建立快速分离鉴定新疆番茄酱腐败菌的方法

采用国家相应的检测标准,根据番茄酱属酸性罐头食品(pH＜4.6)的特点以及按照外方提出的要求,分离、鉴定引起番茄酱腐败变质的目标菌.通过对大量不同类型培养基的筛选,对培养出的微生物进行菌体形态、菌落特征及其生理生化等特性进行鉴定.实验结果表明,平酸菌增菌培养基为枯草芽孢杆菌生长的最适培养基,麦芽浸青汤培养基为栖稻黄色单胞菌的最适培养基;分离得到的2株菌经VITEK-32生化鉴定仪鉴定为枯草芽孢杆菌和栖稻黄色单胞菌.通过本次实验为建立对引起番茄酱腐败变质微生物的快速筛选方法打下一定的基础.     

保健食品中病原微生物的鉴定和溯源分析

目的对抽检的保健食品病原微生物进行鉴定与溯源分析。方法采用显微观察、生化反应、VITEK 2 Compact鉴定系统、16S rRNA基因同源性分型,对从样品和实验环境中分离得到的11株菌株进行鉴定和同源性分析。结果由抽检的保健食品中分离的细菌分别被鉴定为恶臭假单胞菌、杀鲑气单胞菌、成团泛菌、奇异变形菌、溶血不动杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、浅绿气球菌、洋葱伯克霍尔德氏菌、粘质沙雷菌,其中8株为革兰氏阴性菌,1株为革兰氏阳性菌;而由实验环境中分离的2株细菌全部为革兰氏阳性菌,分别是藤黄微球菌和表皮葡萄球菌;由16S rRNA基因同源性分析可知,从样品中分离得到的8株细菌和实验环境中分离得到的2株细菌并不在一个系统发育分支,亲缘关系较远,不存在相关性。结论保健食品中分离的细菌和实验环境中分离的细菌亲缘关系较远,不存在相关性,保健食品的污染源与微生物限量检查的实验环境无关,样品的污染可能是在加工过程中引入的。     

真空包装盐水鹅中腐败细菌的分离鉴定

为了采取有效措施控制盐水鹅中的微生物污染,遂先采用平板划线分离方法分离出盐水鹅中的主要微生物菌群,再根据革兰氏镜检、菌株特性、生理生化实验以及16S r DNA测序的方法对盐水鹅中主要腐败菌进行鉴定。结果表明,引起盐水鹅腐败变质的主要微生物菌群:菌种M为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus,B.c)、菌种P为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens,P.f)、菌种S为成团泛菌(Pantoea agglomerans,P.a)。     

酱香型大曲中一株细菌的分离及其Biolog鉴定

采取传统微生物手段从酱香型大曲中分离纯化得到一株细菌,对其进行菌落特征观察和镜检后,利用Biolog微生物自动鉴定系统进行鉴定,鉴定结果表明:该菌为Staphylococcus arlettae(阿尔莱特葡萄球菌),实现了Biolog鉴定系统在酱香型大曲菌种鉴定中的首次应用.     

自然发酵腐乳中细菌多样性评价

以腐乳为研究对象,利用变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术与Miseq高通量测序技术相结合的手段解析及评价细菌多样性,同时利用传统纯培养的方法对乳酸菌进行分离、纯化与鉴定。结果显示:腐乳中主要微生物为变形菌门(Proteobacteria,80.45%),其中绿脓杆菌属、不动杆菌属、鞘氨醇杆菌属、布丘氏菌属和草螺菌属细菌为优势细菌属。同时通过PCR-DGGE和纯培养发现腐乳中鉴定出7株乳酸菌,其中2株为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),1株为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici),4株为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。由此可知腐乳中蕴含着丰富的微生物资源,同时屎肠球菌(Enterococcus faecium)为优势乳酸菌。     

