固相合成胸腺素α_1

胸腺素α1是由28个氨基酸残基组成,N端乙酰化的生物活性多肽。采用固相合成方法,以Fmoc氨基酸为原料,经1 氧 3 双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐/1 羧基苯并三氮唑(HBTU/HOBt)缩合,三氟乙酸 乙二硫醇 水脱保护,并从Wang树脂上切割下来,粗肽得率为60%,经RP HPLC纯化,获得纯度在98%以上的目标肽。其ESI MS和氨基酸组分分析结果与理论值相符。     

保护氨基酸Fmoc-His(Trt)-OH的合成方法优化

在肽合成中,为了得到理想的目的肽,首先需要对氨基酸的活性基团加以封闭或保护。叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)是固相合成中首选的-αNH2保护基,由此形成了多肽固相合成方法中的两大类:Boc方法和Fmoc方法。组氨酸(His)是多肽合成中问题最大的氨基酸之一,需要对其α-氨基及侧链上的咪唑环加以保护。由于Fmoc保护基的一些独特优点,如对碱的不稳定性、易检测性等,因此,我们选择Fmoc为其-αNH2保护基。在Fmoc策略合成过程中,三苯甲基(Trt)对缩合以及脱保护条件都很稳定,它可被稀乙酸在稍高的温度条件下,或TFA在室温脱除,因而选用Trt封闭咪唑环上的活性官能团。实验通过中心曲面实验设计方法和正交实验设计方法对His的两步保护反应条件进行优化,使得最终两步反应收率分别都达到80%以上,产品纯度达到95%以上。     

固相片段缩合法制备胸腺素α1的工艺

以固相多肽合成(SPPS)为基础,应用固相片段合成方法制备胸腺素α1。系统考察了不同分段方法、缩合时间、反应溶剂、缩合剂及乙酰化的不同顺序对片段缩合反应的影响。通过试验确定了最佳合成工艺条件:采用三段(1~10、11~18和19~28)分别合成方式,以V(DMF)/V(DCM)等于3.0的混合溶液为反应溶剂,HATU为缩合剂,N末端氨基先乙酰化后进行片段间缩合的途径进行合成,多肽片段间缩合反应时间采用20.0 h。该条件下合成的胸腺素α1,粗品收率达64.3%,纯度达61.1%,与逐步合成法相比较,产物纯度提高了29.9%。     

扶素康的固相化学合成

研究了36肽扶素康的9-芴甲氧羰基(Fmoc)法固相化学合成,包括Fmoc固相逐步化学合成和Fmoc固相片断缩合化学合成。在片段缩合中,研究了多肽片断的分段策略、片断缩合溶剂、片断缩合剂对片断缩合法合成扶素康质量的影响,确立了优化的片段缩合工艺条件为：将扶素康按残基1～10、11～20、21～25、26～36分作4段;以王树脂为固相载体;HATU /HOAt/DIEA为缩合剂(4倍过量);DMF/DCM(1∶1)为反应溶剂;每步加入的全保护肽段为1.5倍过量;缩合及脱保护完成后以DCM为洗涤溶剂洗涤5次,进行固相片段缩合反应。该条件下合成的扶素康,粗品收率达67.31%,按标准曲线定量分析其纯度达38.75%。     

阿尔茨海默β-淀粉样肽核心片段衍生物的合成

由苯丙氨酸(F)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)和赖氨酸(K)组成的KLVFF五肽序列是阿尔茨海默β-淀粉样肽自聚集形成纳米纤维化结构的核心片段,合成该肽段及对其分子侧链和主链结构进行修饰对研究阿尔茨海默病发病机制具有重要意义。以Fmoc-保护基缬氨酸(Fmoc V-OH)和Fmoc-保护基苯丙氨酸(Fmoc F-OH)为原料,N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)和二环己基碳二亚胺(DCC)为缩合剂,采用液相合成法合成了Fmoc基保护的二肽、三肽模块Fmoc FF-OH和Fmoc VLK(Boc)-OH,模块在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中与哌啶反应脱保护基后得到二肽、三肽NH2-FF-OH和NH2-VLK(Boc)-OH。Fmoc基保护的模块再与二肽、三肽组合、缩合及脱保护反应后,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化得到骨架中赖氨酸(K)的侧基由Boc保护的阿尔茨海默β-淀粉样肽核心片段肽H2N-VLK(Boc)FF-OH及H2N-FFVLK(Boc)-OH,并对目标五肽进行了核磁和质谱表征。     

