野生甘草内生真菌的分离及其次级代谢产物活性研究

目的:分离野生甘草内生真菌并就其次生代谢产物的抑菌和抗氧化活性进行评价。方法:以新鲜野生甘草为材料,选取甘草不同组织部位,采用组织切块法,以9种培养基分离纯化其内生真菌并进行分子生物学鉴定;以纸片扩散法评价其代谢物对5种测试菌株的抑菌活性;以DPPH自由基和·OH清除能力评价代谢物的抗氧化活性。结果:从植物甘草中分离得到128株真菌,经分子生物学鉴定归属于5个不同的属。其中,YS-6发酵液样品对金黄色葡萄球菌显示一定的抑菌活性;GS-6a发酵液样品对DPPH自由基清除率达97.54 %,其菌丝体样品对·OH清除率达98.83%。结论:甘草内生真菌丰富多样,是筛选抗菌和抗氧化活性物质的良好来源。     

恒山黄芪内生真菌分离鉴定及抗菌活性的研究

目的:分离和鉴定恒山黄芪的内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白假丝酵母和青霉为指示菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从恒山黄芪中分离得到内生真菌菌株49株,经分类鉴定,分属于3目、6科、17属。49株内生真菌中有33株菌至少能抑制1种指示菌,占总菌数的67.35%。结论:恒山黄芪内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

6种药用植物内生菌提取物的抗氧化活性研究

本论文以6种具有抗氧化活性的药用植物乌头、唐松草、独活、车前草、薄荷、泽泻为材料分离内生菌,并对内生菌发酵液和菌丝体提取物中抗氧化活性成分进行了研究。实验以PDA培养基分离内生真菌,以高氏培养基分离内生放线菌,测定各提取样品的抗氧化活性,比较其总酚含量和总黄酮含量,并结合形态学和分子生物学方法对高活性菌株进行的鉴定。结果分别分离得到43株内生真菌,18株内生放线菌,其中内生真菌显示了较好的抗氧化活性,对·OH自由基有较强清除(清除率≥70%)作用的菌株有6株,占所用菌株的9.84%。其中菌株DHL-10发酵液乙酸乙酯提取物显示了较强的抗氧化活性,对过氧化氢的IC50为0.26 mg/m L,总酚和总黄酮含量分别达到了0.81±0.05 mg/g和0.84±0.05 mg/g;分子生物学鉴定结合形态学鉴定该菌株为链格孢菌属(Alternaria sp)真菌。本研究的结果证明,药用植物内生菌是抗氧化活性物质寻找的良好资源。     

湖光岩水体与泥层中真菌的分离鉴定及抗菌活性研究

从湖光岩的湖水、泥土中分离出30株真菌,根据形态特征确定其种属,通过管碟法测定其抗菌活性。结果表明青霉属15株、曲霉属4株、酵母属4株、木霉属2株、毛霉属1株、粘帚霉属1株、根霉属1株。具有抗菌活性的菌株11株:9株具有抗金黄色葡萄球菌活性;1株具抗金黄色葡萄球菌活性及抗枯草芽孢杆菌活性;1株有抗大肠埃希氏菌活性、抗金黄色葡萄球菌活性及抗枯草芽孢杆菌活性。     

新疆圆柏叶内生菌的分离及其抑菌特性研究

对新疆圆柏叶内生菌进行分离,确定分离条件,分离纯化得到7 株菌株,采用打孔法对这7 株菌的发酵液进行抑菌实验。结果表明：其中两株菌的发酵液对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌呈现较强的抑菌活性。通过形态学观察和革兰氏染色,确定1 号菌株为革兰氏阳性球菌,2 号菌株为革兰氏阴性球菌,均无荚膜,无芽孢,不产酸,不产气,淀粉水解为阴性。     

