甲基化转移酶3对食管癌细胞增殖、迁移及谷氨酰胺代谢的影响

目的 探讨甲基化转移酶3(methyltransferase like-3,METTL3)在食管癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法 采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测食管癌组织及其癌旁组织中METTL3基因的表达;CCK8试验、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验检测METTL3抑制剂STM2457对人食管鳞状癌细胞系Eca109和KYSE150增殖及迁移的影响;流式细胞术、TUNEL染色试验检测其对细胞周期及凋亡的影响;TMT/iTRAQ定量蛋白质组法分析其对下游相关信号通路的影响;谷氨酰胺和谷氨酸检测试验及Western blot法分析其对食管癌细胞谷氨酰胺代谢的影响。结果 METTL3在食管癌组织中的表达显著上调（t=5.024,P <0.000 1）。STM2457抑制Eca109和KYSE150细胞的METTL3表达后,显著抑制了细胞的增殖及迁移能力,细胞周期在G0/G1期发生阻滞,细胞凋亡率增加,同时降低了谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量,并下调了谷氨酰胺代谢相关蛋白丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运载体2(ala...     

人骨形态发生蛋白9对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制

目的探讨人骨形态发生蛋白9(Human bone morphogenetic protein 9,hBMP9)对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制。方法用重组腺病毒AdBMP9分别感染MG63和U2OS细胞,并设空白对照组(不加任何处理因素)和AdGFP感染对照组,免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)和Western blot法检测感染后两种细胞中hBMP9的表达水平;MTT和台盼蓝拒染活细胞计数法检测细胞的增殖活力;Hoechst/PI荧光双染法检测细胞的凋亡情况;划痕愈合试验检测细胞的迁移能力;ICC法检测Wnt/β-catenin信号途径中β-catenin的表达。结果AdBMP9感染的两种细胞中hBMP9的表达水平均明显高于空白对照组和AdGFP感染组(P<0.05);hBMP9表达的上调可抑制MG63和U2OS细胞的增殖,且呈时间依赖性(P<0.01),并使两种细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),迁移能力明显下降(P<0.01),β-catenin的表达量明显减少(P<0.01)。结论 hBMP9可能通过下调Wnt/β-catenin信号途径活性,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移,并促进其凋亡。     

紫杉醇耐药对食管癌细胞增殖、迁移及血管形成的影响

目的 研究紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药对食管癌细胞增殖、迁移及血管形成的影响.方法 采用体外间歇诱导加逐步递增PTX浓度的方法建立PTX耐药细胞系KYSE150/PTX.倒置显微镜下观察PTX耐药细胞形态变化,MTT法检测PTX耐药对食管癌细胞细胞增殖能力的影响,克隆形成试验观察PTX耐药对食管癌细胞克隆...     

lncRNA ZFAS1在食管癌中的作用及其机制

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ZFAS1(lncZFAS1)对食管癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并初步探讨其机制。方法采用qRT-PCR法检测食管癌组织及食管癌细胞中lncZFAS1的表达;shRNA干扰lncZFAS1表达后,采用CCK-8法、流式细胞术、划痕试验、Transwell试验检测其对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响;建立小鼠移植瘤模型,检测敲低lncZFAS1对移植瘤生长的影响。结果 lncZFAS1在食管癌组织及食管癌细胞中的表达均明显高于癌旁组织及正常食管上皮细胞。敲低lncZFAS1可显著抑制食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力;可使食管癌细胞中miR-150-5P表达上调,HMGA2表达下调;可显著抑制裸鼠移植瘤的生长。结论 lncZFAS1可促进食管癌细胞的增殖及迁移,其机制可能与调控miR-150-5P/HMGA2分子轴相关。     

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对小鼠乳腺癌4T1细胞生物学行为的影响

目的探讨联氨基姜黄素(Hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(Liposome nanoparticles,NPs)对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法采用薄膜分散-超声法制备HC-NPs,透射电镜检测纳米颗粒的粒径大小。将4T1细胞分为PBS组、NPs组和HC-NPs组,分别加入10%(v/v)PBS、10%(v/v)NP、10%(v/v)HC-NPs,培养24 h后,MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化;刘氏染色法检测细胞的形态;Transwell试验检测4T1细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测转导和转录激活因子STAT3及细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移相关蛋白的表达水平。结果透射电镜下可见HC-NPs为150 nm左右的脂质体颗粒。HC-NPs对4T1细胞的增殖抑制率明显高于NPs组(P<0.01);与PBS组和NPs组相比,HC-NPs可使细胞形态不规则,诱导细胞周期发生G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),明显抑制细胞侵袭和迁移(P<0.01)及STAT3的激活,下调CyclinD1、c-Myc、Bcl-2、Survivin、MMP-9的表达,同时上调Bax的表达(P<0.05)。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制4T1细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡。     

