发酵法生产衣康酸——高产菌株的选育

以生产使用菌种土曲霉NLYT234为出发菌株,经紫外线、高温、氯化锂诱变处理和多次分离、筛选获得一支性能稳定的衣康酸高产突变株土曲霉NLYT-2—801,在含淀粉糖140g／L的培养基上40-42℃摇瓶72hr,衣康酸产量92．1g／L,糖酸转化率63．18％-67．83％。经100m^3发酵罐生产验证,菌种诱变后酸度较以前上升21％,糖酸转化率上升一个百分点以上。     

发酵法生产衣康酸技术的研究——衣康酸生产菌株的选育(Ⅰ)

以实验室保藏菌种土曲霉No .2 0 1为出发菌株 ,经紫外线、亚硝基胍 (NTG)、高温、硫酸二乙酯 (DES)诱变处理和多次分离获得一支性能稳定的衣康酸高产突变株土曲霉HAT418,36℃摇瓶发酵 72h ,衣康酸产量 72 1g/L ,糖酸转化率 60 0 8%。发酵条件优化后 ,在含糖 12 0～ 160 g/L的培养基上 ,产酸 81 4～ 10 1 1g/L ,糖酸转化率 63 18%～ 67 83%。发酵液经高压液相色谱分析 ,衣康酸占总酸的 98 6%。     

发酵法生产衣康酸技术的研究—衣康酸生产菌株的选育（I）

以实验室保藏菌种土曲霉No.201为出发菌株，经餐外线，亚硝基胍（NTG），高温，硫酸二乙酯（DES）诱变处理和多次分离获得一支性能稳定的衣康酸高产突变株土曲霉HAT418，36℃摇瓶发酵72h，衣康酸产量72.1g/L，糖酸转化率60.08%，发酵条件优化后，在含糖120～160g/L的培养基上，产酸81.4～101.1g/L，糖酸转化率63.18%～67.83%，发酵液经高压液相色谱分析，衣康酸占总酸的98.6%。     

淀粉水解程度对土曲霉发酵生产衣康酸的影响

将玉米淀粉进行酸水解和酶水解,水解液作为土曲霉At394的碳源进行发酵.水解程度直接影响到衣康酸产量,适宜水解糖的DE值为35%.发酵培养基配方为淀粉液化水解糖(DE值为35%)100g/L,NH4NO3 3g/L,MgSO4·7H2O 4g/L,玉米浆2g/L,KH2PO4 0.2g/L,pH3.0.在最适条件下,摇瓶发酵衣康酸产量可达54.1 g/L,糖酸转化率为59.2%.     

衣康酸发酵工艺的初步研究

以土曲霉为出发菌株,探讨了衣康酸发酵工艺条件对产酸的影响。结果表明：以葡萄糖为碳源,ＮＨ４ＮＯ３为氮源,玉米浆为辅助碳源有利于提高产酸。Ｍｇ２＋能促进菌体生长和发酵产酸,Ｐｂ２＋和Ａｌ３＋抑制菌体生长及产酸。Ｍｇ２＋可以解除Ｐｂ２＋和Ａｌ３＋对产酸的抑制作用。Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｕ２＋等对产酸影响不明显。     

蛋氨酸高产菌株诱变育种

本实验以北京棒杆菌AS1.299作为出发菌株,采用紫外线和亚硝基胍(NTG)作为诱变剂,进行诱变育种,以期获得蛋氨酸高产菌株。研究结果表明:紫外诱变菌悬液最佳菌浓度为103CFU/ml,最佳紫外照射时间为18s;NTG诱变最佳菌浓度为102CFU/ml,NTG诱变的最佳诱变时间为40min;通过三轮紫外和NTG交替诱变处理后可提高该菌株蛋氨酸产量,其中突变株N3-10蛋氨酸产量为1.103g/L,比原菌株蛋氨酸产量增加了0.703g/L,5次传代表现出较好的遗传稳定性。     

衣康酸生产工艺条件优化研究

利用正交试验法对土曲霉发酵生产衣康酸工艺条件进行研究,获得了较优越的工艺条件,使衣康酸得率提高到43.8g/L。      

离子注入选育高产衣康酸菌株及其发酵条件优化研究

采用低聚氮离子束注入衣康酸生产菌株土曲霉ZJB－04173,获得一株衣康酸产量提高的突变株HA90,该菌株在出发培养基37cC℃。PLackett-Burman实验结果表明葡萄糖,硝酸铵和硫酸镁对菌种产酸有显著的影响。然后利用Box—Behnken设计及响应面分析确定这三个主要因素最佳浓度。在优化后的培养基中进行发酵,产酸量最高达到84g／L,比出发菌株提高了50％。     

衣康酸生产工艺条件优化研究

利用正交试验法对土曲霉发酵生产衣康酸工艺条件进行研究,获得了较优越的工艺条件,使衣康酸得率提高到43.8g/L。     

发酵法生产衣康酸的工艺条件研究

以土曲霉TN-474为出发菌株,研究探讨了衣康酸发酵工艺条件对产酸的影响。通过试验优化培养基组成及发酵条件为:工业葡糖140g/L,NH4NO33.0g/L,玉米浆干粉0.2g/L,KH2PO40.05g/L,MgSO4.7H2O 0.5g/L,CuSO4.5H2O 65mg/L,初始pH2.0,接种量为10%~12%,装液量为60mL~80mL;在37℃、220r/m in的条件摇瓶发酵144h,土曲霉TN-474发酵衣康酸的产率达到71.83g/L,转化率为56.7%。     

