吸附精制白喉—破伤风二联类毒素在控制白喉暴发流行中的作用

<正> 我县已有17年无白喉病例的报告。于1989年9月下旬～10月下旬在石门乡发生了白喉的暴发流行,历时31天。应用长春生研所生产的吸附精制白喉—破伤风二联类毒素(下简称 DT)做大面积应急预防接种后,有效地控制了白喉的发病及流行。现将结果报告如下:     

应用皮内多点攻毒法检测吸附精制白喉类毒素效价

将待检吸白类与参考标准品免疫动物后进行皮内攻毒,记录得分结果进行量反应平行线分析,其可靠性测验结果表明,剂间与回归项变异皆十分显著;偏离平行项、二次曲线、反二次曲线项以及试品间项变异皆不显著。这说明3批待检吸白类与参考标准品的剂量反应回归,是平行直线关系。所检定的3批吸白类效价分别为55.47、56.74和47.06IU/0.5ml,皆超过了WHO规程规定的30IU/0.5 ml的水平。以上事实说明,WHO所推荐的皮内多点攻毒法检测吸白类效价,方法是可靠的和敏感的。     

白喉类毒素的超敏感试验

<正> 接种吸精白类或含有该成分的制品,除能诱导机体产生白喉抗毒素外,尚能引起一定程度的全身与局部反应。为了解产生这些副反应的规律,我们以豚鼠为动物模型,采用迟发性超敏感试验法对其进行了研究。方法是将2.0Lf 的吸精白类或吸精白破二联(含于0.5ml 盐水中),注射于体重400～500g 白豚鼠后腿肌肉内,使其致敏。在26～28日时,于动物背部皮内注射不同激发量的普通和精制白喉类毒素,并于24和48     

吸附精制白喉—破伤风二联类毒素成人接种后的血清学效果

本文报告用两种配方的吸附精制白喉—破伤风二联类毒素(DT),在浙江省黄岩县中学生和青工中进行免疫效果观察。免疫后1个月、 1年和3年白喉抗体保护水平分别达95％、88％和80％以上。免疫后1个月和1年破伤风抗体保护水平分别达85％和81％以上。白喉和破伤风免疫后抗体滴度的几何平均值(GMT)分别比免疫前增加4～28倍和7～11倍。表明该制剂接种1次即可获得较为满意的血清学效果,可供青少年和成人作加强免疫或应急接种用。     

应用甲醛—赖氨酸解毒结合中空纤维超滤提高精制白喉类毒素纯度

精制白喉毒素单纯用甲醛解毒,解毒过程Lf/ml损失平均为14.81％,Lf/mg PN下降平均为13％;采用甲醛-赖氨酸解毒,解毒过程Lf/ml无损失,Lf/mg PN反而上升,平均为6.74％,纯度平均为2216Lf/mg PN。该制品经截留分子量为3万的中空纤维柱超滤后,纯度提高15.21％,平均为2540Lf/mg PN。HPLC仪分析结果表明,超滤后的特异类毒素成分由原来的78.26％增加至91.36％,非特异成分由原来的21.74％降低至8.64％。特异类毒素成分的分子量约为6.45万。     

精制破伤风类毒素的简易方法

<正> 毒素制造选用长春 LNO.58菌种和黄豆蛋白水解液培养基,产毒一般为60～80Lf/ml,除菌加甲醛后进行精制提纯。操作过程为:一次沉淀加30%(w/v)硫酸铵,室温过夜,滤过收集沉淀,透析,溶解,再加约1.5%活性炭吸附,最后除菌即为精制类毒素。     

白喉类毒素残余毒性检测新方法的建立

目的建立检测联合疫苗中白喉类毒素残余毒性的新方法,以替代现有的家兔皮肤试验法。方法采用Vero细胞法检测白喉类毒素的残余毒性,对该方法的特异性、灵敏度(最低检测限)和重复性进行验证,并对Vero细胞法与家兔皮肤试验法测定白喉类毒素残余毒性的结果进行比较。结果 Vero细胞可特异性检测白喉类毒素的残余毒力,该方法的最低检出限为10-8 LD50白喉毒素,重复性良好,灵敏度比家兔皮肤试验法高10 000倍。结论 Vero细胞法可用于白喉类毒素残余毒性检查和毒性逆转检查,该方法特异性强,灵敏度高于家兔皮肤试验法,适用于以白喉、破伤风为基础的联合疫苗(DT-based combined vaccines,DT combos)的安全性评价。     

