压-5kV,紫外检测器检测。该方法在2.0~100mg/kg质量浓度范围内线性关系良好(r2=0.9998),定量限为20mg/kg,加标回收率为85.5%~93.6%,相对标准偏差小于5%。该方法操作简单、快速,准确可靠,为糕点中富马酸二甲酯的检测提供了新的技术手段。     

高效液相色谱-串联质谱法测定各生长期紫苏中酚类物质的含量

目的：建立一种简单、快速、准确的高效液相色谱-串联质谱法,同时分离与检测紫苏叶、茎和根中酚类化合物含量,探讨紫苏各部位酚类物质的累积规律,为确定紫苏各部位最佳采收时期提供依据。方法：对紫苏进行人工栽培,样品分期采集,采集后的样品经乙醇提取,采用高效液相色谱-串联质谱法进行分析,对影响色谱、质谱的重要参数进行优化,通过对照标准物质的保留时间及质谱分析,确定相应的化合物;通过标准曲线法定量,以其中13 种酚类化合物为主要参考指标,观察它们在各部位的动态含量变化。结果：鉴定出化合物：咖啡酸、咖啡酸-3-O-葡萄糖苷、迷迭香酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸、木犀草素-7-O-二葡萄糖苷酸、芹菜素、芹菜素-7-咖啡酰基葡萄糖苷、芹菜素-7-O-二葡萄糖苷、野黄岑素-7-O-二葡萄糖苷、迷迭香酸甲酯,以上化合物中酚酸及其糖苷化合物含量呈先降低,至结果期急剧上升达到最大,黄酮及其糖苷化合物含量则递增至结果期达到最大。其中鉴定出迷迭香酸和木犀草素-7-O-葡萄糖苷酸分别在结果期达到最大,含量分别为21.41 mg/g和19.89 mg/g,结果期叶部位总酚类含量达到最大,含量为47.50 mg/g。结论：通过对紫苏各个部位不同采收时期黄酮、黄酮糖基化、酚酸的动态变化、总含量变化和部位成分分布的研究,对紫苏酚类资源的利用提供参考依据。     

高速逆流色谱分离茶黄素单体的初步研究

不同溶剂系统和NaHCO3前处理茶色素复合物对高速逆流色谱(HSCCC)分离茶黄素分离效果比较,以及对仪器参数的优化,探索应用HSCCC分离茶黄素单体。试验结果表明:采用溶剂系统乙酸乙酯、正己烷、甲醇和水(3:1:1:6,V/V)具有较佳的分离效果;NaHCO3前处理明显有助于茶黄素单体的分离;当进样量为200mg、流动相速度1.2ml/min、仪器转速880r/min时,能达到最好的分离效果。     

LC-MS/MS方法同时检测超声提取迷迭香(Rosmarnus officinalis L.)叶片中的4种主要成分

目的:建立一种同时测定迷迭香中迷迭香酸、鼠尾草酸、绿原酸和咖啡酸含量的LC-MS/MS分析方法,并优化超声辅助提取这4种物质的方法。方法:液相条件:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈和水(含0.1%甲酸)进行梯度洗脱。质谱条件:ESI离子源,MRM负离子扫描方式,检测在不同提取溶剂、料液比、超声时间、pH值及酸种类的超声波辅助提取条件下4种物质的含量。结果:咖啡酸、绿原酸、迷迭香酸和鼠尾草酸在质量浓度范围分别为0.0005～0.5、0.0005～0.5、0.002～0.2、0.01～1mg/mL的条件下线性关系良好,并符合方法学考察要求;在最优提取条件下迷迭香酸含量为4.07mg/g,鼠尾草酸含量为14.50mg/g,绿原酸含量为8.49mg/g,咖啡酸含量为2.92mg/g。结论:该分析方法可快速灵敏地实现同时检测,并优化了这4种化合物的最佳提取条件。     

高速逆流色谱法分离玫瑰茄中的花色苷

实验以玫瑰茄花萼为原料,建立高速逆流色谱法制备分离玫瑰茄花色苷的方法。玫瑰茄花萼经40%乙醇浸提,通过D101大孔吸附树脂吸附初步纯化,然后水-正丁醇-甲基叔丁基醚-乙腈-三氟乙酸(6:3:1:1:0.001,V/V)为两相溶剂系统进行HSCCC分离纯化,上相为固定相,下相为流动相,流速2.0 mL/min,上样量120 mg,经一次分离得到花色苷1粉末21.8 mg,HPLC面积归一法计算纯度为97.8%,回收率为95.3%;花色苷2纯度为84.5%,经相同溶剂体系二次分离,得到5.3 mg纯度为96.2%的花色苷2,回收率为92.3%。通过质谱、核磁等技术鉴定所分离得到的两个花色苷类化合物分别为飞燕草素-3-O-桑布双糖苷以及矢车菊素-3-O-桑布双糖苷。该方法操作简便,重现性好,适于玫瑰茄中高纯度花色苷大量制备,为花色苷进一步药理研究及质量控制提供物质基础。     