乌斯他丁和环磷酰胺对乳腺癌细胞增殖和侵袭及MMP-9表达的影响

目的观察乌斯他丁(UTI)和环磷酰胺(CTX)对体外培养的乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)增殖、侵袭及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别分为8组:对照组、UTI高、中、低剂量组、CTX组、CTX+UTI高、中、低剂量组,分别用相应药物处理。采用MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR检测细胞MMP-9基因的表达;Boyden小室侵袭试验检测两种细胞的浸袭能力。结果UTI可明显抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期,并能使2株细胞中MMP-9基因的转录水平下降,细胞的增殖侵袭能力降低。CTX与UTI联合应用,其作用效果优于CTX单独使用。结论UTI能增强CTX诱导的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖抑制作用,二者具有协同效应。其机制可能与UTI降低细胞MMP-9基因的表达等有关。     

神经纤毛蛋白2干扰质粒对胃腺癌SGC7901细胞株生长、侵袭及转移的影响

目的探讨神经纤毛蛋白2(Neuropilin2,NRP2)干扰质粒对胃腺癌SGC7901细胞株生长、侵袭及转移的影响。方法构建NRP2特异的小RNA干扰质粒shRNA-NRP2,采用脂质体介导的方法将质粒转染入人胃腺癌SGC7901细胞株,Western blot法检测NRP2蛋白的表达;Transwell试验检测胃癌细胞体外迁移和侵袭能力的变化;MTT试验检测胃癌细胞的增殖水平。结果 shRNA-NRP2转染SGC7901细胞后,NRP2蛋白表达明显下降,细胞的侵袭、迁移能力明显受抑制,而细胞的增殖水平无显著变化。结论 shRNA-NRP2干扰质粒可下调胃腺癌SGC7901细胞株NRP2蛋白的表达,进而抑制细胞的侵袭、转移能力,提示NRP2可能成为胃癌分子治疗的靶标。     

CDCA7调控CCNB1IP1表达影响食管鳞癌发生发展的作用机制

目的 探讨CDCA7对食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞系KYSE450、KYSE150和KYSE180体外增殖能力的影响,并进一步分析CDCA7促进ESCC细胞增殖的作用机制。方法 利用CDCA7-siRNA敲低KYSE150和KYSE450细胞系中的CDCA7,并利用过表达载体在KYSE180细胞系中进行CDCA7的外源表达;通过qRT-PCR和Western blot法检测KYSE150、KYSE450细胞系CDCA7的敲低效率和KYSE180细胞系CDCA7的外源过表达效率;CCK8、硬克隆试验检测CDCA7对ESCC细胞体外增殖能力的影响;染色质免疫共沉淀测序（chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-sequence）寻找CDCA7调控的下游靶基因,Western blot和qRT-PCR法分别检测敲低和过表达细胞系中靶基因CCNB1IP1的mRNA和蛋白表达水平;采用TCGA数据库转录组数据分析CDCA7与CCNB1IP1的mRNA表达水平的相关性;双荧光素酶报告...     

MMP-2反义寡核苷酸对人胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将不同浓度的硫代磷酸化修饰的MMP-2ASODN转染入人中低分化胃腺癌SGC7901细胞株,RT-PCR法检测细胞MMP-2基因mRNA的转录水平;Transwell试验检测细胞体外迁移和侵袭能力变化;MTT法检测细胞的增殖活性。结果转染MMP-2ASODN后,SGC7901细胞中MMP-2基因mRNA的转录水平显著降低,细胞的体外迁移和侵袭能力受到抑制,且抑制作用随ASODN浓度的增加而增强;而细胞的增殖活性无明显变化。结论MMP-2ASODN可抑制胃腺癌SGC7901细胞MMP-2基因mRNA的转录水平及细胞的体外迁移和侵袭能力,但与胃癌细胞的增殖活性无明显相关性。     

miR-628-3p靶向结合STK17B基因对卵巢癌进展的抑制作用

目的 分析miR-628-3p通过靶向丝氨酸/苏氨酸激酶17B(serine/threonine kinase 17B,STK17B)抑制卵巢癌（ovarian cancer,OV）增殖、迁移和侵袭的能力。方法 生物信息学分析miR-628-3p在OV组织中的表达水平及预后。分别将空载NC质粒（miR-NC）、miR-628-3p、miR-628-3p+STK17B转染至人OV细胞SKOV3和HO8910中,RT-qPCR法检测转染细胞中miR-628-3p表达水平;CCK-8法和克隆试验检测各组细胞增殖能力;划痕愈合试验检测各组细胞迁移能力;Transwell侵袭试验检测各组细胞侵袭能力。裸鼠成瘤试验检测瘤体质量及体积变化。Starbase数据库预测miR-628-3p靶基因,双荧光酶素报告试验进行验证。Western blot法测定各组细胞STK17B蛋白表达水平。结果miR-628-3p在OV组织中低表达,且患者无病生存期低。与miR-NC组相比,miR-628-3p组SKOV3和HO8910细胞中miR-628-3p表达均上调（t分别为7.789和7.862,P均<0.0...