双水相萃取长鱼蛋白酶的工艺研究

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系以分离纯化长鱼蛋白酶。通过研究不同成相盐及其浓度、不同PEG分子量及其浓度和不同p H对双水相萃取长鱼蛋白酶的影响。结果表明,最优化的双水相体系为25%PEG1000、20%(NH4)2SO4和p H7.0,在此条件下长鱼蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为90.5%和4.40。     

PEG/（NH4）2SO4双水相体系萃取果胶酶

采用PEG/(NH4)2SO4双水相系统对果胶酶进行萃取分离,研究了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响,结果表明:双水相体系质量组成为PEG100027%,(NH4)2SO419%,NaCl0.002%,pH5.0时果胶酶的萃取效率较好,实验中分配系数最高可达为14.0。     

PEG/盐双水相萃取食用色素柠檬黄的研究

采用PEG/盐双水相体系萃取食用色素柠檬黄。考察了成相物质对柠檬黄吸光度的影响,在此基础上考察了PEG相对分子量、PEG浓度、盐的种类及浓度、pH对萃取效果的影响,确定了萃取柠檬黄的最佳条件:18%PEG2000,15%(NH4)2SO4,pH为6。该体系对柠檬黄色萃取效果不受外加无机盐的影响,但表面活性剂的存在对萃取效果有较大影响。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

盐析和双水相萃取法纯化细菌木聚糖酶的比较

通过对比硫酸铵盐析和双水相萃取两种木聚糖酶初级纯化方法的纯化效率,确定更加适于Paenibacillus sp.B1709木聚糖酶初级纯化的方法。结果显示,双水相萃取较盐析具有更好的木聚糖酶纯化回收效果,并对其主要实验参数进行优化,得出双水相萃取最佳条件为:聚乙二醇(PEG)4000 Da,浓度22%,最佳成相盐(NH₄)₂SO₄,最适浓度18%,最适pH6.0,NaCl 2%。在此条件下,可实现分配系数9.90,酶活力回收率为90.84%,纯化倍数6.13。实验结果显示双水相萃取相较于盐析在大规模纯化尤其针对复杂纯化目标时具备一定技术的优势。     

双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG/(NH4)2SO4双水相提取果胶酶进行了研究,考察了PEG分子量、pH值、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等对果胶酶分配系数的影响,结果表明,双水相最佳提取条件为PEG1000 27%,(NH42)SO4 19%,NaCl 0.002%,pH 5.0,温度50℃,在此条件下果胶酶分配系数(K)可达14.0。     

双水相法萃取生姜蛋白酶体系的建立

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高,分别可达393.77%和1.85。     

双水相萃取分离苹果皮中果胶酶的研究

以苹果皮作为提取果胶酶的原材料,采用PEG/Na2HPO4双水相系统对果胶酶进行萃取分离,研究了PEG1000浓度、Na2HPO4浓度、pH、NaCl浓度等因素对果胶酶分配系数的影响。结果表明:双水相体系质量组成为PEG1000 26%、Na2HPO417%、NaCl 0.004%,pH为4.0时,果胶酶的萃取效率较好,实验中分配系数最高可达为13.8954。     

类芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的分离与纯化

类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CH-3是一株高产β-甘露聚糖酶的菌株。本研究采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对CH-3菌株产生的β-甘露聚糖酶进行分离与纯化,以选出纯化率高且残余酶活力高的方法。结果发现,乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法纯化效果较差,聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系的纯化效果较好,PEG浓度为20%(m/m)时,上相测得的总酶活力最高,可以达到221 U/m L。在(NH4)2SO4浓度为18%(m/m)时,上相测得总酶活力最高,可以达到264 U/m L,同时酶萃取率达最大值为86.2%。因此,最优的双水相体系是20%(m/m)PEG和浓度为18%(m/m)(NH4)2SO4。     

PEG/四水合酒石酸钾钠双水相法萃取发酵液中的谷胱甘肽

采用PEG/盐的双水相系统,从离心除菌后的发酵液中萃取谷胱甘肽,考察PEG分子质量、盐、PEG浓度、四水合酒石酸钾钠浓度、pH、环境温度、发酵液加入量对谷胱甘肽萃取率的影响.采用响应面分析法优化试验条件,结果表明,选用PEG/四水合酒石酸钾钠双水相系统的最佳提取条件:PEG(15%)/四水合酒石酸钾钠(13%)双水相溶液10mL、pH 6.7、温度63℃、发酵液加入量1 mL.此时谷胱甘肽分配系数K为3.5,萃取率84.13%,该方法可行.     

