评估CHROMagar~金黄色葡萄球菌显色培养基在化妆品检验中的应用效果

目的评估CHRO Magar Staph.aureus(CSA)金葡菌显色平板和血琼脂平板(BA)用于化妆品金黄色葡萄球菌的检测效果。方法使用47株球菌菌株在CSA和BA上作典型菌落生长测试和比较CSA和血浆凝固酶反应在鉴定金黄色葡萄球菌中的敏感性和特异性;应用CSA和BA分别检测58件不同类型的化妆品样品。结果CSA和BA对所有金黄色葡萄球菌的菌株均为单一的特征性菌落生长,也有少数凝固酶阴性葡萄球菌表现有假阳性菌落特征;CSA和血浆凝固酶鉴定金黄色葡萄球菌的敏感性和特异性均为100%;CSA和BA在样品中分别检测出7株和1株金黄色葡萄球菌(X2=4.83,P<0.025),总阳性率为12.07%。结论CSA在分离实际样品过程中的筛选效率和敏感性均高于BA,且节省了鉴定菌株所用的时间和费用,建议将CSA作为检测、鉴定化妆品中金黄色葡萄球菌的常规培养基应用。     

6株金黄色葡萄球菌菌株的鉴定

目的对6株金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus,简称金葡菌)菌株进行鉴定,为研制相关疫苗提供参考。方法将稀释的6株疫苗研制用备选金葡菌菌株49521、12602、49525、12605、55804、10832及质控菌株25923、12228菌悬液划线接种TSA平板及Columbia血平板,观察菌落形态,并涂片染色镜检;利用API Staph生化试剂盒、staphylase test血浆凝固酶检测试剂盒及30μg头孢西丁药敏纸片对菌株进行鉴定;利用PCR法鉴定菌株16S r RNA基因、荚膜基因型及mec A基因;用系列稀释的菌悬液经腹腔注射BALB/c小鼠,初步测定菌株毒力。结果6株金葡菌经平板培养,可见圆形、凸起、不透明、有光泽的菌落,Columbia血平板培养的菌落周围可见透明溶血环,镜检结果为革兰阳性球菌,呈单、双或葡萄串状排列。6株菌株的生化反应结果相同,且与质控菌株25923反应结果一致;6株菌株的凝固酶试验结果均为阳性,均对头孢西丁敏感,均未扩增出mec A基因片段,为甲氧西林敏感菌株(methicillin sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)。6株菌株均扩增出1 544 bp的16S r RNA基因片段,与Gen Bank中的参考序列NR_075000.1的同源性均为99%;菌株49521、12605、55804、10832均扩增出340 bp的cap5基因片段,与Gen Bank中序列U81973.1的同源性为99%~100%;菌株12602、49525均扩增出171 bp的cap8基因片段,与Gen Bank中序列U73374.1的同源性均为100%。6株菌株的半数致死量(LD50)均在2.5×108~2.5×109 CFU之间。结论对6株疫苗研制用备选金葡菌进行了鉴定,为疫苗研制中菌株鉴定及不同荚膜型菌株的选择提供了参考。     

化妆品中致病菌检测规范方法和微生物富集方法的评价

为考察《化妆品安全技术规范》（2015年版）的方法（以下简称规范方法）中培养基质量对试验结果的影响，以及微生物富集方法（microbial enrichment general，以下简称ENR方法）和规范方法的适用性和一致性，以20株大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌及其染菌样品进行试验，比较了4种不同品牌培养基对规范方法试验结果的影响。结果显示，4种品牌培养基对金黄色葡萄球菌检测结果和化妆品染菌样品的检出率存在显著差异，ENR方法的适用性检测结果显著优于规范方法。基于试验结果，本研究发现市售培养基质量良莠不齐；对于化妆品染菌样品，ENR方法的检出率显著优于规范方法。     