环七肽PT-141的固相合成工艺研究

PT-141可有望作为治疗性功能障碍的环七肽药物。本文研究了固相合成法合成PT-141的路线及工艺,氨基酸的α-氨基采用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护,以HBTU/HOBT/NMM为肽合成试剂,用高压制备液相色谱对粗品进行纯化,用质谱仪对合成的多肽进行结构鉴定。多肽合成的收率可达58%,纯化后可得纯度为98%的目标环七肽。与文献方法相比,该法简便、环境友好,并大幅降低了合成成本,适合产业化生产。     

液相色谱法分离纯化固相合成的胸腺素α1

本文为以Fmoc(N^α－芴甲氧羰基）固相合成法制备的胸腺素α1粗品提出了一条实验室规模的液色谱法纯化路线，共分两步；第一步采用DEAE Sepharose Fast Flow填料进行了离子交换层析操作，分离除去粗品中的大部分杂质；第二步用制备型反相离效液相色谱（用C18色谱柱）进行最后的纯化。终产物纯度可达95％，生物活性符合实验指标。本文还对分离纯化路线中所用的操作条件进行了研究和优选。     

环六肽Desotamide B的合成条件优化及其抑菌活性分析

在Fmoc固相合成基础上,通过对直链肽上氨基酸的活化程度和缩合试剂种类的选择优化,将直链肽的合成纯度提高到86.3%,较优化前提高了28%,并省去直链肽的分离纯化步骤。对于带侧链保护基的环肽,采用凝胶柱替代高效液相色谱进行分离,减少产物损失,将环肽总产率提高到55.6%。利用1HNMR、13CNMR和HRMS对其结构进行表征。以万古霉素为对照,对合成的Desotamide B的抗菌活性进行测试,结果表明,该化合物对革兰氏阳性菌有着较好的抑制作用,最小抑菌浓度均为16 μg/mL。     

应用液相色谱法分离纯化固相化学合成胸腺素α1

引　言胸腺素α1(Tα1)是由 2 8个氨基酸组成的小分子多肽[1] ,它能够促进淋巴T细胞分化、成熟 ,增强机体的免疫功能 ,临床上主要用于治疗乙肝等病毒性肝炎 ,也可作为艾滋病和恶性肿瘤的辅助药物[2～ 4 ] .目前 ,我国所使用的胸腺素α1主要依靠进口 ,其昂贵的价格限制了胸腺素α1在我国的使用 .因此 ,依靠自己的技术生产相对便宜的胸腺素α1,实现胸腺素α1的国产化 ,具有重大的理论价值和应用价值多肽化学合成技术目前已较为成熟[5,6 ] ,本研究室应用DIC/Fmoc固相化学合成技术 ,已得出一条简便、高效的胸腺素α1合成路线 .但是 ,化学合成的多肽往往含有大量的杂质 ,令人棘手的是小部分杂质与目标物在分子结构和化学性质上十分相　似 ,给多肽的分离纯化带来了困难 .液相层析法在多肽的分离纯化中显示出优越的分离能力[7～ 9] ,对于固相合成的胸腺素α1粗品 ,本实验综合应用离子交换制备色谱和反相高效液相制备色谱在选择性上的差异成功地分离纯化出高质量的胸腺素α1.分离时先采用离子交换制备色谱除去粗品中的大部分杂质 ,再用反相高效液相制备色谱作进一步的纯化 ,所得的样品通过分析型反相高效液相色谱分析...     

