嗜热链球菌噬菌体的分离纯化与鉴定

噬菌体颗粒的分离纯化是研究噬菌体生物学特性、基因分析的基础工作。本研究采用聚乙二醇浓缩噬菌体增殖液、缓冲液透析去除聚乙二醇、氯化铯密度梯度离心纯化,得到了纯度较高的嗜热链球菌噬菌体样品。多重PCR鉴定和SDS-PAGE蛋白组成分析结果表明,该嗜热链球菌噬菌体的包装机制为pac-型。      

嗜热链球菌噬菌体的分离纯化与鉴定

噬菌体颗粒的分离纯化是研究噬菌体生物学特性、基因分析的基础工作。本研究采用聚乙二醇浓缩噬菌体增殖液、缓冲液透析去除聚乙二醇、氯化铯密度梯度离心纯化,得到了纯度较高的嗜热链球菌噬菌体样品。多重PCR鉴定和SDS-PAGE蛋白组成分析结果表明,该嗜热链球菌噬菌体的包装机制为pac-型。     

嗜热链球菌在脱脂乳中发酵特性的研究

本文主要探讨了5株不同嗜热链球菌菌株(ST、ST1、ST5、ST7、ST9)在脱脂乳中发酵8 h和24 h的产酸和产粘情况的对比,并从中选出两株相差较大的菌株ST5和ST9,研究其在发酵过程中的p H、滴定酸度、氨基酸态氮和粘度的变化规律。5株嗜热链球菌中,产酸能力大小顺序为:ST5>ST,ST7>ST1>ST9,产粘能力大小顺序为:ST5>ST7>ST>ST1>ST9。其中,ST5发酵乳的酸度和粘度最大,ST9则相反。对两种菌株进一步研究中发现,在不同的发酵时间,ST5的产酸能力和产粘能力均较强,其对应的发酵乳还原糖和总糖含量较低,且二者发酵乳的粘度变化均呈抛物线型,但是ST9菌株对蛋白质的降解能力大于ST5。研究发现,不同嗜热链球菌菌株在脱脂乳中的发酵特性具有差异性,且随发酵时间的增加而变化。      

酸奶中嗜热链球菌的分离和鉴定

利用Elliker琼脂培养基对嗜热链球菌进行分离。然后,分别挑取疑似菌落进行革兰氏染色,对镜检结果为革兰氏阳性菌,且细菌形状球状的菌种进行生物化学鉴定。采用糖发酵试验进行生化鉴定。对嗜热链球菌进行葡萄糖、麦芽糖和蔗糖的发酵试验。而后,对葡萄糖、蔗糖发酵阳性,麦芽糖发酵阴性的菌种进行45℃培养。结论:在Elliker琼脂培养基上分离出的菌种,镜检细菌形状为球状,葡萄糖、蔗糖发酵呈阳性,麦芽糖发酵阴性且能在45℃条件下生长的菌种即为嗜热链球菌。     

传统发酵乳制品中嗜热链球菌的耐热性研究

以新疆和内蒙地区传统发酵牛乳制品为原料,对嗜热链球菌进行分离.通过与标准菌株比较及形态学和生理生化特性对其进行鉴定.并对分离出的嗜热链球菌的耐热性进行研究.结果表明:从自然发酵酸牛奶中分离得到4株嗜热链球菌,从内蒙古地区奶豆腐中分离出1株嗜热链球菌.其中有三株菌有较强的耐热性,经80℃处理15 min后,活菌存活率均在1.3％以上.     

分离于自然发酵乳中高产双乙酰嗜热链球菌的筛选

通过比较21株嗜热链球菌发酵的酸奶在4℃贮藏条件下的pH、滴定酸度、活菌数及双乙酰含量的变化,最终获得了3株发酵性能好,产双乙酰含量高,具有商业开发潜力的发酵剂菌株:IMAU20765、IMAU10636和IMAU10632。     

实时荧光定量PCR法鉴定发酵乳中嗜热链球菌

该研究通过系统发育树分析确定目标基因,根据目的基因设计特异性引物和探针,建立一种能够快速准确鉴定发酵乳中嗜热链球菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)法,通过特异性、灵敏性和抗干扰实验对所建立方法进行验证,并使用该方法对市售的60份标识含有嗜热链球菌的发酵乳样品进行检测。结果表明,rec A基因具有种间特异性,种间差异率>10%,以其为目的基因建立的RT-fqPCR方法能够特异性的检测嗜热链球菌;绝对灵敏度达1 pg/μL,相对灵敏度达10³CFU/m L;在培养物水平和基因组水平抗干扰能力良好。采用该方法从60份标识含有嗜热链球菌的发酵乳样品中均能检测出嗜热链球菌,说明实时荧光定量PCR方法能够快速、准确的对发酵乳中嗜热链球菌进行检测。     

