Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及机制

目的探讨Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及其机制。方法通过TOPflash试验检测Axin2基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)法检测Axin2基因在正常肝细胞LO2及3种肝癌细胞HepG2、HHCC、HB611中的表达水平;对肝癌细胞HepG2中Axin2的表达进行干扰,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3、EGFR、APC)mRNA转录水平及相关蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、APC)的表达量。结果 Axin2对Wnt/β-catenin信号通路有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P 0. 05);3种肝癌细胞Axin2的表达水平显著低于正常肝细胞LO2(P 0. 05);干扰HepG2细胞中Axin2基因表达后,Axin2基因m RNA转录及蛋白表达水平降低,Wnt信号通路下游基因β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3和EGFR基因mRNA转录水平及β-catenin、Cyclin A、CDK2蛋白表达量均上升,而APC基因mRNA转录水平及蛋白表达量降低。结论 Axin2基因通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达抑制肝癌细胞的生成,本研究为寻找新的肝癌治疗靶点及防治药物提供了实验依据。     

姜黄素对人髓母细胞瘤DOAY细胞增殖的影响及其机制

目的探讨姜黄素对髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)DAOY细胞增殖的影响及其机制。方法用20、40、60、80、100μmol/L的姜黄素(curcumin)处理DAOY细胞24、48和72 h,采用MTT法检测姜黄素对细胞增殖活性的影响;用30μmol/L姜黄素处理DAOY细胞48 h,设未处理细胞为对照组,免疫细胞化学法检测姜黄素对细胞中β-catenin蛋白表达的影响,Western blot法检测β-catenin及cylinD1蛋白的表达水平。结果不同浓度及作用不同时间姜黄素均可明显抑制DAOY细胞的增殖(P0.05),且在姜黄素浓度≤60μmol/L时,呈时间、剂量依赖性。对照组细胞中,β-catenin蛋白在胞浆和胞核中均有表达,且以胞核为主,经30μmol/L姜黄素处理48 h后,胞核蛋白β-catenin及总蛋白cyclinD1的表达均明显低于对照组(P0.05),胞浆蛋白β-catenin的表达无明显降低(P0.05)。结论姜黄素可通过抑制β-catenin的表达和核转位,阻断Wnt/β-catenin信号通路转导,进而抑制其下游靶基因cyclinD1的表达,从而抑制MB的增殖。     

绿茶提取物表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对人卵巢癌HO-8910细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响

目的研究绿茶提取物表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(Epigallocatechin-3 gallste,EGCG)对人卵巢癌HO-8910细胞增殖及细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨EGCG抑制卵巢癌细胞生长的机制。方法用不同浓度的EGCG(10、20和40μg/ml)处理体外培养的人卵巢癌HO-8910细胞不同时间(24、48和72 h),采用MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期的变化;RT-PCR和Western blot分别检测细胞中β-catenin和下游靶基因CyclinD1 mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果 EGCG可明显抑制HO-8910细胞的增殖活力,且抑制作用呈剂量-时间依赖性(P<0.05);40μg/ml EGCG干预后,HO-8910细胞主要阻滞于G0/G1期,且在48 h阻滞作用最为明显;EGCG可显著降低HO-8910细胞中β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量-时间依赖性(P<0.01)。结论 EGCG可抑制HO-8910细胞的增殖,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关,提示EGCG可能在卵巢癌的治疗中具有一定的应用前景。     

苦参碱对Raji细胞增殖及Notch信号通路的影响

目的探讨苦参碱对淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及Notch信号通路的影响。方法试验分为5组:对照组(0 g/L)和4个苦参碱组(0.5、0.75、1.0、1.5 g/L),分别于苦参碱作用于Raji细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,RT-PCR法及Western blot法检测Notch1受体及下游靶基因Hes1 m RNA转录及蛋白的表达。结果不同浓度苦参碱均有抑制Raji细胞增殖的作用,且随药物浓度增加及作用时间延长,抑制作用更明显;苦参碱可明显诱导Raji细胞凋亡;经苦参碱1.0 g/L处理48 h后,G1期细胞减少(P0.05),S期细胞增多(P0.05),Notch1受体及下游靶基因Hes1 m RNA转录水平及蛋白表达水平均明显下调(P0.01)。结论苦参碱可抑制淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性,并诱导细胞凋亡,使细胞周期停留于S期,可能通过直接或间接下调Notch信号通路相关基因表达而实现。     