日照海岸线可培养放线菌的抑菌活性及其多样性研究

本研究采用不同的筛选培养基及预处理方法对中国日照海岸线放线菌的分布、抗菌活性和多样性进行研究。结果表明,从中国日照海岸线样品中共分离到208株放线菌,其中91株放线菌具有抑菌作用,35株对产气杆菌有抑制作用,25株对变形杆菌有抑制作用,17株对金黄色葡萄球菌有抑制作用,9株对大肠杆菌有抑制作用,2株对铜绿假单胞菌有抑制作用,3株对黄曲霉有抑制作用。经分子生物学鉴定,25株抗菌活性较好的代表菌株可以分为22个种,3个不同的属：链霉菌属（Streptomyces sp.）、拟诺卡氏菌属（Nocardiopsis sp.）、糖单孢菌属（Saccharomonospora sp.）,其中链霉菌属是优势菌属。     

赤水丹霞山土壤来源抗菌活性链霉菌的分离及放线菌素产生链霉菌Streptomyces sp.CSDX001发酵产物分析

分离、鉴定赤水丹霞地区土壤来源的抗临床耐药菌活性的链霉菌。采集赤水丹霞山区不同海拔的土样并利用多种培养基分离、纯化菌株。热酚法提取菌株基因组DNA,PCR扩增16S r RNA基因并测序后在线比对以确定其系统分类学地位。利用多种测试菌测试抗菌活性,通过HPLC和LC/MS分析菌株发酵抽提物并与数据库比较。分离得到菌株600株,其中59株链霉菌中有41株具有1种以上的抗测试菌活性。Streptomycetes sp.CSDX001具有抗耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、抗耐万古霉素金黄色葡萄球菌、抗多药耐药鲍曼不动杆菌、抗枯草芽孢杆菌、抗藤黄微球菌、抗白色念球菌的活性,具有抗多种微生物的活性和产生多种新结构次级代谢产物潜力,可能是抗微生物新天然活性产物的重要来源。     

湛江硇洲岛全缘马尾藻共附生抗菌活性菌的筛选与多样性分析

本文采用倾注平板法从湛江硇洲岛全缘马尾藻(Sargassum integerrimum)分离共附生细菌,分别以大肠埃希菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和白色念珠菌(Candida albicans)作为指示菌,利用牛津杯法测定抗菌活性,并对分离到的抗菌活性菌进行形态观察、生理生化试验及分子生物学水平的鉴定与多样性分析。共分离到36株细菌,经形态观察与生化试验去重,筛选到具有抗菌活性的细菌11株。经过16S rRNA分析发现,11株抗菌活性细菌分属于细菌域的厚壁菌门(Firmicutes)和放线杆菌门(Actinobacteria)的5个科(Bacillaceae,Staphylococcaceae,Micrococcaceae,Microbacteriaceae,Dermabacteraceae)、5个属(Bacillus,Staphylococcu,Kocuria,Microbacterium,Brachybacterium),其中7株菌为Firmicutes门,占活性菌株的63.6%,并成为优势类群,同时发现4株潜在新种(菌株X21、X24、X31、X34)。研究表明,该岛全缘马尾藻中存在较为丰富的抗菌物质产生菌,并蕴藏着较多的微生物新类群。     

一株丹参种子内生真菌ZJZD-3的分离鉴定及其生物活性

目的:从丹参种子中分离纯化内生菌,筛选具有抑菌、抗氧化、抗凝血活性的菌株进行分子鉴定。方法:采用平板分离法从丹参种子中分离内生菌;采用平板对峙法和滤纸片法筛选具有抑菌效果的内生菌,采用DPPH法测定内生菌抗氧化活性,兔耳缘静脉取血测定内生菌抗凝血活性。结果:从白花丹参种子中分离出11株内生真菌和2株内生细菌,从紫花丹参种子中分离出9株内生真菌和9株内生细菌。其中,一株内生真菌ZJZD-3发酵液对丹参病原菌4和6均有抑制作用,抑制率分别为70.1%和59.6%;内生真菌ZJZD-3具有很好的抗氧化能力,其0.5 mg/mL乙醇粗提液对DPPH清除率为91.44%;内生真菌ZJZD-3对于内源性、外源性凝血途径都具有一定的延长作用,并且内源性凝血途径最为明显,对家兔凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活性部分凝血酶时间(APTT)的延长率分别为48.48%、12.38%和34.44%。该菌株经鉴定为篮状菌属(Talaromyces sp.)。结论:内生真菌ZJZD-3具有很好的抗丹参病原菌、抗氧化和抗凝血能力,为丹参药效成分的工业化开发以及丹参的绿色规模化栽培提供新的途径和方法。     

