基于酶反应动力学理论优化脂肪酶活力测定体系

为了提高棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)法测定脂肪酶活力的灵敏度和准确度,以来源于Rhizopus oryzae的脂肪酶Lipase F-AP 15为研究对象,首先对其最适反应pH和反应温度进行优化,然后将表面活性剂作为激活因子引入酶活力测定体系,探究影响机制,并依据酶反应动力学理论优化测定条件(底物浓度、酶质量浓度、反应时间),对优化的p-NPP法的重复性和准确性进行了检验,最后以另一个来源的脂肪酶Lipase-PPL为模型,以同样思路与方法改进与优化其酶活力测定体系,以考察优化方法和思路的适用性。结果表明：表面活性剂PEG 8000的引入使得覆盖在脂肪酶活性位点的α-螺旋结构被重排而打开,脂肪酶由封闭构象转为并保持在活化构象,脂肪酶活性增强;优化测定体系的最适条件为pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度1.00 mg/mL、底物浓度6 mmol/L、反应时间5 min,在此条件下测得的酶活力是常用p-NPP法(pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度2.50 mg/mL、底物浓度10 mmol/L、反应时间8 min)测得酶活力的1.4倍;重复性和准确性试验显示,优化p-NPP法重...     

可溶可逆聚合物Eudragit S-100对猪胰脂肪酶的固定化

为了降低不溶性载体固定化对酶催化效率和回收利用的影响,本文作者采用智能性聚合物Eudragit S-100对猪胰脂肪酶进行了固定化修饰。Eudragit S-100主要由甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯共聚而成,具备p H响应的可溶可逆性。结果显示:活化后的Eudragit S-100树脂能够与脂肪酶进行共价结合,在15℃条件下反应6 h后,脂肪酶的平均氨基修饰率约为52.4%;荧光光谱测试表明固定化修饰使得脂肪酶分子肽链发生了一定折叠,脂肪酶的结构较修饰前更为紧凑。固定化后脂肪酶的最适温度保持不变,最适p H向碱性方向移动,总体上表现出更好的稳定性。此外,固定化脂肪酶具备p H响应的可溶可逆性,能够重复使用,经过5次重复使用后,酶活保留仍有45%左右。     

解脂耶氏酵母lip2脂肪酶水解谷维素产生阿魏酸的研究

对解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)脂肪酶水解谷维素产生阿魏酸的酶反应体系进行了研究。实验发现解脂耶氏酵母全脂肪酶粉(105U/mg)在50mmol/L p H7.0 Tris-HCl(含7.5mmol/L黄胆酸钠),100mmol/L p H6.0磷酸钠缓冲液(含1000U脂肪酶)的体系中,水解产生阿魏酸的得率为2.94%。为了进一步提高脂肪酶水解效率,对解脂耶氏酵母脂肪酶中主要组分lip2脂肪酶基因进行了克隆,整合至毕赤酵母GS115基因组后发酵制取lip2脂肪酶粉(70.1U/mg),于上述酶解体系中进行水解谷维素实验。实验结果表明阿魏酸产率为2.87%。获得的lip2脂肪酶催化效率略低于全脂肪酶粉催化效率,但是获得了单一的脂肪酶基因,为进一步采取分子进化技术提高其催化能力奠定了基础。     

微生物脂肪酶的研究与应用

脂肪酶是一类能够催化酯的水解反应以及在非水相体系中催化脂肪酸和醇类发生酯化反应的酶类。随着酶学技术的快速发展,微生物脂肪酶也受到了越来越多的关注。作为生物催化剂,脂肪酶一直以来都是生物技术领域中最重要的一类酶。本文探讨了脂肪酶的来源、理化性质、脂肪酶活力测定,同时对脂肪酶的非水相催化特性以及脂肪酶在食品工业,医药、洗涤剂、皮革、造纸和生物柴油工业领域中的应用进行了讨论。     

脂肪酶催化合成肉豆蔻酸植物甾醇酯

考察了在有机介质中不同脂肪酶催化合成肉豆蔻酸植物甾醇酯,选定脂肪酶AYS为催化剂。单因素实验结果表明在正己烷体系中,最优的反应条件为肉豆蔻酸和植物甾醇摩尔比为3∶1,脂肪酶AYS用量为底物总质量的10%,反应温度50℃,反应72h后酯化率可达69.93%。     

酯型茶黄素酶促降解条件的优化

比较单宁酶、脂肪酶、猪胰脂肪酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白 酶、糖化酶、果胶酶和α-淀粉酶对酯型茶黄素(TFDG)的水解效果,并对最佳水解酶的反应条件进行优化.结果表明,单宁酶水解酯型茶黄素的效果最好,其反应最佳条件为反应体系的温度40℃、pH值5.0、酶浓度2.4 mg/mL、最佳反应时间120 min.水解后茶黄素中简单茶黄素(TF)的含量从52.51 mg/g提高到199.84 mg/g.     