β-catenin对骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨经典Wnt信号通路关键节点β-catenin对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响。方法用重组腺病毒介导BMP9在C3H10T1/2细胞中过表达,联用β-catenin重组腺病毒上调β-catenin的表达,并通过RNA干扰抑制β-catenin的表达。分析C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的变化;RT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙蛋白(osteocalcin,OC)基因mRNA的转录水平;茜素红S染色检测细胞的钙盐沉积。结果 BMP9单独作用能诱导C3H10T1/2细胞向成骨方向分化,并增强细胞ALP活性;单独的β-catenin无成骨诱导作用,但可剂量依赖性地增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性,并促进BMP9诱导的细胞OPN和OC基因mRNA的转录水平及钙盐沉积;抑制β-catenin表达可显著降低BMP9诱导的C3H1OT1/2细胞的ALP活性(P0.05),下调OPN和OC基因mRNA的转录水平,并抑制钙盐沉积。结论经典Wnt信号通路可能通过β-catenin协同BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,且BMP9诱导的成骨分化可能需要通过Wnt/β-catenin途径来实现。     

人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平。结果人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少;可见数量不等,程度不同的凋亡细胞;G0/G1期细胞比例明显上升(P<0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P<0.05);细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P<0.01)。β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。     

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

目的观察秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤细胞株Raji增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法体外培养Raji细胞,分别加入浓度为0.9、1.5、2.1、2.7 mg/mL的FA-2-b-β,对照组加入等量培养基。培养24、48、72 h后收集各组细胞,采用CCK-8法检测FA-2-b-β对Raji细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 FA-2-b-β能抑制Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性(P 0.01);给药48 h后,各浓度FA-2-b-β组细胞凋亡率较对照组均显著上升,且呈剂量依赖性(P 0.05);各浓度FA-2-b-β组细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著低于对照组,且呈剂量依赖性(P 0.05),Bax蛋白表达水平显著高于对照组,同样呈剂量依赖性(P 0.05),Bax/Bcl-2比值增加。结论 FA-2-b-β呈时间-剂量依赖性诱导伯基特淋巴瘤凋亡,可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路的骨质疏松靶向治疗研究进展

Wnt/β-catenin信号通路在胚胎发育、成人组织稳态以及组织再生等方面发挥着重要作用,同时对骨形成也起着重要的促进作用。随着Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松中作用的阐明,针对Wnt/β-catenin信号通路的靶向治疗已经成功地应用于临床。对基于Wnt/β-catenin信号通路的骨质疏松靶向治疗进行了综述,为抗骨质疏松药物的设计提供了理论依据。     

乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞中β-连环素表达及定位的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B Virus X,protein,HBx)对肝前体(Hepatic progenitor,HP)14-19细胞中β-连环素(β-catenin)表达及定位的影响,为研究HBV相关性肝癌的发生机制提供实验依据。方法分别用重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP感染HP 14-19细胞,RT-RCR法检测HBx基因mRNA的转录;Real-time PCR法检测β-catenin基因mRNA的水平;Western blot法检测HBx、总糖原合成酶激酶3β(total-glycogen synthase kinase 3β,t-GSK3β)、磷酸化GSK3β(Phospho-GSK3β,p-GSK3β)及β-catenin蛋白的表达;免疫细胞化学法检测β-catenin的分布情况。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP均能高效感染HP 14-19细胞,感染效率均可达到90%;在重组腺病毒Ad-GFP-HBx感染的HP 14-19细胞中可检测到HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;与Ad-GFP感染组相比,Ad-GFP-HBx感染组t-GSK3β蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05),但p-GSK3β蛋白相对表达量增加(P<0.05);β-catenin在基因和蛋白水平上表达明显增高(P<0.05),并在胞质中大量积聚,且有向胞核转位的趋势。结论 HBx可通过促进HP 14-19细胞中GSK3β磷酸化,抑制β-catenin的降解,从而导致β-catenin在胞质中大量积聚并向核内转移。HBx对肝前体细胞中经典Wnt信号通路的激活,可能是导致肝前体细胞恶性转化的分子基础。     