破伤风类毒素精制提纯方法的研究

<正> 1985年,我所破伤风类毒素采用六偏磷酸钠酸沉淀——超滤法(简称A法)进行精制,使精制破伤风类毒素的质量有了明显提高。为了进一步提高精破类的质量,尽快达到国际水平,1986年,我们对WHO破伤风类毒素精制提纯法(简称B法)进行了试验研究,并与A法进行了对比。结果表明,     

Vero细胞法测定白喉类毒素效价方法的建立

近年来,WHO已推荐用Vero细胞法代替经典的动物体内法,体外测定白喉抗体。为使我国的检定规程与WHO接轨,并配合上海、兰州两条DPT生产线通过世行的验收（其中白抗的测定要求使用Vero细胞法）,我们建立了Vero细胞法以测定白喉类毒素效价,并从不同方面验证了本方法的重复性与可靠性。1．实验的重复性格国家标准品与待检品DPT的免疫剂量进行3次试验,每个剂量的反应值见表1,从中可见3次试验中国家标准品结果一致,DPTI及DppZ因其本身效价不同而反应值可见差异,而Dppl的2次试验中反应值一致,第一次测定效价为452IU／nil,第二…     

小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体试验条件的优化

目的优化小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体的试验条件。方法用含吸附白喉类毒素的制品免疫NIH小鼠,35d后眼眶采血,分离血清,对用小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体的试验条件进行优化。结果确定了小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体的最佳试验条件。结论优化试验条件的小鼠-Vero细胞测定白喉类毒素抗体的方法,能客观准确地评价白喉类毒素免疫保护效力,且具有特异、灵敏、重复性好的特点。     

精制白喉标准毒素及精制锡克试验毒素的制备与检定

采用纯度为2000Lf/mgPN以上的精制白喉毒素,加到甘油明胶缓冲液中,制成约1000MLD/ml的精制白喉标准毒素。放置4℃保存10年,其MLD/Lf仅下降13.6％,证明稳定性良好;而原制白喉标准毒素在同样条件下MLD/Lf竟下降94.6％,稳定性很差,其放置的前3年,MLD/Lf呈急剧直线下降,后7年则呈缓慢下降。用精制白喉标准毒素共生产精制锡克试验毒素10批,经检定,MRD/ml和MLD/ml皆符合我国规程要求;结合力,7批符合英国药典规定,另3批经20％稀释亦能达到上述要求。原制锡克试验毒素的结合力一般为精制的2～5倍。     

载体蛋白质破伤风类毒素两种精制方法的研究

目的比较两种柱层析方法纯化破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)化学特性和免疫原性。方法以硫酸铵盐析一步纯化TT原液,再分别以Superdex 200和Sephacryl S-300 HR柱层析进一步纯化,并对纯化TT进行各项化学特性及小鼠免疫原性检测。结果经硫酸铵盐析纯化,TT纯度可达85%左右,再经柱层析纯化后,两种方法测定(SDS-PAGE和HPLC)TT单体含量(纯度)均可达95%以上,盐析和柱层析两步纯化后,蛋白质回收率均在45%以上,各项检定指标均符合《中国药典》三部(2005年版)中《吸附破伤风疫苗制造及检定规程》的要求;纯化TT在小鼠体内产生了较好的免疫原性。结论经一步或多步纯化可显著提高TT的纯度,并最大限度地减少TT二聚体和多聚体含量;采用两种柱层析方法制备的纯化TT具有更好的化学特性和良好的免疫原性。本实验为多糖-蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质。     