蔗糖直接发酵衣康酸高产菌株的选育

本文工作以土曲霉NRRLl960为出发菌株，采用Co^60、紫外线、亚硝基胍、光敏试剂8—MOP处理等多种理化方法选育衣原酸高产菌株。所得菌株T730在含蔗糖10％的培养基中，于30～35℃在10L发酵随中培养约66h，产酸率达6．6％，糖酸转化率达66％。该菌株转化率高。稳定性好，具有很大的生产应用价值。     

提高衣康酸发酵产量的一种方法-原生质体融合

为了提高衣康酸发酵产量,我们制备了衣康酸土曲霉原生质体和柠檬酸黑曲霉原生质体,并进行了融合,以融合子为起点,进行诱变和筛选.实验结果表明,这种方法既简易又有效.     

轮梗霉高产花生四烯酸的诱变育种研究

利用紫外线作为诱变剂,分别通过15℃的低温和0.09mg/ml乙酰水杨酸的筛选作用,筛选到两株花生四烯酸产量有较大提高的菌株,分别为LT1.12菌株(花生四烯酸产量提高46.41%)和A1.13菌株(花生四烯酸产量提高53.15%)。通过对脂肪酸组分的分析,确定乙酰水杨酸为更加具有针对性的筛选条件。并对用乙酰水杨酸筛选到的A1.13菌株进行了传代稳定性实验,证实A1.13菌株花生四烯酸产量提高这一性状是可以稳定遗传的。     

产酸性蛋白酶菌株的诱变育种研究

从玉米浸泡液中筛选产酸性蛋白酶的菌株,命名Y-5.0,通过对选育获得的Y-5.0进行紫外-亚硝基胍交替诱变研究发现:紫外诱变最佳菌体稀释度为10-5、最佳照射时间为20 s;NTG诱变最佳浓度为500μg/m L、最佳诱变稀释度为10-4、最佳诱变作用时间为50 min。通过三轮紫外和亚硝基胍(NTG)交替诱变筛选获得高产蛋白酶的菌株N3-15,其产蛋白酶的活力最高为12 152 n Kat/m L,其大大高于原始菌株Y-5.0的酶活,而且该菌株N3-15传代5次产量稳定。     

L-乳酸高产菌株的诱变育种

对L-乳酸细菌(Lactobacillus casei FH2)进行诱变,得到产酸量高的突变株FH2-8-9,并与出发菌株FH2的性能进行比较,结果表明:①FH2-8-9的产酸速率明显高于FH2,且维持时间较长,具有更高的耗糖速率和糖转化率;②突变株FH2-8-9对乳酸的耐受性好,进入对数生长期的时间短,能保持更长的对数生长期,最终菌体浓度高于出发菌株FH2,FH2-8-9的菌体密度比FH2高55%.     

发酵法生产衣康酸技术的研究——衣康酸发酵工艺条件的研究(Ⅱ)

以衣康酸高产菌株土曲霉HAT418为出发菌株 ,研究探讨了不同碳源、氮源、无机盐类以及温度、起始 pH值等因素对衣康酸发酵的影响 ,确定了较优培养基组成和发酵工艺条件。实验结果表明 ,土曲霉HAT418适合于多种原料的衣康酸生产 ,如玉米淀粉、山芋粉、低脂玉米粉、蔗糖、口服葡萄糖等 ;硝酸铵、硫酸铵是衣康酸发酵的最适氮源 ,玉米浆是必要的辅助氮源 ;适宜的发酵起始pH值在 2 5～ 3 0 ;适宜的发酵温度为 3 6～ 3 7℃ ;Mg2 + 对土曲霉HAT418菌株的衣康酸发酵影响显著 ,适量的Mg2 + 是衣康酸发酵必需的 ;Ca2 + 可抑制杂酸的形成 ,培养基中添加 0 1g/L的CaCl2 可以使发酵液中衣康酸占总酸的比例提高 1 2 3 %。土曲霉HAT418菌株以 12 0～ 160 g/L的玉米淀粉双酶水解糖为碳源 ,NH4NO3 为主要氮源 ,摇瓶发酵 80h左右 ,衣康酸产酸率达到 83 0～10 1 1g/L ,糖酸转化率为 63 13 %～ 69 17% ,发酵残糖为 0 9～ 9 7g/L。     

高产D-乳酸生产菌株的选育

以凝结芽孢杆菌JD-063D为出发菌株,采用紫外线、硫酸二乙酯、钴60γ-射线辐照、微波进行复合诱变,得到正突变菌株,进行发酵检测和遗传稳定性试验,最终筛选出一株JD-76D,该菌株产酸由出发菌株的61 g/L提高到145 g/L,D-乳酸纯度由原菌株的97.5%增加到98.7%以上。     

丙酸高产菌株的复合诱变选育

以费氏丙酸菌IFFI.10019为出发菌株,经2次紫外线、2次亚硝基胍、1次亚硝基胍-氯化锂多重复合诱变处理,选育获得丙酸高产菌株NL—3,丙酸产量由原来的0.20g/L,提高到1.23g/L,提高率达到515%。实验证明采用多因子复合诱变,特别是NTG-LiCl复合诱变,能有效改变菌株对诱变因素的敏感性,提高变异率,逐步提高突变株的产丙酸水平。