保健食品中3种病原菌多重PCR快速检测方法的建立及验证

目的建立快速检测保健食品中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR(multiplex PCR,m PCR)方法,并进行验证及初步应用。方法以提取的各菌株基因组DNA为模板,利用Gen Bank中登录的沙门菌inv A、志贺菌ipa H、金黄色葡萄球菌nuc基因序列设计引物,采用优化后的反应体系及确定的反应条件进行PCR扩增,扩增产物经3%琼脂糖凝胶电泳鉴定,对建立的方法进行特异性、敏感性、重复性验证。将沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌等量混合后,进行10倍系列稀释,加至10批无病原菌蛋白质粉和10批无病原菌减肥茶样品匀浆中,用建立的方法进行PCR扩增,并与GB常规生化检测结果进行比较。结果确定m PCR反应体系为:10×PCR buffer 2.0μl,d NTPs 2.5μl,Taq DNA酶0.6μl,上下游引物各1.5μl,Mg2+1.0μl,补加dd H2O至25μl。10株细菌中,沙门菌、2株志贺菌、金黄色葡萄球菌扩增结果为阳性,其他菌株为阴性,inv A、ipa H、nuc基因扩增片段与Gen Bank登录的序列同源性分别为99%、99%和100%;沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌菌株均能在101~105 CFU/ml浓度时扩增出特异性目的条带;5个浓度混合菌液扩增产物均可见特异性反应条带。该方法扩增出10批人工添加细菌蛋白质粉和10批人工添加细菌减肥茶中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌的特异性基因片段,检出限均为102 CFU/ml,与GB常规生化检测结果一致。结论建立的保健食品中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌m PCR检测方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可满足不同检验机构快速、准确检测保健食品中多种病原微生物样品的实际需要。     

2018—2020年广西化妆品微生物污染状况分析及污染菌鉴定

考察分析广西化妆品微生物污染状况。按《化妆品安全技术规范》（2015年版）对化妆品进行微生物学指标检验，对结果进行统计分析，通过MALDI-TOF-MS和16S rRNA测序技术等方法鉴定检出污染菌，并对污染菌株进行同源性比对分析。2018—2020年期间1 538批化妆品，合格1 521批，总合格率为98.9%。其中，菌落总数合格率99.0%，霉菌和酵母菌合格率99.9%，铜绿假单胞菌合格率99.9%，金黄色葡萄球菌、耐热大肠菌群合格率均为100.0%。微生物学指标合格率逐年上升，但仍有部分品种存在微生物污染超标情况，部分样品检出目前标准规定以外的条件致病菌（如洋葱伯克霍尔德菌复合体），应引起重视。     

菌落PCR技术检测化妆品中金黄色葡萄球菌

利用菌落PCR技术，以金黄色葡萄球菌的特有基因femA为靶基因，选择特异引物．进行扩增，鉴定化妆品中金黄色葡萄球菌。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示，仅在含有金黄色葡萄球菌基因组的样品中得到条带。     

非特殊彩妆类化妆品的微生物检测方法的评价

对非特殊彩妆类化妆品的微生物检测方法进行评价。参考《中国药典》（2010年版）微生物限度的方法,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌为试验菌株进行回收试验,同时增加阳性对照组考察控制菌的检验方法。除彩妆A的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌外,其他所有试验菌株的回收率均大于70%,而且当采用培养基稀释法（1∶100的供试液,1 mL）时,彩妆A的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的回收率均大于70%;大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的阳性生长率为100%,金黄色葡萄球菌阳性生长率为86%。目前的检测方法基本适合非特殊彩妆类化妆品的微生物检测。     

荧光光电法检测化妆品中致病菌的研究

建立了一种利用荧光光电技术快速检测化妆品中致病菌的方法。分别对化妆品中的大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌进行检测。结果显示此方法检测大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的特异性良好,检测菌液和人工污染爽肤水及乳液样品的灵敏度均达到100cfu·mL-1,总检测时间可控制在14 h以内。     

化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检出能力验证结果与分析

为提升对化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检测能力,增强实验室竞争能力,本实验室参加CNAS T0710化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检出能力验证。按照能力验证作业指导书和《化妆品卫生规范》(2007年版)的要求进行增菌,采用16Sr DNA全序列分析、全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)和全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Printer)对分离出的疑似菌进行鉴定。结果显示,样品HZP167-1检出金黄色葡萄球菌,HZP167-2检出铜绿假单胞菌,HZP167-3检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,HZP167-4检出表皮葡萄球菌,HZP167-5未检出。5个样品测试均取得满意的结果。     