9-芴甲氧羰基氨基保护试剂的合成与分析

研究了9 芴甲基氯甲酸酯(Fmoc Cl)、9 芴甲基叠氮甲酸酯(Fmoc N3)和9 芴甲基琥珀酰亚胺碳酸酯(Fmoc OSu)这3种氨基保护试剂的合成方法。用碳酸二(三氯甲酯)代替光气与芴甲醇反应得到Fmoc Cl;Fmoc Cl可分别与叠氮化钠及N 羟基琥珀酰亚胺反应得到9 芴甲基叠氮甲酸酯(Fmoc N3)以及9 芴甲基琥珀酰亚胺碳酸酯(Fmoc OSu),收率分别为87 9%和86 9%。上述Fmoc保护试剂在碱性条件下分别与甘氨酸反应进行氨基保护得到产品Fmoc 甘氨酸,收率分别为83 1%、73 3%及93 9%,用毛细管电泳仪分析其摩尔分数分别为97 7%、99 5%及大于99 9%,结果表明,Fmoc OSu是甘氨酸Fmoc氨基保护的最佳试剂。     

神经降压素类似物的固相合成

以Wang Resin为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,经DIC/HOBT缩合,三氟乙酸(TFA)/间甲酚/乙二硫醇(EDT)裂解体系脱除保护基,经RP-HPLC纯化后得到了纯度为98%以上的神经降压素类似物,总收率为39.99%。     

神经降压素类似物的固相合成

以Wang Resin为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,经DIC/HOBT缩合,三氟乙酸(TFA)/间甲酚/乙二硫醇(EDT)裂解体系脱除保护基,经RP-HPLC纯化后得到了纯度为98%以上的神经降压素类似物,总收率为39.99%。     

微波辐射法合成α-紫罗兰酮的研究

以柠檬醛和丙酮为原料,在微波辐射条件下,经缩合反应合成了假性紫罗兰酮,再经环化反应合成了α-紫罗兰酮。重点探讨了催化剂的种类和用量、反应物配比、微波辐射时间和功率等因素分别对缩合和环化反应的影响,确定了在微波辐射下合成α-紫罗兰酮的工艺条件:缩合反应以KF/Al2O3为催化剂(与柠檬醛的质量比为1∶1),n(柠檬醛)∶n(丙酮)=1∶10,90 W微波辐射12 min;环化反应以固体硫酸氢钠作催化剂,其用量为0.287 g,60 W微波辐射5 min。与无微波辐射条件的合成方法相比,此法大大缩短了反应时间,简化了制备工艺流程,而且假性紫罗兰酮产率由92.6%提高到98.3%,α-紫罗兰酮的产率由60.0%提高到70.1%。     

牛乳κ-酪蛋白活性多肽及其改造肽的合成和生物活性

为获得抗凝血活性更强的多肽,对牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)的十一肽(f106-116)进行设计合成并改造,采用Fmoc固相合成策略,以Wang树脂为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,HOBT/DIC为缩合剂,TFA/苯甲硫醚/EDT/苯甲醚裂解体系脱除保护基,经RP-HPLC纯化后得到了纯度95%的9种多肽,经ESI-MS确证其结构。将所有的合成肽进行凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)以及凝血酶原时间(PT)活性测定,结果表明,各改造肽抗凝活性皆低于十一肽,增强牛乳κ-CN的十一肽片段的疏水性,其TT活性增强。     

西仑吉肽的固相合成

采用Fmoc固相合成法,选用2-氯三苯甲基氯树脂作为固相载,HBTU/HOBt和HATU/HOBt为缩合剂,合成全保护线性肽.以V(DCM)∶V(THF)＝ 1∶1为溶剂,HATU/HOBt为缩合剂,合成全保护环肽.最后脱除保护基得终产物西仑吉肽.     