嗜热链球菌MN-ZLW-002体外益生特性与安全性分析

本研究对分离甘南地区的嗜热链球菌MN-ZLW-002进行了体外益生功能和安全性分析。结果显示,MN-ZLW-002对pH2.0及pH3.0的人工胃液耐受性较好,但对0.3%胆盐条件耐受性较弱;菌株MN-ZLW-002对胆固醇的降解率为42.66%±2.11%,对氯霉素、庆大霉素、链霉素、四环素、万古霉素、卡那霉素、青霉素、红霉素和克林霉素均敏感,且MN-ZLW-002急性经口毒性属无毒。综合上述结果,MN-ZLW-002具有良好的模拟胃液耐受性、较强的胆固醇降解能力,且安全无毒,可作为功能型发酵食品原料进行开发,具有巨大的商业价值。     

乳制品中嗜热链球菌的快速检测

利用血清学方法检测乳制品中的嗜热链球菌。首先，通过动物免疫方法制备了小鼠及家兔抗嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)的免疫血清。然后，用此血清经酶联免疫吸附测定法(ELISA法)对乳制品中嗜热链球菌进行检测。用间接ELISA法及双夹心ELISA法对乳制品中的嗜热链球菌进行检测。结果表明，两种方法均可测出乳制品中嗜热链球菌，其最低检测量可达10^7mE^-1。这一结果为乳制品中嗜热链球菌的血清学快速检测提供了参考。     

西藏灵菇中产胞外多糖嗜热链球菌的分离筛选及其发酵性能测定

从西藏灵菇中分离筛选、鉴定高产胞外多糖的乳酸菌菌株,并对其发酵性能和流变学参数进行测试。筛选的9株菌,菌种鉴定结果均为嗜热链球菌,其中菌株KC1、KC2、KC6、KC17产胞外多糖,菌株KC5、KC7、KC15、KC16、KC22不产胞外多糖。产胞外多糖菌株发酵乳发酵性能、黏度和黏附性指标均明显高于不产胞外多糖的嗜热链球菌,进一步证实了嗜热链球菌产生的胞外多糖可以赋予发酵乳良好的质地。     

泡菜中优良乳酸菌的分离鉴定及其发酵性能的研究

从多种泡菜中分离出92株菌，对其在低温下发酵能力进行测试，筛选出了四株产酸较快、发酵风味较好的菌株Leu．1、Leu．2、Lact．1和Lact．2。经API系统鉴定，Leu．1和Leu．2为肠膜明串珠菌肠膜亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides)，Lact．1为干酪乳杆菌干酪亚种(Lactobacillus casei subsp.casei)，Lact.2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。在10℃发酵白菜中，接种发酵的产酸速度和风味明显优于自然发酵，其中Leu．1和Leu．2发酵前期产酸较快，发酵11d白菜汁pH值达3．67，而Lact．1和Lact．2发酵11d pH值达3．30左右。另外还对四株菌的相关发酵性能进行了测试。     

hs-3乳酸菌发酵研究

hs-3菌摇瓶发酵培养过程中,适宜培养时间为16h。研究结果表明,接种量、摇瓶转速、装液量对培养后活菌数及胞外多糖产量都有影响。进一步正交实验得出,摇瓶转速为显著性影响因素,摇瓶培养的适宜工艺组合为:转速60r/min,接种量3%,装液量250mL(500mL三角瓶),通过10L发酵罐小试,hs-3菌活菌数最大为1.12×109cfu/mL,胞外多糖最大产量819mg/L,和摇瓶培养基本一致。     

Nisin抗性嗜热链球菌的筛选

采用两倍稀释法在脱脂乳培养基和乳清培养基中测定了nisin对嗜热链球菌9的最小抑菌浓度(MIC)。在脱脂乳培养基中逐渐增加nisin的浓度，驯化嗜热链球菌9，直到其抗性达到300IU／ml。经生产性能鉴定和遗传性状实验，获得两株适宜做酸奶发酵剂的nisin抗性嗜热链球菌9.31和9．4。     