肝癌组织中Wnt通路上下游因子的表达及其临床意义

目的探讨Wnt通路Wif-1、C-myc、Cycling-D1mRNA及蛋白在正常肝组织、肝硬化及肝癌组织中的表达及其与肝癌临床病理参数的相关性。方法运用免疫组织化学SP法与原位杂交技术检测100份肝癌组织、50份肝硬化组织、50例正常肝组织中Wif-1、C-myc、Cycling-D1蛋白及mRNA的表达,并测定肝癌组织中的Wif-1、C-myc和Cycling-D1的阳性率、敏感性及特异性。结果肝硬化与肝癌组织中Wif-1 mRNA及蛋白的阳性细胞表达率明显低于正常肝组织(P<0.05),C-myc和Cycling-D1mRNA及蛋白的阳性细胞表达率明显高于正常肝组织(P<0.05)。肝癌组织中Wif-1、C-myc和Cycling-D1mRNA及蛋白的阳性表达均与HBV分级、TNM分期及β-catenin异质表达显著相关(P<0.05)。Wif-1、C-myc和Cycling-D1mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达呈正相关(rWif-1=0.892,rC-myc=0.354,rCycling-D1=0.378)。肝癌组织中mRNA及蛋白的敏感性:Wif-1:9.09%、11.11%,C-myc:91.38%、89.66%,Cycling-D1:91.67%、82.5%,特异性:Wif-1:97.75%、95.6%,C-myc:82.5%、85.71%,Cycling-D1:92.86%、81.82%。结论肝癌的侵润和β-catenin的异质表达均与Wif-1下降,C-myc及Cycling-D1上调相关。     

缺氧诱导因子-1α与Wnt/β-catenin信号通路在缺氧胃癌细胞中的相互作用

目的在缺氧环境下,探讨缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌细胞SGC-7901中的相互作用。方法将质粒β-catenin-micRNA转染SGC-7091细胞,筛选稳定转染细胞株SGC-7901-β-catenin-micRNA。将SGC-7901细胞分为对照组、脂质体组和阴性对照组,对照组:常氧培养48 h;脂质体组:常氧培养24 h后,加入10μl脂质体,培养24 h;阴性对照组:常氧培养24 h后,转染阴性对照质粒,培养24 h;设稳定转染细胞株为干扰组,常氧培养48 h。采用倍增时间试验、平板克隆形成试验及流式细胞术检测各组细胞倍增时间、平板克隆集落数及细胞周期的变化。另取SGC-7901细胞,分为对照组、缺氧组、双重缺氧组;对照组:常氧培养48 h;缺氧组:常氧培养32 h,物理缺氧培养16 h;双重缺氧组:常氧培养24 h,化学缺氧培养8 h后,再同时物理缺氧培养16 h。同时取稳定转染细胞株,分为对照干扰组、缺氧干扰组和双重缺氧干扰组。对照干扰组:常氧培养48 h;缺氧干扰组:常氧培养32 h,物理缺氧培养16 h;双重缺氧干扰组:常氧培养24 h,化学缺氧培养8 h后,再同时物理缺氧培养16 h。采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中HIF-1α、β-catenin的mRNA及蛋白的表达水平。结果与对照组、脂质体组、阴性对照组比较,干扰组倍增时间延长,平板克隆集落数减少,细胞阻滞在G1期比例增加,S期减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。缺氧组与对照组、双重缺氧组与缺氧组、缺氧干扰组与对照干扰组及双重缺氧干扰组与缺氧干扰组相比,HIF-1α、β-catenin的mRNA及蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。缺氧干扰组与缺氧组及双重缺氧干扰组与双重缺氧组比较,β-catenin、HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 HIF-1α激活可调控Wnt/β-catenin通路,但也受控于Wnt/β-catenin通路,二者之间相互影响,相互调节。     