接种白喉类毒素致过敏性休克并发阵发性痉挛一例报告

<正> 患儿林××,男,7岁,于1987年11月18日上午10时在右上臂三角肌皮下接种精制白喉类毒素0.5ml 后,即刻出现面色苍白,口唇发绀、神态不清、呼吸困难、脉搏细弱、四肢厥冷,血压下降为8/5.3kPa,全身频繁的阵发性痉挛等症状与体征。立即皮下注射肾上腺素,10分钟后,患儿神志恢复正常,但阵发性痉挛未能缓解,约每10秒发作     

絮状试验用白喉和破伤风类毒素标准的国际协作试验

按照国际协作试验计划,本试验用 Ramon 絮状试验方法标化了絮状试验用白喉类毒素和破伤风类毒素国际标准各一批,推荐品即 DIFT 和 TEFT。本试验室标定结果与由13个实验室参加的国际协作标定结果几乎相同。以 DIFT 和 TEFT 为标准,用 Levine-Wyman 的试管絮状试验法和火箭电泳测定了几批白喉类毒素和破伤风类毒素的 Lf,其结果可与 Ramon 方法测定结果相比,证明火箭电泳可用于定量测定类毒素(或毒素)的絮状单位。     

第三批吸附白喉类毒素国家标准品的制备和标定

目的建立第三批吸附白喉类毒素国家标准品,用于效价测定。方法选用白喉疫苗生产菌株(PW8,CMCC38007),经复苏传代和产毒培养后,收获白喉毒素,采用先精制后脱毒的方法获得精制白喉类毒素原液,再加入氢氧化铝吸附后分装冻干,作为备选品。按《中国药典》三部(2010版)要求对原液和冻干品进行检定。以WHO国际标准品(07/216)和中国国家标准品(002)为标准,采用小鼠Vero细胞法在3个实验室进行协作标定。结果该批标准品的各项检测指标均符合国家标准品的规定;经协作标定,获得的20个效价单位标定结果合并统计后几何均值为289.3 IU/ml,95%可信区间为276.0~303.2;同时用WHO国际标准品(07/216)和中国国家标准品(002)进行标定比较,两者差异无统计学意义(P0.05);标准品效价稳定性考核结果证明,我国白喉类毒素国家标准品在保存期内效价稳定。结论所制备的标准品各项指标均符合要求,其效价定为289.3 IU/支,可作为第三批吸附白喉类毒素国家标准品用于效价测定。     

吸附精制破伤风类毒素几种效力检定方法的比较

本文提供了用三种效力试验方法检定吸附精制破伤风类毒素的结果。WHO推荐的方法准确性高,但耗用动物过多。中国规程法没有要求用标准品作对照,因此对检品检定的结果,易受季节和动物饲养条件的影响。当前较为合理又简便易行的精破类检定方法是将待检品与标准品同时免疫动物,然后测定其血清抗毒素效价,如待检品的滴度等于或高于标准品即可认为合格。     

腮腺炎疫苗与白喉、破伤风类毒素同时或分别接种的免疫应答

目的了解腮腺炎疫苗与吸附精制白喉、破伤风二联类毒素（ＤＴ）能否同时接种,为制定免疫方案 提供依据。方法用冻干流行性腮腺炎减毒活疫苗和吸附精制白、破二联类毒素同时和分别接种８～１４岁的寄宿 学生,观察其免疫应答。结果两苗同时接种与分别接种临床反应及免疫应答差异均无显著意义。结论两苗是 可以同时接种的。     

银杏叶黄酮粗提物再精制

确定银杏叶黄酮提物再精制的新方法－－恒流反相高压液相色谱梯度洗脱法，填料为反相YWG－C18H37，10－30μm，梯度洗脱液为甲醇：水＝3：7和甲醇：水＝4：6及纯甲醇。总黄酮含量可达90％（HPLC）以上。     

再谈氨碱法盐水精制的误区

对氨碱法纯碱生产中 ,传统的用石灰乳直接加入到饱和的粗盐水中 ,以除去其中杂质镁离子的方法提出质疑。从化学反应推动力、溶解度及反应速率等方面 ,对该传统工艺方法进行剖析 ,认为用石灰乳直接加入到粗盐水中来除镁 ,是欠佳的选择 ,走入了误区。并提出以氢氧化钠来除镁 ,是走出误区较好的方法。