恩施市3种泡辣椒样品中细菌多样性研究

以恩施市3种泡辣椒为研究对象,使用MiSeq高通量测序技术与聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术相结合的手段对样品中细菌群落的结构进行解析,并采用传统微生物培养方法及分子生物学技术对其中的乳酸菌进行分离和鉴定。结果表明,硬壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)为泡辣椒中的优势细菌门,其平均相对含量分别为85.70%、12.59%;乳酸杆菌属(Lactobacillus)为优势细菌属,其平均相对含量达67.37%。通过传统微生物培养方法共分离鉴定出14株乳酸菌,其中7株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),2株为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),3株为屎肠球菌(Enterococcus faecium),2株为香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminis)。结果表明,泡辣椒中的优势乳酸菌为植物乳杆菌。     

建立快速分离鉴定新疆番茄酱腐败菌的方法

采用国家相应的检测标准,根据番茄酱属酸性罐头食品(pH<4.6)的特点以及按照外方提出的要求,分离、鉴定引起番茄酱腐败变质的目标菌。通过对大量不同类型培养基的筛选,对培养出的微生物进行菌体形态、菌落特征及其生理生化等特性进行鉴定。实验结果表明,平酸菌增菌培养基为枯草芽孢杆菌生长的最适培养基,麦芽浸膏汤培养基为栖稻黄色单胞菌的最适培养基;分离得到的2株菌经VITEK-32生化鉴定仪鉴定为枯草芽孢杆菌和栖稻黄色单胞菌。通过本次实验为建立对引起番茄酱腐败变质微生物的快速筛选方法打下一定的基础。     

浓香型大曲中两株酵母菌的分离及其Biolog微生物鉴定

采取传统微生物手段从浓香型大曲中分离纯化得到两株酵母菌,对其进行菌落特征观察和镜检后,利用Biolog微生物自动鉴定系统进行鉴定.鉴定结果表明,两株菌分别是约氏掷孢酵母A(Sporidiobolus johnsonii A)和葡萄牙棒孢酵母(Clavisopora lusitaniae).     

榴莲冻肉中污染微生物的分离鉴定和低温存活时间研究

建立榴莲冻肉食品的污染微生物分离鉴定方法,研究该类微生物低温保存条件。污染菌经传统的生物梅里埃生化鉴定结合基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并通过对其低温耐受性研究。鉴定结果为50株菌株中10株为粘质沙雷氏菌,8株为阴沟肠杆菌,32株为明串珠菌属,检出率(100%)高于传统生化法(76%)。它们在榴莲冻肉介质内-20℃冷冻存活耐受时间分别为4个月、8个月和超过12个月。2℃~8℃冷藏明串珠菌呈数量级增长。榴莲冻肉污染菌为粘质沙雷氏菌、阴沟肠杆菌和明串珠菌属,保存条件适合冷冻,不宜冷藏。同时验证了MALDI-TOF-MS进行食品微生物鉴定更简便、高效。     

基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对铜绿假单胞菌的鉴定与聚类分析

目的 建立基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption lonization-time of flight mass spectrometery, MALDI-TOF MS)快速鉴定和聚类分析铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa)。方法 将全自动微生物分析仪鉴定为P. aeruginosa的20株分离株和1株标准菌株(CICC 21636)进行MALDI-TOF MS检测。经离线微生物鉴定软件分析, 所有菌株均报告为P. aeruginosa。获取21株 P. aeruginosa的特征蛋白质指纹图谱, 建立命名为Pseudomonas aeruginosa的自建数据库, 并采用 P. aeruginosa标准菌株CICC 21636进行验证。结果 Pseudomonas aeruginosa自建数据库对P. aeruginosa的鉴定结果较设备自带数据库明显提高。而且自建数据库信息基础上, 进一步对21株P. aeruginosa进行聚类分型, 实现了对不同来源P. aeruginosa可能污染源的追溯。结论 作为一种快速、准确、高通量的全新技术手段, MALDI-TOF MS能够实现对P. aeruginosa的特异性快速鉴定, 能满足在公共安全卫生、突发食品安全事件和口岸快速通关方面对P. aeruginosa的快速鉴定需求。