胸腺肽纯化工艺的改进

目的 建立高效、快速、简便的纯化胸腺肽方法,以便提高胸腺素α1含量及活性,减少过敏反应。方法 采用 DEAE Sepharose FF、CM-Sephrose两种串联柱层析纯化。结果 纯化后的胸腺肽电泳结果出现明显的胸腺素α1带、玫瑰花结率可达33％(绝对值)以上,相对分子质量明显在3 100左右,无过敏反应。结论 建立了高效、规模化的胸腺肽纯化方法,提高了胸腺肽质量。     

甘氨酸二肽合成中缩合剂的选择

甘氨酸二肽是一分子甘氨酸的α-羧基和另一分子甘氨酸的α-氨基脱水缩合形成的酰胺键(即-CO-NH-)组成的蛋白质片段或物质。其结构比蛋白质简单,相对分子质量小,在人体内具有生物活性,可以调节人体的各项机能,因此被更多地应用于食品、药物、组织工程材料等不同的领域。以甘氨酸为研究对象,用二碳酸二叔丁酯(Boc_2O)保护甘氨酸的α-氨基,分别采用N,N′-二环已基碳二亚胺(DCC),2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)三种缩合剂活化甘氨酸的羧基形成活泼酯,再与甘氨酸缩合形成含有两个甘氨酸的小分子肽。通过对三种缩合方法的对比和结果分析,活化试剂对小分子肽的合成影响显著;甘氨酸二肽(Boc-G1y-Gly-OH)合成的最佳反应条件为:以BOP为缩合剂,乙腈水溶液为反应体系,生成活泼酯的反应温度为45℃,小分子肽的产率为78.2%。合成的Boc-G1y-G1y-OH二肽经红外光谱、质谱等袁征,结构得到验证,为氨基酸活泼酯的合成及小分子多肽液相合成提供了实验依据和理论参考。     

α-氯代脂肪酸水热法中性水解合成α-羟基脂肪酸

开发了一条从天然脂肪酸合成α-羟基脂肪酸(α-HFA)的高产率、低污染且低成本的合成路线,即从天然脂肪酸制备α-氯代脂肪酸(α-CFA),再以α-CFA为原料通过水热法中性水解合成α-HFA。用GC-MS和IR鉴定了产物的结构,ESI-MS表征了产物的相对分子质量(以下简称分子量),纯化后α-HFA纯度达99%(GC)以上。探讨了水热中性水解反应中原料配比、反应加水量、反应温度、反应时间等因素对该水热工艺的影响,结果表明,当n(CaCO3)∶n(α-CFA)=1.05∶1,m(H2O)∶m(α-CFA)=2∶1,C12～C18的α-氯代天然脂肪酸在155℃水热条件下反应4 h后,α-HFA同系物的产率均高达98%～99%。     

1-叔丁基氧羰基-2'-氧-螺-[氮杂环丁烷-3,3'-二氢吲哚]的合成

以邻溴苯胺和1-叔丁基氧羰基-氮杂环丁烷-3-甲酸为原料,经酸胺缩合反应、加保护基、α-芳基化、脱保护基四步反应,以总收率50.5%合成螺吲哚结构1-叔丁基氧羰基-2'-氧-螺-[氮杂环丁烷-3,3'-二氢吲哚]。该方法操作简便且具有通用性,可用来合成吲哚螺哌啶、吲哚螺四氢吡咯等化合物。     

1-叔丁基氧羰基-2＇-氧-螺-[氮杂环丁烷-3,3＇-二氢吲哚]的合成

以邻溴苯胺和1-叔丁基氧羰基-氮杂环丁烷-3-甲酸为原料,经酸胺缩合反应、加保护基、α-芳基化、脱保护基四步反应,以总收率50.5%合成螺吲哚结构1-叔丁基氧羰基-2＇-氧-螺-[氮杂环丁烷-3,3＇-二氢吲哚]。该方法操作简便且具有通用性,可用来合成吲哚螺哌啶、吲哚螺四氢吡咯等化合物。