Apelin-13促进骨髓间充质干细胞增殖

目的探讨apelin-13是否促进骨髓间充质干细胞增殖。方法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,用不同浓度apelin-13(0.1μmol/L、1.0μmol/L和10.0μmol/L)处理细胞24 h后,分别用流式细胞术和噻唑蓝比色法(MTT),观察apelin-13对骨髓间充质干细胞增殖的影响。结果倒置显微镜下观察到apelin-13促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,流式细胞术检测结果表明,apelin-13刺激后处于S期和G2-M期的细胞数目显著增加,G0-G1期的细胞数目显著减少。进一步MTT结果表明,apelin-13处理后大鼠骨髓间充质干细胞增殖显著增加,并呈浓度依赖性。结论 apelin-13能促进骨髓间充质干细胞增殖。     

补肾壮骨颗粒含药血清对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨补肾壮骨颗粒含药血清对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法:选用10只6月龄SD大鼠去卵巢制作骨质疏松模型,对骨质疏松骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,传代后的MSCs分为OP组、OP+补肾壮骨颗粒含药血清组和OP+空白血清组,倒置显微镜观察各组MSCs的生长情况,进行形态学观察,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定生长曲线。结果:OP+含药血清组,MSCs呈典型的集落生长,细胞呈长梭形,突起细长且多,细胞增殖较旺盛,细胞数量不断增加,随着传代次数的增多,细胞增殖速度减慢。OP组及OP+空白血清组MSCs接种后胞体立体感下降,体积较大,细胞偏圆形,突起收缩,增殖速度较慢,细胞数量减少;随着传代次数的增多,细胞增殖速度显著减慢。OP+补肾壮骨颗粒含药血清组骨髓间充质干细胞增殖能力明显提高,生长曲线有显著性差异。结论:补肾壮骨颗粒含药血清能促进去卵巢骨质疏松大鼠MSCs的增殖。     

黄芪多糖诱导的DC联合CIK对人食管癌Eca-109细胞的影响

目的:观察黄芪多糖诱导的树突状细胞(dendritic cells,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)对人食管癌Eca-109细胞作用的影响。方法:取健康人外周血单个核细胞在体外培养DC和CIK细胞,观察经APS(astragalus polysaccharide,APS)诱导DC细胞和常规培养的DC细胞形态和数量的区别,并分为APS诱导组:APS-DCCIK组,即经黄芪多糖诱导的DC与同源CIK共培养组;对照组:DC-CIK+APS组,即常规方法培养的DC与同源CIK共培养加用等量黄芪多糖组(100 mg·L~(-1));空白组:DC-CIK组,即常规方法培养的DC与同源CIK共培养组。(各组DC∶CIK=1∶5)。检测三组靶效比分别为2.5∶1、5∶1、10∶1时对Eca-109细胞的毒性。结果:APS诱导的DC细胞较空白组细胞集落多而且大;APS诱导DC细胞数量显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);当DC∶CIK=1∶5时,APS诱导DC-CIK细胞数量明显高于空白组(P<0.05);DC∶CIK=1∶5,效靶比分别为2.5∶1、5∶1、10∶1时,APSDC-CIK组的细胞毒活性明显高于DC-CIK组和DC-CIK+APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:APS不仅可增加DC和DC-CIK细胞的增殖能力,还可增强DC-CIK细胞对食管癌Eca-109细胞的杀伤效应。     

肝细胞生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞的研究进展

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)最初发现于肝组织中,是一种多功能细胞生长因子,拥有促血管生成、促细胞分裂等作用.骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潜能.有研究[1]表明,将BMSCs与HGF联合起来,HGF可以抑制低营养引起的BMSCs凋亡,提高细胞存活率,同时BMSCs可以成为HGE基因理想的细胞表达载体.这可能成为组织工程和细胞治疗等领域的研究热点.本文就近年来HGF基因载体的转染效率,经HGF 修饰后的BMSCs (HGF-BMSCs)的生物学特性、其对实验动物模型的影响和HGF在口腔中的生物学作用等相关研究作一综述.     

