酶解制备羊胎盘抗氧化肽工艺条件的优化

对羊胎盘下脚料为原料制备羊胎盘抗氧化肽的工艺进行了研究。以DPPH自由基清除率和水解度为考察指标,分别采用4种蛋白酶酶解制备羊胎盘抗氧化多肽,结果表明木瓜蛋白酶酶解产物的自由基清除率最高且水解度适中,因此木瓜蛋白酶被确定为水解酶。通过单因素试验与二次响应面回归分析对酶解工艺参数进行了优化。最佳酶解条件为:底物质量浓度33 mg/m L、pH 6.4、酶解温度55℃、加酶量4 900 U/g、酶解时间120 min,此时羊胎盘蛋白水解度为7.92%,10 mg/m L酶解产物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基与羟基自由基的清除率分别可达92.15%、93.45%与46.88%,显示出较好的抗氧化活性。     

抗氧化活性林蛙胎卵多肽酶解酶的筛选

以东北林蛙胎卵为原料,以酶解液对DPPH自由基和羟自由基(.OH)清除率为指标,分别研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶在最佳酶作用条件下酶解时间对酶解液清除DPPH自由基、.OH的影响,筛选出适合生产抗氧化活性林蛙胎卵蛋白肽的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶,再经过复合双酶酶解林蛙胎卵实验,结果表明,以中性蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解林蛙胎卵3h得到肽液的.OH清除率与DPPH自由基清除率最高,达到80.91%和70.45%。     

响应面法优化麦胚清蛋白制备抗氧化肽的酶解工艺

选择合适的蛋白质水解酶是制备高活性抗氧化肽的关键。以小麦胚芽清蛋白为原料,酶解产物的DPPH自由基清除率以及ORAC值为指标,从4种蛋白酶(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶)中,筛选得出中性蛋白酶为最佳用酶。然后通过响应面法对中性蛋白酶酶解工艺条件进行了优化。结果表明,中性蛋白酶酶解麦胚清蛋白的最佳酶解参数为:底物浓度2.4%、加酶量5 900 U/g、酶解p H 7.04、酶解温度55℃、酶解时间4 h。此酶解条件下,其1 mg/m L酶解产物的DPPH自由基清除率为65.93%,100μg/m L酶解产物的ORAC值为1 291.32μmol Trolox当量/g多肽。     

低值小杂鱼酶解产物清除DPPH自由基能力的研究

以中性蛋白酶为水解酶,以酶解产物对DPPH自由基清除率为指标,利用正交试验优化制备具有体外抗氧化活性的蛋白肽的酶解条件。结果表明,在中性蛋白酶的加酶量为15 mg/g、温度45℃、底物浓度5%、酶解3 h后,得到的酶解液对DPPH自由基清除率能达到85.46%。利用中性蛋白酶对低值鱼进行酶解可得到具有DPPH自由由基清除能力的活性肽。     

水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

驼乳与牛乳乳清蛋白酶解工艺优化及其产物抗氧化能力分析

为了研究不同蛋白水解酶对驼乳和牛乳抗氧化能力的影响,向驼乳和牛乳乳清蛋白中添加不同蛋白水解酶,探究乳清蛋白抗氧化活性肽的最佳制备条件,并对其抗氧化能力进行比较分析。首先从3种蛋白酶中筛选出最佳用酶,在此基础上以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-Trinitrophenylhydrazine,DPPH)自由基的清除率为响应值,进行单因素和响应面试验,同时研究了驼乳和牛乳乳清蛋白抗氧化肽对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的清除效果。结果表明,木瓜蛋白酶水解物的能力最强,水解度可达15%。驼乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6.4,酶解温度55 ℃,底物浓度2.73%,DPPH自由基清除率可达71.9%。牛乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6,酶解温度54 ℃,底物浓度4%,DPPH自由基清除率达69.9%。在最佳酶解条件下,驼乳乳清蛋白酶解液的·OH清除率为58.2%,O₂-·清除率为67.2%;牛乳乳清蛋白酶解液·OH清除率为52.2%,·O₂-清除率为60.7%。驼乳乳清蛋白酶解液的抗氧化性在不同程度上均高于牛乳乳清蛋白酶解液,驼乳和牛乳乳清酶解液的DPPH自由基清除能力较强,其次是O₂-·清除能力,·OH清除能力最弱。     