拮抗扩展青霉菌株的筛选及其抗菌活性物质分离

从甘肃中部干旱生境土壤中分离筛选到一株对扩展青霉(Penicillium expansum)具有显著抑制作用的拮抗菌A1,通过Biolog法对其种属鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);通过对该菌株抑菌活性物质进行分离纯化,经拮抗实验证明,其中一种单峰化合物具有抑菌活性,其对扩展青霉(P.expansum)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌最低浓度为1μg/mL。该活性物质对引起农产品及食品腐败变质的多种微生物有明显抑菌效果,抗菌谱较广,尤其对扩展青霉(P.expansum)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表现出较高的抑菌活性,具有良好应用开发前景。     

中国蛤蜊多糖的抗氧化性及抑菌性

以中国蛤蜊全脏器为材料,碱提醇沉法进行多糖的提取,采用Sevag 法去除多糖中的蛋白,分别测定提取物中多糖的含量、清除羟自由基( ·OH)能力、清除超氧阴离子自由基(O2－ ·)能力及抑菌活性。结果表明：碱提法所提多糖含量较高,提取率为15.45%(以中国蛤蜊干粉计)。中国蛤蜊多糖具有较强的抗氧化能力,多糖质量浓度为0.8mg/mL时对O2－ ·的清除率达86.49%;对 ·OH清除率达49.31%。中国蛤蜊多糖对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌均有抑制作用,其最小抑菌质量浓度分别为12.5、25、25mg/mL,对金黄色葡萄球菌抑制作用最明显、枯草芽孢杆菌次之、大肠杆菌最不明显,。由此可知,中国蛤蜊多糖对 ·OH 和 O2－ ·具有一定的体外抗氧化性能,在一定实验质量浓度范围内,随着多糖质量浓度的增大,其抗氧化活性逐渐增强。多糖对革兰氏阳性菌的抑制效应强于革兰氏阴性菌。     

南瓜中内生菌筛选及其次级代谢产物的分析

目的：为充分开发利用南瓜资源,寻找生产多酚类化合物等活性物质的内生菌。方法：采用组织块分离法、划线分离法及梯度稀释法获得南瓜果肉中的内生菌,并利用平板对峙法对其抑菌活性进行测定,再以南瓜提取液为对照,对各拮抗菌株的发酵液进行薄层层析分析,然后利用高效液相色谱法作进一步检测,从而确定活性物质的种类。结果：从南瓜果肉中共分离到54 株内生菌。通过抑菌实验发现其中12 株对一种或多种指示菌具有抑菌活性,占分离菌株数的22%,其中3 株（25、26、29号）具有较广谱抑菌活性,抑菌率较高,可达（36.73±0.52）%。薄层层析检测表明：25号菌株的发酵产物在比移值（Rf）为0.57时与标准南瓜提取液斑点Rf相同。结论：25号菌株能发酵产生多酚类或类似化合物,这为利用内生菌发酵生产多酚类成分提供了新的思路和途径。     

罗布麻内生细菌的分离鉴定及抑菌活性

目的:研究罗布麻内生细菌及其抑菌活性,旨在深入开发新资源。方法:以红花罗布麻为研究对象,采用平板分离法从中分离内生细菌,利用牛津杯法对其发酵物进行抑菌活性研究,对有抑菌活性的菌株进行形态特征观察和16S rRNA序列同源性分析。结果:筛选出的D1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌四株供试指示菌均有明显的抑制作用,D3菌株对藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌有一定的抑菌作用。结合菌株的形态学特征和16S rRNA序列同源性分析,将D1鉴定为假单胞菌,D3鉴定为菠萝泛菌。结论:罗布麻中蕴含着具有抑菌活性的内生细菌资源,可进一步的开发利用。     