骨髓间充质干细胞与相关载体的联合应用及调控

骨髓间充质干细胞（BMSCs）是成骨细胞的前体细胞,具有类似于多种中胚层及神经外胚层来源组织细胞分化的潜能。它具有较强的自我增殖能力、分化多潜能性、来源丰富、取材简单、对机体的损伤小等优点,是一种较为理想的种子细胞,在组织工程研究中占有一席之地。目前,BMSCs的分离培养方法已日趋成熟,     

骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响

目的:观察骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响。方法:采用人骨髓基质干细胞单独培养,按照干预药物浓度(mmol·L-1)分为:骨碎补总黄酮10-4mmol·L-1组、10-6mmol·L-1组、10-8mmol·L-1组和淫羊藿苷10-4mmol·L-1组、10-6mmol·L-1组、10-8mmol·L-1组。运用噻唑蓝比色法(MTT法),分别在实验第1天、第3天、第5天、第7天时观察其增殖情况。同时,运用蛋白免疫印迹方法(in-cell western blot)分别测定人骨髓基质干细胞培养时骨源性碱性磷酸酶蛋白的表达情况。采用一般线性模型的重复测量方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果:药物作用第5天,骨碎补总黄酮10-6mmol·L-1、10-8mmol·L-1组和淫羊藿苷10-4mmol·L-1、10-6mmol·L-1、10-8mmol·L-1组增殖能力优于对照组,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。在药物作用于人骨髓基质干细胞第9天时,骨碎补总黄酮10-6mmol·L-1组、淫羊藿苷10-6mmol·L-1组骨源性碱性磷酸酶的表达量是优于对照组的,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:骨碎补总黄酮、淫羊藿苷可以促进人骨髓基质干细胞的增殖,10-6mmol·L-1的骨碎补总黄酮、淫羊藿苷对BALP表达无显著影响。     

基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死的疗效观察

目的:探究基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠模型急性心肌梗死的治疗作用。方法:选取15 d龄SD乳鼠20只,平均分为观察组(血管内皮生长因子组)和对照组(DMEM组)两组,每组各10只大鼠,制备急性心急梗死模型后,观察组大鼠行基因修饰的骨髓间充质干细胞移植,对照组大鼠注射无血清DMEM,移植1个月后,观察两组大鼠的心脏功能情况。结果:观察组与对照组大鼠LVEF分别为(73.45±9.17)%、(43.26±6.33)%,观察组明显高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);两组大鼠镜下均见左室瘢痕组织形成,有新生血管生成,并出现左室重塑特征,观察组大鼠心脏改变较对照组明显;观察组大鼠与对照组大鼠血管密度分别为(45.69±4.28)、(17.41±3.67),观察组明显高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血管内皮生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对急性心肌缺血大鼠具有良好的治疗作用     

PM2.5对儿童骨髓基质细胞增殖及细胞因子G-CSF、GM-CSF分泌的影响

目的:研究大气细颗粒物(PM2.5)对儿童骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及细胞因子分泌的影响,探讨PM2.5对儿童骨髓造血微环境的影响。方法:采用不同浓度的PM2.5溶液染毒提取后培养的BMSCs,检测BMSCs增殖和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌量及m RNA表达水平。结果:随着PM2.5溶液浓度增加,BMSCs增殖逐渐增强,溶液浓度达到50μg/m L后BMSCs增殖水平逐渐下降,20μg/m L时试验组BMSCs的OD值各时间段均高于对照组,而100μg/m L时均低于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。低浓度(10、20μg/m L)PM2.5显著促进BMSCs分泌G-CSF、GM-CSF及m RNA表达,高浓度(50、100、200μg/m L)PM2.5抑制BMSCs分泌G-CSF、GM-CSF及m RNA表达,且浓度达到100μg/m L以上时,抑制效果达到显著水平。结论:高浓度PM2.5对儿童BMSCs具有一定的毒性作用。     

PI3K/Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用

目的研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),加入PI3K抑制剂LY294002(1、10μmol/L),应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Western blot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72 h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强(P<0.05)。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组(P<0.05)。成骨诱导培养3和7 d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组(P<0.05)。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7 d也显著高于1μmol/L组(P<0.05)。Western blot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7 d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix 4种基因mRNA表达(均P<0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。     

雌激素对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路的影响

目的观察雌激素对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞(OP-hBMSCs)Notch信号通路的影响。方法无菌条件下抽取绝经后骨质疏松患者和健康女性骨髓间充质干细胞(hBMSCs),分离培养并传代。通过流式细胞仪分子表型鉴定确定培养的细胞为骨髓间充质干细胞。比较绝经后骨质疏松患者与健康女性骨髓间充质干细胞的生物特征。通过实时定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)比较OP-hBMSCs与hBMSCs中Notch信号通路关键分子(Notch1、Jagged1、Hes1)的表达水平。对人骨髓间充质干细胞进行成骨诱导与成脂诱导,观察雌激素对Notch信号通路Notch1,Jagged1、Hes1表达的影响。结果与正常健康女性相比,绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路减弱(P<0.01)。给予雌激素后,可逆转绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞已减弱的Notch信号通路活性,使Notch信号通路下游分子Hes1表达上升近3倍。雌激素促进OP-hBMSCs向成骨分化,抑制成脂分化,Notch信号通路关键分子的表达均明显增高(P<0.01)。结论 Notch信号通路在绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞显著减弱。Notch信号通路可能在绝经后骨质疏松症的发生过程中起着重要作用,可能成为雌激素治疗绝经后骨质疏松症的新机制。     

