拮抗TMV细菌发酵产物对TMV粒体形态的影响

通过对拮抗细菌发酵产物抑制TMV活性的测定及体外混合对TMV粒体形态的影响研究,表明:1)拮抗细菌by33、by88发酵产生的活性蛋白对TMV的体外钝化作用分别为85.38%和87.47%;2)电镜下观察到活性蛋白能打破TMV粒体的规则排列,与TMV粒子不可逆的结合,从而降低侵染力。      

拮抗细菌活性蛋白诱导烟草对CMV的抗性研究

从烟田耕作层土样中分离到对CMV有拮抗作用的细菌菌株B6,通过离子交换层析和凝胶过滤层析初步确定其活性物质是分子质量大小为40．6kD的蛋白质。活性蛋白诱导后,对烟草叶片的病毒含量、过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）和多酚氧化酶（PPO）的活性变化进行研究。结果表明,拮抗细菌活性蛋白诱导后烟草叶片内CMV含量明显降低,随着诱导天数的增加病毒的含量呈由多到少再增多的变化趋势,POD,PAL和PPO等细胞防御酶的活性增强。     

拮抗细菌对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用研究

从发生烟草花叶病毒(TMV)的烟田耕作层土样中分离到对TMV有拮抗作用的菌株By33和By88。生物测定试验表明,By33和By88的无菌发酵液对TMV的体外抑制作用分别为81.81%和83.29%,涂抹菌液24 h后接种TMV,仍有73.01%和66.98%的预防作用。硫酸铵沉淀无菌发酵液、PBS透析获得拮抗蛋白;拮抗蛋白对TMV的体外抑制作用分别为85.38%和87.47%,并且在274.00 nm处有明显的蛋白吸收峰,为典型的蛋白质吸收光谱。此外,通过叶圆片法和透析法生物测定表明,抗病毒蛋白与TMV粒子结合作用为不可逆,有抑制TMV在烟株体内复制的作用。     

沉默2b基因获得抗黄瓜花叶病毒(CMV)的转基因烟草

  目的  本研究利用dsRNA技术沉默2b基因,获得烟草品种云烟85的T₁代转基因抗CMV株系。  方法  构建含有CMV 2b部分序列反向重复的植物表达载体pBIN-2b（r）-In-2b（i）,以农杆菌介导的叶盘法转化普通烟草（Nicotiana tabacum）品种云烟85。  结果  抗性筛选获得112株T₀代转基因阳性植株,接种CMV进行抗病性鉴定,发现有46株T₀代转基因植株表现为抗病,其他66株表现为感病。Tas-ELISA检测表明,T₀代抗病烟株的病毒积累量显著低于感病烟株。选取10个T₀代抗病株系繁殖,接种CMV鉴定T₁代抗病性,发现部分T₁代烟株发生一定比例的抗感分离,T₁代抗性株率为46.7%~100%。Real-time PCR检测T₁代烟株,发现T₁代抗病烟株CMV 2b基因RNA积累水平显著低于感病烟株。  结论  基于以上策略及实验,获得抗CMV转基因烟草株系。      

细菌ZJ的鉴定及其对九孔鲍苗致病菌的拮抗作用研究

从深圳官湖养殖场海水样品分离纯化得到1株拮抗细菌ZJ,根据其形态特征和生理生化特性分析,鉴定其为海洋单胞菌(Oceanimonas sp.).采用室内抑菌法测定了该菌株对9株九孔鲍苗病原菌的抑制效果,结果表明,菌株ZJ对溶藻弧菌、霍乱弧菌、海藻施万氏菌、绿脓假单胞菌、肠道球菌、催产克雷白杆菌的抑菌活性强,其无菌发酵液也对这6株菌有抑制作用.对该菌株的胞外酶活性进行测定,该菌株可以产明胶酶、蛋白酶、磷脂酶和淀粉酶,表明该菌株对水产品肠道系统和海洋生活环境可能有良好的改善作用,这为该菌作为益生菌提供了可能性.     

细菌ZJ的鉴定及其对九孔鲍苗致病菌的拮抗作用研究

从深圳官湖养殖场海水样品分离纯化得到1株拮抗细菌ZJ,根据其形态特征和生理生化特性分析,鉴定其为海洋单胞菌(Oceanimonas sp.)。采用室内抑菌法测定了该菌株对9株九孔鲍苗病原菌的抑制效果,结果表明,菌株ZJ对溶藻弧菌、霍乱弧菌、海藻施万氏菌、绿脓假单胞菌、肠道球菌、催产克雷白杆菌的抑菌活性强,其无菌发酵液也对这6株菌有抑制作用。对该菌株的胞外酶活性进行测定,该菌株可以产明胶酶、蛋白酶、磷脂酶和淀粉酶,表明该菌株对水产品肠道系统和海洋生活环境可能有良好的改善作用,这为该菌作为益生菌提供了可能性。      

乳清蛋白粗提粉对斑马鱼骨质疏松症的药效研究

以泼尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼为模型,以进口乳清蛋白(F-WPC)为参照物,考察自制乳清蛋白粗提粉(Z-WPC)对骨质疏松的防治作用.结果表明,与模型组相比,1μg·mL-1、0.5μg·mL-1的F-WPC溶液和100μg·mL-1、50μg·mL-1的Z-WPC溶液均能显著增加骨质疏松斑马鱼的头部骨骼矿化面积和骨密...     