Wnt2和β-catenin在乳腺癌及其配对癌旁乳腺组织中的表达与临床意义

目的探讨Wnt2和β-catenin在乳腺癌及其配对癌旁乳腺组织中的表达与临床意义。方法采用RT-PCR法检测7份乳腺癌及其配对癌旁乳腺组织中Wnt2和β-catenin基因mRNA的转录水平;免疫组织化学方法检测40份浸润性乳腺导管癌及其配对癌旁乳腺组织中Wnt2和β-catenin蛋白的表达水平;分析Wnt2和β-catenin与乳腺癌临床病理特征的相关性及二者联合检测与乳腺癌恶性程度及淋巴结转移的相关性。结果乳腺癌组织中Wnt2和β-catenin基因mRNA的相对转录水平均显著高于配对癌旁乳腺组织(P0.05)。Wnt2在配对癌旁乳腺组织细胞质中呈弱表达,在浸润性乳腺导管癌组织细胞质中呈高表达,乳腺癌Wnt2阳性表达率(77.5%)显著高于配对癌旁乳腺组织(15.0%)(P0.05);配对癌旁乳腺组织中β-catenin均表达于细胞膜中,在浸润性乳腺导管癌组织细胞质及细胞核中均有表达,异常表达率为67.5%(27/40)。Wnt2和β-catenin的表达与浸润性乳腺导管癌患者年龄无关(P0.05),与乳腺癌临床分期、病理组织学分级及淋巴结转移有关(P0.05)。Wnt2和β-catenin均为阳性表达者的肿瘤恶性程度和淋巴结转移的发生率显著高于两者均为阴性或两者之一为阳性表达者(P0.05)。结论 Wnt2和β-catenin表达在乳腺癌发生和侵袭转移中可能起重要作用,本实验为进一步探讨Wnt2和β-catenin在乳腺癌发病机制中的作用奠定了基础。     

宫颈癌HeLa细胞调控信号通路研究新进展

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,发病率高,死亡率高,发病人群年轻化,极大地威胁着女性的生命健康。对宫颈癌HeLa细胞调控信号通路的研究进展进行了综述,包括PI3K/Akt/mTOR信号通路、Wnt/β-连环蛋白信号通路、抑制MMPs相关蛋白表达、诱导HeLa细胞周期停滞、调节凋亡基因的表达等,以期为治疗宫颈癌提供新思路。     

Notch2胞内段基因过表达对K562细胞增殖的影响及其机制

目的探讨外源性Notch2胞内段基因过表达对慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562增殖的影响及其机制。方法将携带Notch2胞内段(ICN2)基因的质粒转染K562细胞,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布;RT-PCR检测Notch2基因全长mRNA的转录,Western blot检测Notch2蛋白的表达;RT-PCR检测Notch通路下游靶基因Hes1、Hey1及细胞增殖、凋亡相关基因numb、Bcl-2、NF-κB和TGF-β1的mRNA转录水平。结果与未转染组相比,转染组K562细胞数量减少,增殖显著受抑(P<0.01);转染48 h后的K562细胞G1期细胞比例显著增多(P<0.01),S期细胞比例显著减少(P<0.01);Notch2基因mRNA及下游靶基因Hes1和Hey1 mRNA转录水平均明显增强(P<0.01),Notch2蛋白表达量增加(P<0.01);numb基因mRNA转录水平无变化;Bcl-2表达下调,NF-κB和TGF-β1表达上调。结论Notch2胞内段基因过表达可抑制K562细胞增殖,其机制可能是通过上调TGF-β1和NF-κB基因表达及下调Bcl-2基因表达,将细胞阻滞于G1期来实现的。     