高速逆流色谱法分离制备小叶金钱草中杨梅苷与槲皮苷

应用高速逆流色谱法对小叶金钱草中的杨梅苷和槲皮苷进行分离制备。小叶金钱草乙醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,取乙酸乙酯萃取物经葡聚糖凝胶75%甲醇洗脱纯化,高速逆流色谱正己烷-正丁醇-水(1.75∶1∶1,v∶v)两相溶剂系统分离,以上相为固定相,下相为流动相,在主机转速900 r/min,流速2 mL/min,检测波长254 nm条件下进行分离制备,并将所得产物进行高效液相检测和~1H、~(13)C NMR结构分析。结果表明,该条件下经一步分离可同时得到18.63和17.49 mg的两种产物,其纯度为97.85%和95.42%,经~1H、~(13)C NMR分析确定其为杨梅苷和槲皮苷。     

高效液相色谱法快速测定保健食品中原花青素的含量

建立高效液相色谱法快速测定保健食品中原花青素含量的方法。样品用甲醇超声提取,将试样溶液和正丁醇:盐酸(95:5,v/v)以及硫酸铁铵溶液置于20 mL顶空瓶中,在100℃烘箱中反应40min后,以甲醇-0.3%磷酸(27:73,v/v)为流动相,经C18色谱柱分离,在525 nm波长处,对保健食品中原花青素含量进行测定。结果表明,该方法在(0.01～0.2)mg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.998,样品的加标回收率为93.4%～98.7%,相对标准偏差小于2%。该方法操作简便、准确可靠、精密度较高,适合于保健食品中原花青素的快速测定。     

不同品种紫苏叶迷迭香酸的提取及其生物活性

以45个不同品种紫苏叶为原料,通过超声辅助水提法制备紫苏迷迭香酸,选取迷迭香酸含量高的三个品种利用XDA-8型大孔树脂和中压制备色谱分离纯化,采用体外抗氧化的方法研究紫苏迷迭香酸对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力,并通过测定抑菌圈直径比较抑菌能力。结果表明:45个不同品种紫苏叶粗提物中迷迭香酸含量有显著差异,其中ZY7-1、ZB3、DZ-1粗提物中迷迭香酸含量最高,分别为7.87%、7.34%、7.32%;DPPH自由基的IC_(50)值分别为85.18、87.22和88.45μg/mL,且迷迭香酸含量与提取物的抗氧化能力呈显著正相关(p0.05)。纯化后迷迭香酸含量分别提高到59.28%、54.41%、51.13%,清除DPPH自由基的IC_(50)值分别为15.03、19.08、20.91μg/mL,清除ABTS自由基的IC_(50)值分别为26.57、33.11、36.59μg/mL;并检测其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌生长的抑制能力,呈现不同的抑菌能力,且随着浓度增加,抑菌作用越明显,ZY7-1和ZB3对金黄色葡萄球菌最大抑菌圈直径为12.50 mm、11.80 mm;DZ-1对枯草芽孢杆菌最大抑菌圈直径为12.40 mm。     

生育酚的薄层色谱快速定性分析

建立了一种快速、简单的生育酚单体(α-,γ-和δ-生育酚)的薄层色谱定性分析方法。以硅胶为分离介质,系统考察了由4种溶剂为基础溶剂(环己烷、二氯甲烷、石油醚和氯仿)共38种溶剂体系为展开剂的分离效果。实验结果表明:当采用100%二氯甲烷、二氯甲烷-乙醚(98∶2,v/v)、二氯甲烷-乙酸乙酯(98∶2,v/v)、100%氯仿、氯仿-乙酸乙酯(98∶2,v/v)、氯仿-乙醚(98∶2和95∶5,v/v)为展开剂时,均能分离3种生育酚单体。其中100%二氯甲烷因具有展开时间短和操作简单的优点,成为最适宜建立快速、简单薄层色谱分离的展开剂。在此分离体系条件下,分离展开时间仅需7 min,α-,γ-和δ-生育酚的比移值分别为0.69,0.55和0.43。     

高效液相色谱法快速测定婴幼儿乳粉中叶黄素的含量

建立了高效液相色谱法快速测定婴幼儿乳粉中叶黄素含量的方法。样品用正己烷-四氢呋喃(80:20,v/v)超声提取,乙醇-水(90:10,v/v)进行反萃取除脂,以甲醇-水(95:5,v/v)为流动相,经C_(18)色谱柱分离,在445 nm波长处,对乳粉中叶黄素含量进行测定。结果表明,该方法在(0.1~10)mg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.998,样品的加标回收率为91.8%~102.5%,相对标准偏差小于2%。该方法操作简便、准确可靠、精密度较高,适合于乳粉中叶黄素的快速测定。     