预分离米糠蛋白类阿片拮抗肽的离子交换工艺

研究离子交换层析法对米糠蛋白酶解物超滤透过液中类阿片拮抗肽的初步分离提取。采用强酸性阳离子交换树脂,上样流速:SV0.8,上样pH值:5.0;洗脱液氨水浓度:1mol/mL,洗脱速度:SV1.2。离体豚鼠回肠(GPI)检定法鉴定表明,在此条件下制备的米糠蛋白类阿片拮抗肽活性得到提高。     

热处理对大豆油体表面的油体蛋白和外源性蛋白影响

研究了热处理不同p H生豆浆和吸胀大豆种子对大豆油体上油体蛋白和外源性蛋白的影响,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征油体蛋白和外源性蛋白的变化。研究表明:热处理生豆浆和吸胀的大豆种子时,随着温度和时间的增加,都可以抑制内切蛋白酶P34的活性,有利于油体蛋白保留在油体上;而且热处理对吸胀的大豆种子效果更显著。热处理不同p H的生豆浆时,随着热处理强度和生豆浆p H的增加,外源性蛋白(主要是大豆球蛋白、伴大豆球蛋白和过敏性蛋白Bd 30K)会从油体上逐渐解离下来。在80℃、p H8.5下处理生豆浆5~30min时,油体纯度高达97%,且含有的过敏性蛋白Bd 30K低于1%。     

利用米糠蛋白制备类阿片拮抗肽和降血压肽的研究

采用离体豚鼠回肠(GPI)检定法测定不同米糠蛋白胰蛋白酶水解物的类阿片拮抗活性,结果发现跟新鲜米糠一样,低温脱脂米糠蛋白的酶解物具有较高的类阿片拮抗活性,高温脱脂米糠蛋白的酶解物无类阿片拮抗活性。采用低温脱脂米糠蛋白为原料,研究其制备类阿片拮抗肽后的残留蛋白酶解物的ACE抑制活性,结果发现在6种酶解物中,水解度(DH)为15.4%的碱性蛋白酶水解物的ACE抑制活性最高。     

泡菜中乳酸菌的分离鉴定及模拟环境胁迫抗性的研究

从市售泡菜中分离到7株乳酸菌,对其进行形态学、生理生化及16SrRNA基因鉴定。基于生理生化特性和16S rRNA基因序列的同源性比较,以及系统发育分析,鉴定7株菌均为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。并进一步对所分离菌株进行低pH和高胆盐浓度条件下存活能力测试,实验结果表明,S-2、D-1、D-3在低pH和高胆盐浓度条件下存活率为100%～135%,在pH1·5的培养基中4h后活菌数分别为8·4×108、8·3×108、8·1×108cfu/mL,在0·3%胆盐条件下4h后活菌数分别为8·5×108、8·9×108、8·4×108cfu/mL。      

烟草叶围细菌的分离及其对Alternaria alternata的拮抗作用

分离到烟草叶围细菌136株,通过对峙培养实验筛选出对烟草赤星病菌A.alternata有较强拮抗活性的9个菌株.离体叶片生防测定实验表明,9株细菌均能不同程度地减轻烟草赤星病的发生.其中菌株Tpb88具有较强和稳定的拮抗作用,无菌滤液实验表明,叶围细菌Tpb88在一定浓度范围内能有效抑制A.alternata菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长,且浓度越高,抑制能力越强,结果表明Tpb88对烟草赤星病菌的拮抗机制可能为抗菌物质的产生.     

两株防治烟草青枯病的烟草根际拮抗菌

  目的  进一步丰富烟草青枯病的生防资源。  方法  采用抑菌圈法和盆栽试验测定分离自烟草根际的细菌菌株GZYCT-4和GZYCT-9对青枯病菌的拮抗活性;运用PCR技术检测拮抗细菌的生防标记基因,利用趋化性试验研究烟草根系分泌物及其所含的各种有机酸对拮抗菌根部定殖的影响。  结果  （1）GZYCT-4和GZYCT-9对烟草青枯病菌均具有较好的抑菌效果,培养48 h的抑菌圈直径分别为16.64 mm和18.90 mm,盆栽试验表明灌根接种施用GZYCT-4和GZYCT-9可有效防治烟草青枯病。（2）GZYCT-4和GZYCT-9菌株均检测到8个枯草芽孢杆菌生防标记基因,其脂肽类粗提物对烟草青枯病菌的抑菌圈直径分别达到16.24 mm和20.71 mm。（3）GZYCT-4对红花大金元根系分泌物有较强的趋化反应,且红花大金元根系分泌物含有的草酸对GZYCT-4吸引作用较大,而GZYCT-9则对K326根系分泌物有较好的趋化反应,K326根系分泌物所含的柠檬酸对GZYCT-9有较好的吸引作用。  结论  GZYCT-4和GZYCT-9菌株均可有效地防控烟草青枯病,且对不同品种的烟草根系分泌物及其所含的各种有机酸有趋化差异。      