化妆品植物原料（Ⅳ）——抑制黑色素合成信号通路的植物美白原料的研究与开发

人类的皮肤和头发的颜色取决于黑色素的数量、质量和分布。黑色素在保护皮肤免受各种环境的有害影响方面发挥巨大的作用。而黑色素过量合成会导致严重的皮肤问题。因此,研究黑色素生物合成的信号通路调控以及探究相关的经信号通路抑制黑色素合成的植物提取物具有非常重要的意义。本文综述了调控黑色素生物合成的信号通路和调控因子,包括α-MSH诱导的信号通路、PI3K/Akt信号通路、SCF/c-kit介导的MAPK信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、NO/cGMP信号通路、以及细胞因子、转录因子PAX3和肝X受体。重点介绍通过调控各种信号通路抑制黑色素合成的植物提取物。这些植物提取物虽然通过不同的信号通路进行调控,但大多下调一种整合上游信号通路和调控下游基因的转录因子MITF的表达,进而降低酪氨酸酶(TYR)的表达,抑制细胞内黑色素的生物合成。     

人骨形态发生蛋白9对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制

目的探讨人骨形态发生蛋白9(Human bone morphogenetic protein 9,hBMP9)对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制。方法用重组腺病毒AdBMP9分别感染MG63和U2OS细胞,并设空白对照组(不加任何处理因素)和AdGFP感染对照组,免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)和Western blot法检测感染后两种细胞中hBMP9的表达水平;MTT和台盼蓝拒染活细胞计数法检测细胞的增殖活力;Hoechst/PI荧光双染法检测细胞的凋亡情况;划痕愈合试验检测细胞的迁移能力;ICC法检测Wnt/β-catenin信号途径中β-catenin的表达。结果AdBMP9感染的两种细胞中hBMP9的表达水平均明显高于空白对照组和AdGFP感染组(P<0.05);hBMP9表达的上调可抑制MG63和U2OS细胞的增殖,且呈时间依赖性(P<0.01),并使两种细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),迁移能力明显下降(P<0.01),β-catenin的表达量明显减少(P<0.01)。结论 hBMP9可能通过下调Wnt/β-catenin信号途径活性,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移,并促进其凋亡。     

马尾松松针提取物对人毛乳头细胞的保护作用及机制研究

研究了马尾松松针提取物对人毛乳头细胞（Human dermal papilla cells,HDP）的保护作用及机制。通过制备并分析不同溶剂松针提取物中主要活性成分含量；建立二氢睾酮（Dihydrotestosterone,DHT）诱导HDP细胞损伤模型，采用CCK8法检测细胞相对活力，qPCR检测细胞中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、转化生长因子-β2(Transforming growth factor-β2,TGF-β2)、β-连环蛋白（β-Catenin）和蓬乱蛋白1(Dishevelled 1,DVL1)基因相对表达量，探究松针提取物对Wnt/β-Catenin信号通路的影响；最后采用UPLC-QTOF/MS分析鉴定提取物成分。结果表明，松针50%醇提物可显著提高HDP细胞相对活力，最高达88.3%(P<0.05)；显著提高VEGF mRNA表达量（P<0.05），降低TGF-β2 mRNA相对表达量（P<0.01）；并显著促进Wnt/β-Catenin信号中DVL1 mRNA和β-Cate...     