DBSA/环己烷/水微乳体系中脂肪酶催化合成正辛酸甲酯

在十二烷基苯磺酸(DBSA)/环己烷/水微乳体系中进行了不加脂肪酶(PPL)和加脂肪酶催化合成香料正辛酸甲酯的反应,考察了微乳体系中含水量w_0、反应温度、反应时间、醇酸物质的量比、加酶量、缓冲溶液pH值等因素对正辛酸甲酯酯化率的影响,并采用响应面分析法对这些参数进行优化。试验表明,最佳反应条件为:微乳体系中含水量w_0=3,反应温度40℃,反应时间4.0 h,醇酸物质的量比11:1,加酶量6.5 mg,缓冲液pH=7。在该条件下,该酯化反应有最大产率为92.8%,与模型预测值基本相符。     

基于金纳米簇与纳米金的荧光内滤效应检测脂肪酶活性

目的 建立一种基于吐温80自氧化作用催化纳米金形成与荧光内滤机制,相对简单、快速、适用于蛋白浓度较高的游离酶的脂肪酶活性检测方法。方法 使用金纳米簇作为荧光基团,纳米金作为吸收剂,基于荧光内滤机制测定游离脂肪酶活力。设置对照试验对吐温80浓度、氯金酸浓度、温度、pH等反应条件进行优化,探索最适条件下脂肪酶水解反应时间及吐温80还原纳米金的时间并对反应体系进行抗干扰检测,验证该方法的可行性。结果 当脂肪酶酶活力在13.5～15092.0 U/L时,荧光强度的差值随脂肪酶活力的升高而增加,相关系数为0.9977,脂肪酶活力的检出限为2.34 U/L (信噪比为3)。结论 该方法操作相对简单、快速、检测范围较大、灵敏度高,具有实用性,可适用于蛋白浓度较高的游离酶的脂肪酶活力测定。     

壳寡糖修饰多聚半乳糖醛酸酶优化条件研究

以水溶性低分子量壳寡糖作为修饰剂对已纯化的多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰,通过单因素试验和正交试验探讨pH值、温度、修饰时间、壳寡糖的用量等因素对修饰效果的影响和最佳修饰条件的优化筛选.结果表明,通过正交试验筛选出最佳修饰反应条件为:80 mg活化的多聚半乳糖醛酸酶,反应体系中pH为4.0,反应温度为3℃,反应时间为12h,壳寡糖用量为150 mg,修饰效果最佳.利用此条件对多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰具有显著的激活作用,修饰后酶的比活力是340.10 U/mg protein,比修饰前提高了153.42％.     

有机相酶促反应中固定化脂肪酶的非共价修饰

在选用８种具有两亲性质的表面活性剂、２种胆汁盐和１２种金属盐，对庚烷中催化己酸乙酯合成的固定化米氏毛霉脂肪酶进行非共价修饰时发现：在一定的质量浓度范围内，阴、阳离子型和非离子型的表面活性剂对脂肪酶酶促催化活性有不同程度的促进；在底物浓度从０．２５ｍｏｌ／Ｌ提高至０．５ｍｏｌ／Ｌ时，气溶胶硫代琥珀酸２［２－乙己酸］酯钠盐、十二烷基磺酸钠和ＴｒｉｔｏｎＸ－１００对于脂肪酶保持稳定的催化活性有较大的提高作用。并从酶的活性中心和表面活性剂的结构和特性上对原因进行了分析。而胆汁盐和金属盐对脂肪酶的修饰作用不大，在高浓度时反而会抑制酶的活性。     

菜籽饼粕脱毒方法研究进展

对当前菜籽饼粕的脱毒方法进行了归纳总结.菜籽饼粕脱毒方法主要分为物理脱毒法、化学脱毒法、微生物脱毒法和遗传育种法4大类.想要高效利用菜籽饼粕,必须综合考虑其抗营养因子并加以脱除.     

棉花中异性纤维检测图像分割和边缘检测方法研究进展

为进一步提高棉花中异性纤维的检测效率,对异性纤维图像处理方法进行探究。通过分析不同异性纤维图像边缘检测方法的定位精度、背景模糊以及受噪声影响情况发现,不同图像分割方法中异性纤维边缘连续性和分割效果存在差异性。统计了常见异性纤维图像边缘检测法和图像分割方法,分析了各类处理方法的优势和局限性,归纳了适用于各类异性纤维的检测方法,总结了现有研究中存在的问题和不足。研究认为:目前对不同种类异性纤维检测适用的图像处理方法不同,还无法同时检测出全部种类的异性纤维;应根据实践中具体异性纤维的种类、含量、物理特性等选择适合的检测算法并进行算法融合,开发普适性好的算法以降低成本和减少计算量。     

食用油中缩水甘油酯的检测方法研究进展

缩水甘油酯(GEs)痕量存在于精炼食用油中。食用油中缩水甘油酯检测方法主要包括间接检测法和直接检测法。间接检测法即将缩水甘油酯通过酯交换反应,解离出缩水甘油,再通过衍生化后进行GC-MS测定。直接检测法在不破坏缩水甘油酯结构的基础上,先经过或不经过样品净化步骤直接测定。对食用油中缩水甘油酯检测方法的样品处理过程、仪器条件、结果进行综述,并对检测方法的优缺点进行分析。     