超高效液相色谱——三重四级杆串联质谱仪(UPLC-MS/MS)同时测定白酒中7种有机酸的分析研究

为检测白酒中微量有机酸(没食子酸、阿魏酸、儿茶素、咖啡酸、木犀草素、绿原酸和对香豆酸),建立了一种利用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪(ESI离子源)的检测方法。样品经挥酒精前处理后,以HSS T3色谱柱为分离柱,0.1%(v/v)乙酸-1mmol/L乙酸铵溶液/乙腈为流动相进行梯度洗脱,经超高效液相色谱(UPLC)分离,采用电喷雾串联四级杆质谱进行多反应监测模式(MRM)进行检测。7种有机酸的线性范围在20~200ng/m L内,拟合所得线性相关系数均大于0.992。在3个加标水平下,得到样品平均回收率为97.1%~111.3%,相对标准偏差(RSD)均控制在5%以内。该方法简单快捷、准确可靠,可用于白酒中7种有机酸的同时检测。     

高压液相色谱法测定食品接触材料水性模拟液中2,4-二羟基二苯甲酮

目的 探讨高压液相色谱法测定食品接触材料水性模拟液中2,4-二羟基二苯甲酮的方法。方法 食品接触材料经水、10%乙醇(v/v)、20%乙醇(v/v)、50%乙醇(v/v)以及3%乙酸(w/v)5种不同水性模拟液提取后, 以Agilent HC-CN为分析柱, 甲醇: 水(55: 45, v/v)为流动相, 经UV检测器(?=290 nm) 进行定量分析。结果 5种不同水性模拟液中2,4-二羟基二苯甲酮在0.5~10.0 mg/L浓度范围内线性关系均良好(r=0.9999), 检测限(S/N=3)均为0.02 mg/L。在低、中、高3个不同添加水平下进行加标回收实验, 2,4-二羟基二苯甲酮的平均回收率为84.0%~96.9%, RSD(n=6)为0.85%~4.60%。结论 本方法简单、快速、准确, 完全能够满足食品接触材料日常检验的需要。     

HPLC-UV同时测定高粱红色素中两种成分的含量

建立高效液相色谱法测定高粱红色素中芹菜素和槲皮素-7-葡萄糖苷的分析方法。样品经前处理提取溶解,采用C_(18)反相色谱柱分离,用甲醇-1%乙酸溶液(60∶40,v/v)为流动相进行洗脱,检测波长为377nm,流速为1.0 m L/min,以色谱峰保留时间进行定性,外标法进行定量。结果表明,芹菜素和槲皮素-7-葡萄糖苷分别在10.2~204.0μg/m L和20.4~408.0μg/m L范围内线性关系良好,相关系数R2均大于0.999,样品中的加标回收率分别为94.3%~101.3%和89.4%~101.6%,相对标准偏差分别为1.8%~7.9%和2.1%~4.2%(n=3),检出限分别为2μg/mg和4μg/mg,该方法操作简单,精密度好,能满足高粱红色素中芹菜素和槲皮素-7-葡萄糖苷的检测要求。     

高速逆流色谱法从小叶金钱草中分离四种黄酮苷类化合物

为研究小叶金钱草中大极性黄酮苷类化合物,采用正丁醇萃取、DM 301大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶、反相硅胶柱层析纯化,得到大极性黄酮苷类组分。结合离线二维高速逆流色谱,分别以正己烷/正丁醇/水/冰乙酸(系统Ⅰ:1:2:1:0.1,v/v/v/v和系统Ⅱ:1:1:1:0.1,v/v/v/v)为溶剂系统,在主机转速900 r/min、流速2 mL/min、254 nm检测波长条件下进行分离。结果表明,从小叶金钱草正丁醇组分中分离得到四种黄酮苷类化合物,经¹H、¹³C NMR鉴定为杨梅素3,3’-二-α-L-鼠李糖苷(1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(2)、槲皮素3,3’-二-α-L-鼠李糖苷(3)和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(4),高效液相色谱分析其纯度均大于95%。化合物3为首次从小叶金钱草中分离得到,本研究为小叶金钱草的化学成分研究提供依据。     

高速逆流色谱法分离纯化艾叶中的异绿原酸A

应用制备型高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化艾叶中的异绿原酸A。选用弱极性溶剂体系正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(3∶7∶4∶6,V/V)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,在流速2 m L/min,转速900 r/min,检测波长280 nm的条件下对粗提物进行制备分离,一次进样25 mg,可得到11 mg样品。利用高效液相色谱(HPLC)检测样品的纯度为99.01%。将得到的样品进行高效液相-离子阱-飞行时间质谱(LCMS-IT-TOF)、核磁共振氢谱(1H-NMR)检测确定其化学结构,并确定该样品为异绿原酸A。实验表明制备型高速逆流色谱可以成功地将艾叶中的异绿原酸A进行分离纯化,该方法分离效率高,对异绿原酸A在食品医疗领域的应用具有重要意义。