仿生控释BMP-2和VEGF的PELA微球支架对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的Wnt/β-catenin通路的影响

目的制备外黏附复合重组人骨形态发生蛋白(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rh BMP-2)内包封血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的微囊,并研究其对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化的Wnt/β-catenin通路的影响。方法以聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸三嵌段共聚物(polylactide-poly-ethylene glycol-polylactide,PELA)作为微囊的囊材,制备其外黏附rh BMP-2、内包封VEGF的微囊,制备微囊支架,实验分为对照组、BMP-2/PELA组、PELA/VEGF组和BMP-2/PELA/VEGF组。ELISA法检测微囊支架在1、2、4、8、12、16、22、28、35、42 d于PBS中缓释的rh BMP-2和VEGF的浓度;MTT法检测微囊支架对BMSCs作用3、7、14 d细胞活性的影响;Western blot法检测微囊支架对BMSCs作用3、7、14 d,BMSCs向成骨细胞分化中Wnt/β-catenin通路及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)蛋白表达的影响。结果微囊支架在PBS中第2天,BMP-2释放了约60%,而VEGF则释放了约32%;4组微囊支架对BMSCs作用3、7、14 d,细胞活性差异无统计学意义(P0.05)。在第14天,BMP-2/PELA/VEGF组Wnt、β-catenin及ALP的表达量均显著高于第3和7天(P0.05),而第7天的表达量均显著高于第3天(P0.05)。结论成功制备了BMP-2/PELA/VEGF微囊支架,对BMSCs无细胞毒性作用,可使BMSCs向成骨细胞进一步分化。     

LRRC23激活RIG-Ⅰ信号通路对流感病毒复制的影响

目的 探讨LRRC23(leucine rich repeat containing 23)激活RIG-Ⅰ信号通路对流感病毒复制的影响。方法 通过在A549细胞中过表达和敲低LRRC23,探讨其对流感病毒复制的影响。将pcLRRC23质粒和siLRRC23(small interfering LRRC23)分别转染A549细胞,24 h后感染A/京防/1/86(H1N1),空斑试验和ELISA法分别检测细胞上清中流感病毒滴度和HA蛋白表达水平;qRT-PCR和Western blot法分别检测LRRC23、RIG-Ⅰ、MAVS、流感病毒M1基因及HA蛋白的表达水平;免疫荧光和免疫共沉淀试验（co-immunoprecipitation,Co-IP）检测LRRC23与RIG-Ⅰ的相互作用;双荧光素酶报告基因分析试验检测IFN-β-luc和NF-κB-luc活性。结果 过表达LRRC23可显著降低流感病毒A549细胞上清中流感病毒滴度,抑制HA蛋白的表达。过表达LRRC23通过激活RIG-Ⅰ-MAVS信号通路,增强流感病毒刺激的IFN-β和NF-κB激活,抑制流感病毒M1基因和HA蛋白的表...     

冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化及其功能的预测分析

目的探讨冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化,并对其功能进行预测分析。方法将大鼠置(4±0. 05)℃冷暴露12 h,同时设对照组(24℃常温饲养),qRT-PCR法检测miR-383-5p在血清和肝脏中的表达水平。应用miRanda、TargetScan和miRDB 3种软件同时对miR-383-5p进行靶基因预测,并通过DAVID 6. 8软件对miR-383-5p肝脏靶基因进行GO和KEGG分析。qRT-PCR和Western blot法检测下调BRL-3A细胞中miR-383-5p表达对部分代谢相关靶基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果冷应激后小鼠血清及肝脏中的miR-383-5p相对表达量均显著下降(P 0. 05)。生物信息学方法预测出733个在大鼠肝脏表达的靶基因,GO富集分析结果显示这些靶基因主要与细胞氧化还原过程、增殖和凋亡相关,KEGG分析结果显示富集靶基因最多的信号通路是代谢通路。下调miR-383-5p表达使BRL-3A细胞中Mtor、Pfkfb1和Apbb3基因的mRNA的转录水平显著升高(P 0. 05),Pfkfb1蛋白的表达量显著升高(P 0. 05)。结论冷应激可降低大鼠肝脏中miR-383-5p的表达量,进而通过调节Pfkfb1等靶基因的表达参与细胞的代谢、增殖和凋亡。