南瓜籽抗氧化肽的制备及分离纯化

以脱脂南瓜籽蛋白为原料,酶解制备抗氧化肽,并进行分离纯化。通过单因素试验,筛选最佳蛋白酶并考察了酶解p H、酶解温度、底物浓度、加酶量及酶解时间对水解度及DPPH自由基清除率的影响,在此基础上进行响应面试验优化酶解条件。然后采用大孔吸附树脂对南瓜籽抗氧化肽进行脱盐及分离纯化。结果表明:南瓜籽抗氧化肽的最佳酶解条件为选用碱性蛋白酶、酶解p H10.1、酶解温度52℃、底物浓度5.7%、加酶量2%、酶解时间120 min;在此条件下,20 mg/m L的南瓜籽抗氧化肽对DPPH自由基清除率为85.36%;75%乙醇溶液洗脱组分PD-3对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除率及总还原力最高,洗脱组分的抗氧化性能相比粗多肽大幅提高;PD-3组分肽含量79.63%,PD-3组分77.56%相对分子质量分布在2 000以下。     

大米蛋白的提取及抗氧化肽的制备工艺

本文以DPPH清除率为指标,研究不同蛋白酶、酶解温度、酶解时间和加酶量等因素对大米蛋白酶解产物的抗氧化活性影响,并采用L9(34)正交试验优化其酶解工艺。研究结果表明:中性蛋白酶是制备大米蛋白抗氧化肽的最佳水解用酶,其最佳酶解工艺为:酶解时间20 min,酶解温度50℃,加酶量4000 U/g。在此条件下,大米蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率可达80.17%。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

油莎豆粕抗氧化肽的制备及其稳定性研究

采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对油莎豆粕蛋白质进行复合酶解制备油莎豆粕抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为指标,确定制备油莎豆粕抗氧化肽的最佳条件。此外,评价了油莎豆粕抗氧化肽的体外抗氧化活性和稳定性。结果表明,制备油莎豆粕抗氧化肽的最适条件为碱性蛋白酶：木瓜蛋白酶=1∶1,酶的质量分数5%、底物质量浓度46 mg/mL、酶解温度61.7℃、酶解pH 6.7、酶解时间2.5 h,在此条件下,DPPH自由基清除率为88.45%。油莎豆粕抗氧化肽的体外抗氧化活性优良,当油莎豆粕抗氧化肽为5 mg/mL时,DPPH·清除率达88.69%、·OH清除率为42.57%、O■清除率为39.17%、ABTS自由基清除率达87.98%,还原能力为0.2627。油莎豆粕抗氧化肽具有热稳定性及冻融稳定性,在酸性和中性条件下稳定,但不耐受碱性条件,经胃肠消化后,活性下降比较明显。     

酶解青蛤边下脚料制备抗氧化肽的研究

为了充分利用青蛤(Cyclina sineusis Gmelin)加工过程中产生的边下脚料制备抗氧化肽,对青蛤边下脚料进行了匀浆预处理。以酶解产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶6种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶作为最佳酶解用酶,通过单因素试验和正交试验确定木瓜蛋白酶酶解青蛤边下脚料制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:加酶量2 500 U/g、底物浓度7%、反应pH 7.0、反应温度50℃、反应时间3 h。在该条件下对青蛤边下脚料的水解率为31.56%,酶解产物的DPPH自由基清除率为74.62%,羟自由基清除率为59.29%,超氧阴离子自由基清除率为27.84%。     

响应面法优化鲢鱼皮抗氧化肽的混合酶解工艺

以鲢鱼皮为原料,采用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶混合酶解法制备抗氧化肽,以1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除率为指标,通过响应面法优化酶解条件。结果表明,加酶量和酶解温度对产物的抗氧化活性影响显著,酶解工艺中加酶量与pH,温度与pH存在一定的交互作用。中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶活力配比1∶1(U/U),水解时间4 h时,最佳酶解条件为:加酶量8 257 U/g、酶解温度55℃、pH 7.3,在此条件下,1 mg/m L的鲢鱼皮抗氧化肽DPPH自由基清除率为33.86%。     

Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏制备抗氧化肽

通过Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白制备抗氧化肽,以酶解液的水解度(DH)、DPPH·和羟自由基清除率为指标,比较不同酶添加量、p H值、温度、料液比以及酶解时间对酶解效果的影响,并用响应面法优化Alcalase蛋白酶酶解反应的工艺条件。结果:Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白的最优工艺条件为:酶解p H9.0、底物质量浓度8 g/100 m L、温度62℃、加酶量4.26%、酶解时间3.7 h。在此条件下,蛋白质水解度为30.66%,DPPH自由基清除率为85.97%,羟自由基清除率为75.79%。对优化的酶解液进行氨基酸成分分析表明:大黄鱼内脏多肽含有丰富的组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro),具有较高的抗氧化活性。     