香兰素的合成方法及应用

介绍了香兰素的合成方法及其在食品、医药等方面的应用。结合国内外的最新研究进展 ,综述了香兰素的化学合成方法和生物合成方法。通过对合成香兰素各种方法的安全性、技术可行性的比较分析 ,认为发酵法是最具有发展前景的方法。     

藻胆蛋白的提取纯化研究进展

本文从提取原料、细胞破碎方法、粗提和纯化方法等几方面对近期有关藻胆蛋白的提取纯化研究做一介绍。常用的提取原料有螺旋藻、多管藻、条斑紫菜等;细胞破碎方法有反复冻融法、化学试剂处理法等五种;粗提方法主要有盐析法等四种;而常用的纯化方法有羟基磷灰石柱层析法、DEAE-纤维素离子交换柱法和葡聚糖凝胶柱层析法等三种。实际应用中为获得较好的提取纯化效果,经常混合使用多种细胞破碎方法和多种纯化方法。     

真菌毒素的降解技术研究进展

真菌毒素是一类长期困扰粮食安全的重要污染物,尤其是对于谷物类作物具有极大的危害性,因此,对于真菌毒素的检测与降解已经成为粮食安全方面的重点攻克对象。根据现有的研究,主要的降解手段有物理法、化学法以及生物法等,此外还涌现出了多种手段协同作用降解的方式,种类呈现多样化的趋势。因此,为了进一步推进更加便捷、高效的真菌毒素降解方法应用到相关的粮食领域中,减少降解剂对食品本身品质的影响,并帮助开发新的真菌毒素降解方法。作者综述了近年来研究者在防控粮食等产品中各种真菌毒素污染所采用的不同策略,并且分析了相应的产毒机制,讨论了现阶段所采用的各种方法防控真菌毒素的优势和不足,同时展望了未来食品工业对真菌毒素降解方法的发展新趋势,提出了新的研究方向。     

制浆造纸工业废水色度的检测方法及其应用研究

介绍了可以用于制浆造纸工业废水色度检测的多种方法,包括各种铂钴比色法和稀释倍数法。同时,应用现有部分方法对CTMP制浆废水进行了检测,指出了各检测方法之间的差异,为制浆造纸工业废水色度的检测提供了理论依据。     

储粮害虫检测技术研究进展

储粮害虫是危害粮食安全的主要因素之一,害虫检测技术对于粮食综合管理有非常重要的意义。根据国内外学者对储粮害虫检测技术的研究报道,本文归纳和总结了各种检测技术,分别介绍传统类、新型物理及生物类检测法。传统检测方法较为成熟并已被标准化,常用方法有直观检查法、取样筛检法、探管诱捕法;物理检测法较为新颖,以快速无损型检测方法为主,包括近红外及高光谱法、软X射线、电导率法、声测法、微波法、图像识别法、电子鼻等七种;生物检测法多为辅助性方法,常与其他方法联用以达到较优检测效果。本文对各种方法进行深入比较,并探讨国内外最新害虫检测技术,以期为将来研发合适的检测方法和仪器提供参考。     

Use of small diameter column particles to enhance HPLC determination of histamine and other biogenic amines in seafood

Pre-column and post-column HPLC derivatization methods were modified and evaluated for the identification and quantification of nine biogenic amines in seafood. Two HPLC methods with column particles of 1.8 μm or 3 μm in diameter were modified and compared to classical methods using 5 μm column particles. Both pre-column derivatization with dansyl chloride and post-column derivatization with O-phthalaldehyde were studied. The HPLC methods were compared with respect to the time of elution, eluent consumption, backpressure as well as separation, sensitivity, recovery and repeatability for determination of biogenic amines in lean canned tuna and fatty frozen herring. The modified methods using smaller column particles of 1.8 μm or 3 μm allowed biogenic amines to be separated and quantified faster (23-59%) and with less eluent consumption (59-62%) than classical HPLC methods. Backpressures were below 170 bar and this allowed the use of classical HPLC systems rather than dedicated and costly ultra-high-pressure liquid chromatography (UHPLC) equipment. Biogenic amine separation, sensitivity, recovery and repeatability for the modified methods were similar to or performed better than for the classical HPLC methods. Due to reduced analyses time and eluent consumption the modified HPLC methods would improve biogenic amine analysis.     

食用油中氯丙醇酯污染及检测方法研究进展

食用油在精炼加工过程中会产生氯丙醇酯类物质,对食用油的安全造成影响,因此加强检测方法研究,提高检测水平尤为重要。对食用油中氯丙醇酯的组成、来源及危害进行了综述,对目前食用油中氯丙醇酯的检测方法(间接测定法和直接测定法)进行了介绍,其中详细分析了各种检测方法的原理及前处理过程等对检测结果的影响,并提出了今后的研究方向。以期为保证食用油安全性方面的研究提供参考。