123件化妆品微生物检测结果及方法的初步考察

为了了解化妆品卫生质量,按化妆品卫生规范（2007年版）第四部分对123件化妆品进行微生物检测分析,同时以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌为阳性菌,对此检测方法进行了初步的考察。结果显示抽验的化妆品卫生质量较好,合格率为100%。但采用常规方法,有48%的化妆品阳性对照大肠埃希菌未生长,有33%的金黄色葡萄球菌未生长,即使把培养基的量增大至500 mL,大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的未生长率依然有10%和5%,因此应该对化妆品检测方法进行方法学验证。     

关于《化妆品卫生规范》（2007年版）中菌落总数测定方法的探讨

参考《中国药典》微生物检验的验证方法,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌三株菌为验证菌株,分别采用营养琼脂培养基和卵磷脂、吐温80一营养琼脂培养基,对7个化妆品进行了菌落总数检验方法的验证。结果表明,卵磷脂和吐温8U可以作为中和剂部分消除化妆品中防腐剂的抑菌作用。只有2个样品适用于目前《化妆品卫生规范》2007年版的菌落总数检验方法。对于另外5个样品,分别建立了适合于它们的菌落总数检验方法。     

《化妆品安全技术规范》（2015年版）耐热大肠菌群检验方法中目标菌的研究

为研究《化妆品安全技术规范》（2015年版）耐热大肠菌群检验方法的目标菌，收集常见耐热大肠菌群的埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属和克雷伯菌属等4个属的全部54株模式菌株，其中45株为国外引进，采用16S rDNA序列分析和Vitek Compact 2细菌鉴定系统复核鉴定。根据《化妆品安全技术规范》检验方法，将（44.5±0.5）℃双倍乳糖胆盐培养基发酵产酸产气、（36±1）℃伊红美兰琼脂平板培养典型菌落特征和（44.5±0.5）℃靛基质试验阳性设为3项关键判定指标，以1.0×103 CFU·mL-1的起始菌悬液按规范程序进行检验。研究发现，在54株模式菌中，共有4个属的10株菌可在高温下发酵乳糖生长，其中4株为粪源菌，但只有大肠埃希氏菌的3项关键判定指标为阳性。结果表明，在实验样本范围内，上述检验方法的目标菌为具耐热性能的大肠埃希氏菌。     

化妆品中分离的日勾维多细菌源菌生长特性

为建立化妆品中日勾维多细菌源菌的检验方法，利用化妆品中常用的SCDLP培养基、双倍乳糖胆盐培养基和伊红美蓝琼脂培养基（EMB）对4株日勾维多细菌源菌进行生长特性研究。结果显示4株日勾维多细菌源菌在SCDLP培养基中均生长良好；3株菌在双倍乳糖胆盐培养基中不生长，添加KH2PO4后，4株菌均正常生长；菌株2507在EMB培养基中生长缓慢，添加酵母浸出粉后，正常生长。表明培养基的pH和营养成分会影响日勾维多细菌源菌的生长，葡萄糖可作为日勾维多细菌源菌选择性培养基的成分之一。     

微生物试验能力验证结果与分析

为提高实验室微生物检测能力,增强实验室竞争能力,参加了2017年由中检院组织的NIFDC-PT-123(化妆品中金黄色葡萄球菌)和NIFDC-PT-098(乳粉中沙门氏菌)2项检验能力验证。按照各项指导书以及相关标准对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌进行了分离,并对分离出的疑似菌进行了生化鉴定。结果发现,样品TF1230019-18未检出金黄色葡萄球菌,样品TF1230019-70检出金黄色葡萄球菌;样品TF098156-336未检出沙门氏菌,样品TF098156-76检出沙门氏菌。2项4个样品均取得满意的结果。     