拮抗TMV菌株By33产抗病毒蛋白分离纯化及发酵特性研究

从烟田耕层土壤分离获得对TMV有拮抗作用的菌株By33.其无菌发酵液对TMV的体外钝化作用为81.81%,涂抹菌液24 h后接种,仍有73.01%的防效;硫酸铵沉淀获得的活性蛋蛋白对TMV体外钝化作用为85.35%.粗提蛋白液经PEG浓缩、凝胶过滤和柱层析分离纯化,再经SDS-PAGE电泳确定该蛋白分子量为27.5 KDa,对TMV的钝化效果为80.8%.NB培养基在仞始pH6.5、温度30℃、通气最150 mL/500 mL、180 r/min发酵培养48 h,产物活性最高.     

一株黄曲霉拮抗细菌的分离筛选及鉴定

通过稀释分离法从土壤中分离纯化出一株具有黄曲霉拮抗活性的菌株。该菌株的次生代谢产物具有抑制黄曲霉生长的效果,抑菌率可达63%。该菌对多种病原真菌抑制效果明显,具有广谱抑菌效果。根据形态学观察、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌。     

致病性尖孢镰刀拮抗菌的筛选与鉴定

该研究从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）拮抗效果最好的拮抗菌株,采用形态观 察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,并绘制该菌株生长曲线、考察其培养液中的蛋白类及脂肽类物质的抑菌效 果。 结果表明,从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌拮抗效果最好的拮抗菌株,编号为P9,其抑菌圈直径达到20 mm 左右。 经鉴定,拮抗菌P9为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;生长曲线结果表明,拮抗菌P9在第9小时生长速率达到最大;抑菌物 质提取实验表明,拮抗菌P9能分泌具有抑菌作用的蛋白类物质及脂肽类物质。     

扩展青霉拮抗菌的选育及抑菌机制初探

为选育有效抑制扩展青霉（Penicillium expansum）的拮抗菌,并初步探讨其抑菌机制。从苹果表面分离到拮抗扩展青霉的菌株BA-16,经形态学、生理生化及16S rRNA基因序列分析,对该菌进行鉴定,并采用低能N+注入技术对其进行诱变选育。采用双酶反应体系检测野生株和突变株对扩展青霉分泌磷脂酶的抑制效果以检测突变效果并探究其抑菌机制。经鉴定,BA-16-8该菌被鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。低能N+注入技术诱变选育出的突变株BA-16-8抑菌性能显著提高且遗传性能稳定。磷脂酶活性结果显示,相对于野生株,突变株代谢产物可显著抑制病原菌所分泌的磷脂酶A的活性,且其抑制效果随浓度的增高而增强,故推测拮抗菌可能通过该机制起到抑制扩展青霉的作用。本研究对于苹果采后青霉病的生物防治具有良好应用开发前景。      

黄瓜花叶病毒烟草分离物及其他7种分离物的生物学理化特性比较

从安徽烟草和黄瓜上各分离到黄瓜花叶病毒(代号分别为CMV-AT和CMV-Cu),并把它们与7种来自其他植物上的CMV进行了生物学理化特性方面的比较。结果显示8种CMV分离物的寄主范围及症状、体外抗性、提纯、病毒粒体形态、亚基分子量及等电点,氨基酸组成和血清学反应均有差异,其中以CMV-AT在寄主范围及症状和体外抗性方面的差异为最大,N. glutinosa和N. clevelandii是CMV-AT的诊断寄主。      

Synergistic and antagonistic effect of lactic acid bacteria on tyramine production by food-borne pathogenic bacteria in tyrosine decarboxylase broth

The effect of lactic acid bacteria (LAB) strains on tyramine (TYR) and also other biogenic amines (BA) production by eight common food-borne pathogen (FBP) in tyrosine decarboxylase broth (TDB) was investigated by using a rapid HPLC method. Significant differences were observed among the FBP strains in ammonia (AMN) and BA production apart from tryptamine, histamine (HIS) and spermine formation (p < 0.05). Salmonella paratyphi A was characterised as the main amine producer. LAB had an important synergetic role in some BA production by food-borne pathogenic bacteria, although the effect of some LAB strains on BA production was strain-dependent. Lactococcus spp. and Streptococcus spp. resulted in significantly higher TYR accumulation by Aeromonas hydrophila and Enterococcus faecalis in TDB. The presence of Lactococcus and/or Lactobacillus in TDB significantly increased HIS production by A. hydrophila, Escherichia coli, Ent. faecalis, Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa, whereas HIS accumulation was significantly reduced by Staphylococcus aureus, S. paratyphi A and Listeria monocytogenes.