多药耐药基因转染对人胎盘源性间充质干细胞生物学特性影响研究

目的 将多药耐药基因(mdrl)通过逆转录病毒载体导人人胎盘源性间充质干细胞(PMSCs),评价耐药基因导人对P-MSCs干细胞特性的影响.方法 采用胰酶消化法自人足月胎盘组织中分离培养间充质干细胞(MSCs),将含有mdr1基因和绿色荧光蛋白(CFP)报告基因的重组逆转录病毒载体转染P-MSCs;应用流式细胞术检测转染后P-MSCs表型特征,四唑盐比色法和碘化丙啶标记测定其增殖活性和细胞周期,透射电镜下观察转染P-MSCs超微结构变化,条件培养液诱导法分析转染后P-MSCs向脂肪细胞、成骨细胞定向分化能力.结果 转染P-MSCs表达干细胞表面标志,如CD29,CD44和CD73,细胞倍增时间为23.9 h,生长周期仍符合干细胞增殖的特点,超微结构观察转染P-MSCs表面微绒毛增加,细胞内线粒体丰富,粗面内质网轻度扩张,且在特异诱导条件下具有向成脂、成骨定向分化潜能.结论 mdr1基因体外转染人P-MSCs对其干细胞特性无显著影响,这可为P-MSCs在大剂量肿瘤化疗中的应用提供实验参考.     

间充质干细胞在缺血缺氧环境中的存活情况

生理条件下间充质干细胞(MSCs)内的氧浓度低于外界正常氧浓度,处于相对低氧状态;移植到体内的MSCs所处生存环境因损伤、缺血导致氧浓度更低,这种缺血缺氧环境对MSCs生存造成极大影响。缺血缺氧环境下,MSCs会启动自身抗凋亡机制维持细胞的存活率。此外,低氧预处理、药物应用、充足的葡萄糖供给、部分细胞因子的添加和基因工程技术的应用也可不同程度地促进缺血缺氧环境中MSCs的生存。     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果 miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P<0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P<0.05)。结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

夏枯草提取物联合化疗药物对淋巴瘤细胞增殖的影响

目的:研究中药夏枯草提取物(Prunella vulgaris Linn. extract,PVE)联合化疗药物对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响.方法:MTT法检测PVE分别联合紫杉醇(paclitaxel,TAX)、多柔比星(adriamycin,ADM)对Raji细胞的生长抑制率;FCM法检测PVE与TAX联合对Raji细胞周期分布及凋亡的影响;免疫组织化学法检测PVE对Raji细胞内survivin及caspase-3蛋白表达的影响.结果:PVE、TAX及ADM对淋巴瘤Raji细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PVE在0.8～0.000 8 μg/mL浓度范围内可增强TAX对Raji细胞的抑制作用(P<0.01);在0.08～0.000 8 μg/mL浓度范围内与ADM联合使用时细胞生长抑制率较单用ADM时明显增高(P<0.01).与TAX单用组比较,PVE与TAX联用组的S期细胞数下降,G2/M期细胞数明显升高.免疫组织化学检测结果显示,PVE(30 μg/mL)可使Raji细胞中caspase-3蛋白表达增强,survivin蛋白表达减弱.结论:PVE可增强Raji细胞对TAX及ADM的敏感性.     

芹菜素诱导膀胱癌5637细胞凋亡研究

目的:研究芹菜素对人膀胱癌5637细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用20~80μmol/L芹菜素处理5637细胞,MTT法检测膀胱癌5637细胞增殖抑制率;细胞软琼脂克隆形成实验检测细胞成瘤能力的抑制效率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变。结果:芹菜素呈浓度依赖的抑制5637细胞的增殖;80μmol/L芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;5637细胞的克隆形成能力随着芹菜素浓度增加而显著降低。结论:芹菜素能够抑制人膀胱癌5637细胞的增殖,抑制5637的克隆形成,并诱导细胞凋亡。     

试论我国信访权的现状及存在的问题

信访活动已经成为我国公民民意表达、利益诉求的一个特色社会现象,信访权利是中国公民基本权利的直接体现。解决信访问题、保障公民固有权益也是当前社会建设的重要内容。作为一个自力救济的重要途径,长期以来,我国涉法涉诉信访工作面临着巨大困境。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。