不同发酵特性的嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌共发酵的特性

为探究具有不同优良性状的嗜热链球菌株与保加利亚乳杆菌株共发酵的特性,用产酸快的嗜热链球菌StCH-1菌株和产黏好的嗜热链球菌StTA040菌株与保加利亚乳杆菌Lb0925B菌株组合,测定其组合菌株的发酵性能。通过实验发现组合菌株发酵速率均比单菌株发酵速率快,其中含有嗜热链球菌StCH-1的组合菌株发酵速率较快,而含有嗜热链球菌StTA040的组合菌株的胞外多糖产量较高,发酵乳的黏度较高,持水力较强;三组分发酵剂的发酵速率快,发酵乳在贮藏期间黏度高,持水力强,通过感官分析得出三组分发酵剂制得的发酵乳的口感和风味最佳。     

保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的产香特性研究

通过分析凝固型酸奶后发酵过程中香气物质乙醛和丁二酮的含量,研究了保加利亚乳杆菌(LBZ)和嗜热链球菌(STZ)单一及混合菌种(LSZ、GST)后发酵过程中产香特性。结果表明香气物质丁二酮:LBZ菌种基本上保持在0.09mg/L左右;STZ菌种在34h和154h分别有个峰值,但波动较大;LSZ菌种基本较为稳定,且保持在0.23~0.31mg/L之间;GST菌种在0.73~0.92mg/L之间,是LBZ菌种的10倍左右,但总的来说呈下降趋势。香气物质乙醛:LBZ在10h为高11.68mg/L;STZ出现了两个峰值(分别34h和154h);GST在34h有个峰值,其后逐渐下降;LSZ在154h有个峰值,在16.26~19.54mg/L之间波动,总的来说较稳定,因此LSZ为最佳凝固型酸奶菌种。     

东北酸菜中乳酸菌的分离鉴定与耐酸性菌株的筛选

为筛选出高耐酸性乳酸菌,通过形态学观察和随机扩增多态性DNA标记分析技术,对自然发酵酸菜中分离纯化的乳酸菌菌株进行初步鉴别,随后利用16S rDNA序列同源性分析进行种属鉴定,并筛选在pH 3.0条件下存活率较高的菌株。结果表明,72 株分离乳酸菌包括62 株乳杆菌和10 株乳球菌,其中有21 株菌的指纹图谱不相同,经鉴定,分别为乳肠球菌（Enterococcus lactis）、弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）、米曲霉乳杆菌（L. oryzae）、短乳杆菌（L. brevis）、副干酪乳杆菌（L. paracasei）、棒状乳杆菌（L. coryniformis）。pH 3.0条件下存活率在75%以上的菌株有8 株,管家基因rpoA序列同源性分析结果表明高耐酸性的两株菌株为植物乳杆菌（L. plantarum）,为开发功能性乳酸菌食品提供了一定理论支持。     

酸菜汁中降胆固醇乳酸菌的分离鉴定

目的为开发降血脂和预防心血管疾病的保健食品.从自然发酵的酸菜中筛选安全、高效的降胆固醇的乳酸菌,并进行鉴定.方法用乳酸菌分离培养基从自然发酵的酸菜汁中分离、筛选乳酸菌;选取体外降胆固醇能力最强的菌株做耐酸及耐胆汁盐试验.并用其灌胃高脂模型大鼠,研究其对大鼠血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清高密度脂蛋白(HDL-C)以及体重和肝、肾、脾质量的影响;用VITEK 32全自动微生物鉴定系统对其进行鉴定.结果筛选出11株乳酸菌,其中,菌株2体外降胆固醇能力最强,达47.58%.并具有较强的耐酸、耐胆汁盐能力;能降低高血脂肥胖大鼠体重、血清总胆固醇、血清甘油三酯和脂肪在大鼠肝脏内的存积量,提高大鼠血清高密度脂蛋白,对大鼠没有明显毒副作用;菌株2被鉴定为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis).结论从自然发酵的酸菜中分离的乳酸乳球菌可用于开发安全、高效的降血脂和预防心血管疾病的保健食品.     

东北酸白菜人工接种发酵工艺及挥发性成分的研究

用正交试验优化东北酸白菜人工接种发酵工艺的发酵条件,并利用固相微萃取-气质联用色谱法(SPME-GC-MS)对原工艺人工接种发酵酸菜、新工艺人工接种发酵酸菜和自然发酵酸菜的挥发性成分进行分析检测,比较这3种发酵工艺生产的酸菜在挥发性成分上的差异.