致皮肤感染的236株阳性球菌及药敏结果

目的皮肤感染中236株革兰氏阳性球菌对6种抗生素耐药状况。方法菌株鉴定:主要采用ATB Expression鉴定仪鉴定;药敏实验:使用K-B法。结果236株革兰氏阳性球菌中凝固酶阴性葡萄球菌占首位123/236(52.1%),金黄色葡萄球菌次之占103/236(44%),链球菌属占10/236(3.9%)。     

含载金属离子沸石粉抗菌纸的抗菌性能检测

实验旨在对含载金属离子沸石粉抗菌纸的抗菌性能进行检测。采用液体连续稀释法和96孔板检测法检测载金属离子沸石粉对细菌(大肠埃希菌E.coli、金黄色葡萄球菌S.aureus)和真菌(白色念珠菌M.albican、黑根霉R.nigricans、黑曲霉A.niger)的最小抗菌浓度(MIC),以及平板菌落计数法对抗菌纸的抗菌率进行检测(抗菌率计算公式为:X 5=(A-B)/A×100%,其中X 5为抗菌率,A为对照平板菌落,B为样品平板菌落)。载金属离子沸石粉对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的MIC分别达到1×10~(-7)g/m L、1×10~(-5)g/m L、1×10~(-6)g/m L,对根霉和曲霉也具有一定的抑制效果。抗菌纸对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的抗菌率均在48%以上,完全符合《一次性卫生用品卫生标准》中所规定的抗菌率在26%以上的标准。     

进出口化妆品的卫生状况及微生物种群分析

对2009～2011年上海口岸进出境化妆品的卫生状况进行调查,研究化妆品中微生物的种群及其生化共性。采用《化妆品卫生规范》（2007版）及ISO 18415：2007（E）《化妆品-微生物学-指定菌和非指定菌检测》中规定的方法进行检测,结果发现,在31 460份样品中,菌落数含量≥10CFU/g（mL）的样品有68份,检出率为0.22%。其中超过限量标准范围的样品39批,不合格率为0.12%。进出口化妆品中的检出率最高的细菌为需氧芽孢杆菌,占42.4%,其次为假单胞菌属和葡萄球菌属细菌,未检出指定的致病微生物。生化聚类分析显示低营养要求和防腐剂耐受的细菌易在化妆品中定殖并影响产品质量。     

十四烷酸异丙酯在疏水性化妆品微生物检验中的应用

参考《化妆品卫生规范》(2007年版)中疏水性化妆品供试液的制备方法,同时参考《中国药典》(2010年版)微生物限度检查项下非水溶性样品供试液的制备方法制备2份供试液,再以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、黑曲霉和白色念珠菌为实验菌株,对2份供试液进行菌落计数方法学验证,考察十四烷酸异丙酯能否在疏水性化妆品微生物检验中应用。结果表明,十四烷酸异丙酯能溶解分散疏水性化妆品,同时可去除化妆品中的一些抑菌成分,提高实验菌株的回收率和检出率。     

探讨566例血液细菌培养的结果以及耐药性

目的 探讨败血症患者的病原菌的分布以及常见的病原菌耐药的情况。方法 使用半自动细菌仪对566株病原菌鉴定,并且进行药敏试验。结果 分离数占前5位的菌株依次是:表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肺克。结论 菌血症主要是以凝固酶阴性葡萄球菌为主,肠杆菌科比例较高,在临床上需要及时掌握血培养的细菌分布及其对抗菌药物的耐药情况,这对合理使用抗生素具有很重要的意义。     

湿地土壤产纤维素降解菌株的筛选及其性质研究

采用稀释涂平板法从宁夏湿地土壤样品中筛选出一株纤维素降解活力较高的菌株C6-2,经鉴定该菌株为烟曲霉菌(Aspergillus fumigates),对菌株C6-2发酵产酶条件及其所产酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明,菌株C6-2的最适培养温度为30℃,该菌株能在以微晶纤维素或羧甲基纤维素钠或小麦秸秆为唯一碳源的培养基中生长,并可产生具有较好热稳定性的羧甲基纤维素酶、木聚糖酶和葡聚糖酶。