卵白蛋白多肽的酶解制备及抗氧化活性研究

以DPPH自由基清除率和水解度为指标,采用碱性蛋白酶酶解卵白蛋白制备抗氧化活性肽,考察底物质量分数、酶解时间、加酶量、温度等因素对制备的影响。正交实验结果表明,碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物质量分数4%、酶解时间6h、加酶量5500U/g,温度65℃,此条件下DPPH自由基清除率达到96.92%、水解度为57.14%。酶解时间对DPPH自由基清除率的影响最大,而底物质量分数对水解度的影响最大。     

双酶法制备米糠蛋白抗氧化肽

以提取的米糠蛋白为原料,研究其酶解工艺及其水解物的抗氧化活性。选取木瓜蛋白酶和风味蛋白酶双酶水解制备米糠蛋白抗氧化肽。结果表明,木瓜蛋白酶与风味蛋白酶酶活力之比为1∶1时,清除自由基的效果较佳。选取五个不同的影响因素,进行了酶解工艺的单因素及正交实验。实验结果得出较佳酶解参数为：底物浓度（[S]）1.5%,加酶量4500U/g,pH6.5,温度45℃,时间3h,在此条件下米糠蛋白水解物对DPPH自由基清除率为58.82%,对羟自由基的清除率为34.78%。     

响应面法优化制备南瓜籽抗氧化肽的工艺

以南瓜籽分离蛋白为原料,采用酸性蛋白酶酶解制备南瓜籽抗氧化肽。选用加酶量、酶解温度、pH值、底物质量浓度、酶解时间作为研究对象,以酶解液对DPPH自由基的清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用Plackett-Burman筛选试验确定显著因素,然后通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化制备南瓜籽抗氧化肽的酶解工艺条件。结果表明：酸性蛋白酶酶解南瓜籽蛋白质的最佳工艺条件为：酶解温度50℃、pH2.5、酶解时间5h、底物质量浓度0.05g/mL、加酶量6000U/g pro,在此条件下,DPPH自由基清除率可达到92.82%。     

金枪鱼骨抗氧化酶解物的工艺优化

为获得高抗氧化活性的金枪鱼骨粉酶解液。用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶4种蛋白酶对鱼骨粉进行酶解,以酶解液的DPPH自由基清除活性为主要指标,水解度为辅助指标进行分析,筛选出试验最适水解酶为中性蛋白酶。采用响应面设计方法对鱼骨粉酶解工艺进行优化。结果表明,骨粉最佳酶解工艺参数为:酶解温度56.22℃,酶解时间1.88 h,p H 6.15,液料比20.19∶1(m L∶g)。该条件下的鱼骨粉酶解液蛋白质浓度为9.30 mg/m L,水解度为12.34%,DPPH清除率为94.97%,羟基(·OH)自由基清除率为97.89%。骨粉酶解液显示出较强的抗氧化活性,且优于同浓度条件下的VC液抗氧化活性。     

响应曲面法优化鸭肫酶解制备抗氧化肽工艺

在单因素实验基础上应用响应面法对鸭肫抗氧化肽制备工艺进行优化。在前期筛选酶解鸭肫的最佳蛋白实验中得到木瓜蛋白酶为酶解鸭肫蛋白的最佳作用酶,优化的鸭肫抗氧化肽最佳工艺条件为:酶解时间4.0 h、加酶量0.5%、酶解温度55℃、料液比1∶3 g/m L。在此条件下,酶解鸭肫蛋白的水解度可达28.30%,DPPH·清除率为75.10%。结果表明该鸭肫抗氧化肽工艺制备可行,鸭肫蛋白水解度与DPPH自由基清除能力之间不存在相关性。     

蚕蛹蛋白酶解工艺及其水解产物抗氧化性

以蛋白水解度为指标,利用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白。通过单因素试验和正交试验对影响蚕蛹蛋白水解度的因素进行优化试验,分析了两种蛋白酶对蚕蛹蛋白酶解效果的影响,并测定水解产物抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶酶解蚕蛹蛋白时,最优工艺条件为底物浓度为1.2%、酶解时间3.5 h、酶解pH 10.0、酶与底物比5.0%,此时,蚕蛹蛋白水解度最高为27.38%;木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白时,最优工艺条件为底物浓度为1.5%、酶解时间5.0 h、酶解pH 10.0、酶与底物比9.0%,此时,蚕蛹蛋白水解度最高为18.26%。最佳工艺条件下,中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解产物DPPH清除率分别为83.84%和81.24%,超氧阴离子自由基清除率分别为6.36%和9.72%,羟基自由基清除率分别为43.30%和62.24%。综上所述,木瓜蛋白酶对酶解产物的抗氧化效果较好。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。