兼具抗氧化及抗菌活性的玉米醇溶蛋白肽制备及其乳化特性

采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶分别水解玉米醇溶蛋白,对其水解产物进行抗氧化、抗菌及乳化活性分析。针对具有较好双抗活性及乳化性能的木瓜蛋白酶水解组分,进一步采用?KTA蛋白纯化系统及反相高效液相色谱分离得到纯化组分。通过基质辅助激光解析电离四极杆飞行时间质谱对纯化所得肽进行氨基酸序列分析,得出其氨基酸序列为LLAH。玉米醇溶蛋白水解所得LLAH和化学合成LLAH表现出相当的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid),ABTS）阳离子自由基清除活性以及铁离子还原能力和乳化能力。两种LLAH均能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和单核细胞增生李斯特菌的生长。LLAH稳定的乳液平均粒径为（263.4±3.5）nm,低于吐温-80稳定的乳液平均粒径（（286.8±3.5）nm）,前者的贮藏稳定性和氧化稳定性均高于吐温-80稳定的乳液,且对上述4 种受试菌株均表现出抑菌效果。LLAH的抗菌和抗氧化活性对其稳定乳液的稳定性具有积极贡献。研究结果对于开发新型玉米醇溶蛋白肽基功能性食品配料具有一定的参考价值。     

无花果内生菌WHG1及其胞外蛋白的分离鉴定和抗菌作用的研究

对无花果内生菌WHG1及其胞外蛋白进行分离鉴定,并探讨其抗菌作用。通过形态和生理生化特性及16sRNA序列分析方法鉴定菌株。采用滤纸片和牛津杯法抑菌实验研究其抗菌作用。用80%硫酸铵盐析,Sephadex G-100凝胶层析,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱分离纯化内生菌的胞外抗菌蛋白,通过SDS-PAGE电泳测定其分子质量。WHG1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),它对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、酵母菌、黑曲霉等5种食源性致病菌和食品中常见污染菌均有较强的拮抗作用。WHG1胞外蛋白对大肠埃希氏菌和黑曲霉有较强的抗菌作用,该抗菌蛋白分子质量25～53ku。无花果内生菌WHG1具有产胞外抗菌蛋白的特性。     

扬州稀甜酱中乳酸菌的分离鉴定及抑菌活性初探

以扬州稀甜酱为研究对象,采用经典乳酸菌筛选法从样品中分离、纯化乳酸菌,采用形态学观察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对乳酸菌进行鉴定,并采用牛津杯法对发酵滤液的抑菌活性进行研究。结果表明,从扬州稀甜酱中共分离、纯化出33株乳酸菌,其中15株菌株被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,12株菌株被鉴定为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）,4株菌株被鉴定为类肠膜魏斯氏菌（Weissella paramesenteroides）,2株菌株被鉴定为酸鱼乳杆菌（Lactobacillus acidipiscis）,屎肠球菌和乳酸片球菌为扬州稀甜酱中的优势乳酸菌。乳酸片球菌TJ17和TJ31发酵滤液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）均有明显的抑制作用,且乳酸片球菌TJ31抑菌效果较好。     

广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定

分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定.通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株.采用紫外线.硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株.分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱(Sephadex G-10)和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时...     

油橄榄叶中橄榄苦苷的体外抗氧化和抑菌活性

采用总抗氧化能力法和总还原能力法测定橄榄苦苷体外抗氧化活性,以滤纸片法考察橄榄苦苷对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性,稀释法分析橄榄苦苷对3 种细菌生长曲线的影响和最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）。结果显示：橄榄苦苷在0.02～0.08 mg/mL范围内与2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚相比始终表现出强的总抗氧化能力和总还原能力;橄榄苦苷对3 种细菌生长曲线的影响表现为延缓细菌的对数生长期;在研究质量浓度范围内橄榄苦苷对大肠杆菌抑制作用最强,10 mg/mL时其抑菌圈直径d＝（20.77±0.47）mm,为极度敏感,MIC为0.025 mg/mL;金黄色葡萄球菌为高敏感（d＝（19.23±0.44）mm＞15 mm）,MIC为0.05 mg/mL;而枯草芽孢杆菌处于中度敏感状态（d＝（11.48±0.60） mm＜15 mm）,MIC为0.4 mg/mL。结果表明,橄榄苦苷具有极强的抗氧化和抑菌活性。