双水相体系萃取粗状假丝酵母脂肪酶的研究

通过比较不同无机盐与PEG组成双水相体系对粗状假丝酵母脂肪酶的萃取效果,系统地研究了脂肪酶在PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配行为,考察了PEG:分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度和体系pH对脂肪酶分配系数和萃取率的影响,并通过响应面分析法进一步优化了萃取条件.结果表明最佳萃取条件为:PEG2000浓度18.3%,(NH_4)_2SO_4浓度17.4%,pH8.0,室温条件下其分配系数可达到13.3,纯化倍数达到1.53,萃取率达到92.2%.     

白芨多糖胶的酶法精制工艺条件研究

进行白芨多糖的酶法精制工艺研究,初步考察5 种蛋白酶对白芨多糖的精制效果,并选择木瓜蛋白酶进一步研究,考察加酶量、pH 值、温度和酶解时间对白芨多糖纯度和蛋白残余率的影响,确定了适宜的酶解条件：加酶量8～10mg/g 底物,pH7.0～7.5,温度45～50℃,酶解时间120～150min。精制白芨多糖中葡甘聚糖最高含量可达97.0%,蛋白含量由粗多糖的0.91% 下降到0.32%。实验同时进行了酶法随程处理研究,获得的多糖纯度达92.0%。该法提供了一种更为简单的白芨多糖提取和精制工艺。     

双水相体系萃取藤茶蛇葡萄素工艺的优化

本文研究了聚乙二醇-硫酸铵双水相体系的组成对藤茶蛇葡萄素萃取率的影响。通过单因素实验研究了聚乙二醇相对分子质量、聚乙二醇质量分数、硫酸铵质量分数、pH和NaCl质量分数对萃取率的影响。其次通过Plackett-Burman设计筛选出对萃取率影响显著的三个因素,分别为聚乙二醇质量分数、硫酸铵质量分数、pH。利用响应面法对影响显著的因素进行进一步的优化。优化后的最佳萃取工艺为:聚乙二醇1000质量分数28%、硫酸铵质量分数11.2%、pH为6.0。在该条件下的理论萃取率为98.82%,经过工艺验证实际萃取率为98.53%,与预测值接近,比优化前萃取率（71%）提高了约17.53%,有利于蛇葡萄素的进一步分离纯化或应用。     

生姜蛋白酶的双水相法萃取研究

以生姜为原料,研究双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件。利用单因素试验与正交试验进行优化,得到最佳萃取方案为PEG分子量为4000,PEG浓度为20%,缓冲盐pH为6.5,缓冲盐浓度为10%。此双水相体系的上相酶活回收和纯化倍数都是最高,分别达279.05%和1.86。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

PEG/(NH4)2SO4双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG（聚乙二醇）／（NH4）2SO4。双水相提取果胶酶进行了研究，考察了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响，结果表明：双水相最佳提取条件为PEG 100027％，（NH4）2SO419％，Na-Cl0．002％，pH5．0，温度50℃，在此条件果胶酶分配系数可达到14．0。     

鱿鱼内脏蛋白酶的提取工艺研究

本文以鱿鱼内脏为原料提取蛋白酶.考察了各因素对提取效果的影响,包括用于提取的NaCl溶液浓度、内脏和提取液的固液比、提取温度、提取时间等.此外,根据蛋白质等电点沉淀原理,调粗酶液的pH值去除杂蛋白;并进一步比较了各种絮凝剂去除粗酶提取液中杂蛋白的效果.结果表明:NaCl溶液浓度为0.5％,固液比为1.0∶1.5,常温下提取60 min可达到较好的提取效果,蛋白酶的回收率达到96.06％,比酶活达到1.33 U/mg.调粗酶液的pH值为4.5左右,杂蛋白去除效果较好;Fe2(SO4)3是较好的絮凝剂,向粗酶液中添加1％ Fe2(SO4)3溶液,当添加比为4:1(V/V,粗酶液Fe2(SO4)3溶液)时,进一步去除杂蛋白的效果较好,蛋白酶的回收率达80.33％,比酶活达到9.37 U/mg.