热休克转录因子2通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进克罗恩病炎症反应的作用机制研究

目的:研究热休克转录因子2（HSF2）通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应的作用机制。方法:2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）构建小鼠克罗恩病模型,将小鼠分为正常组,模型组,对照组,实验组。对照组采用高迁移率族蛋白1（HMGB1）抗体处理阻断HMGB1信号,对照组和实验组均采用重组HSF2干预。观察小鼠一般生活状况（包括：生存状态、体质量状态、大便性状、进食饮水状态、毛发光泽度、精神状态和活动状态）,小鼠疾病活动指数（DAI）评估小鼠疾病情况,苏木精-伊红（HE）染色检测小鼠肠组织病理改变,免疫组织化学染色（IHC）检测小鼠肠组织中p-65的表达,酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠结肠组织中炎症因子白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）的水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中HMGB1、Toll样受体4（TLR4）、NF-κB（p-P65)、髓样分化因子（MyD88）的表达水平。结果:TNBS成功诱导小鼠克罗恩病,实验组小鼠一般生活状态较差,且DAI评分显著高于对照组、模型组,具有统计学意义（P<0.05）。HE染色显示实验组小鼠结肠黏膜糜烂、水肿、炎症反应程度高于模型组和对照组。实验组小鼠结肠组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。实验组组织中HMGB1、TLR4、NF-κB（p-P65)、MyD88的表达水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:HSF2可以通过激活HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应。     

浅谈Hsn70－1黄铜焊管焊接热裂纹产生的原因及其防止

针对目前国内基本尚处于空白的冷凝器Ｈｓｎ７０－１黄铜焊管，对材料的可焊性，焊接热裂纹产生的原因进行了分析，并提出了防止措施。同时，以实例阐述了在三炬ＴＩＧ焊接过程中。合理地这择匹配每个焊炬的参数，是提高焊缝质量的一个有效途径。     

基于CS-GMC(1,N)的数控机床全新热误差建模优化方法

为降低机床热误差对数控加工精度的影响,提高灰色模型GMC(1,N)的预测精度,将布谷鸟搜索（CS）算法引入GMC(1,N)灰色模型中,用于优化灰色模型GMC(1,N)的生成系数,构建了基于CS-GMC(1,N)的数控机床热误差预测模型。以小型三轴立式数控铣床为研究对象进行了主轴热误差实验,热误差预测性能分析结果表明：CS-GMC(1,N)模型的预测精度高于PSO-GMC(1,N)模型,为机床主轴热误差建模及后续热误差补偿提供了参考。     

甲基苯丙胺依赖对大鼠纹状体RGS4和mGluR5受体信号传导的影响

目的:研究甲基苯丙胺依赖不同时间对大鼠脑纹状体内G蛋白信号调节因子4(regulator of G-protein signaling 4，RGS4 )和代谢型谷氨酸受体5 (metabotropic receptor 5,mGluR5)信号传导的影响。方法:建立大鼠甲基苯丙胺（methamphetamine,METH）依赖一周组（1W）、两周组(2W)模型，Western blot技术检测大鼠纹状体内RGS4、mGluR5、G蛋白α亚单位蛋白Q(Gαq)、磷脂酶C-β1(phospholipase C-β,PLCβ1)表达水平。 结果:METH依赖1W、2W组伴药箱停留时间比生理盐水对照组增加，提示METH依赖模型建成。模型组大鼠纹状体内RGS4蛋白表达水平较生理盐水对照组相比明显下调，而模型组mGluR5蛋白和Gαq蛋白、PLCβ1蛋白表达与生理盐水对照组比较均有不同程度上调，且2W组较1W组改变更明显。结论:METH给药可能导致大鼠脑纹状体内RGS4表达下调，mGluR5表达上调，还可使与mGluR5偶联的Gαq、PLCβ1表达均出现不同程度上调。且METH依赖时间越长，RGS4、mGluR5、 Gαq、PLCβ1的表达水平变化越显著。     

腺苷A1受体拮抗剂对异丙酚诱导脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的: 观察异丙酚预处理对局灶性缺血再灌注损伤大鼠脑皮质半暗带区细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达水平的影响,并探讨腺苷A1受体拮抗剂对异丙酚抗凋亡作用的影响。方法: 通过阻塞大脑中动脉建立局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO）,异丙酚预处理采用经股静脉持续泵注30 min至缺血即刻。SD大鼠24只随机分为4组：假手术组（S组）、模型组（M组）、模型+异丙酚组（P组）、模型+异丙酚+腺苷A1受体拮抗剂组（D组)。拮抗剂组在异丙酚输注前30 min腹腔注射,1 mg/kg。再灌注24 h 后,观察损伤后大脑皮质半暗带区组织形态学（HE染色）、Bcl-2蛋白表达量,凋亡细胞数（TUNEL法）。结果: P组与M组比较,神经元损害明显减轻;而D组与P组比较神经元明显出现核固缩或溶解,细胞水肿,差异具有统计学意义（P<0.01）;P组BCL-2蛋白表达量高于M组(P<0.01),而D组BCL-2蛋白表达量明显较P组减少,差异具有统计学意义(P<0.01);P组凋亡细胞数明显少于M组(P<0.01）,而D组与P组比较,凋亡细胞数明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01）。结论: 异丙酚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质半暗带区细胞具有抗凋亡作用,机制可能与腺苷A1受体有关。     

多巴胺D1受体Ala229Thr多态性对受体信号转导功能的影响

目的: 构建表达不同基因型的人多巴胺D1受体（DRD1）真核细胞表达载体,明确DRD1Ala229Thr多态性对受体信号转导功能的影响。方法: 从人基因组经PCR扩增DRD1基因编码区全长,将纯化后的PCR产物与pMD19 T载体进行T连接,得到DRD1229Ala（野生型）重组克隆载体。在野生型重组克隆载体的基础上,应用定点突变方法构建229Thr（突变型）重组克隆载体。用Kpn I和EcoR I双酶切野生型和突变型重组克隆载体,将酶切后得到的目的片段纯化后与经相同双酶切的pcDNA3.1(+)表达载体连接,即得到野生型和突变型DRD1pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体。将pcDNA3.1(+)空载体、野生型和突变型DRD1pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体瞬时转染入COS7细胞,用cAMP ELISA试剂盒分别检测forskolin和不同浓度多巴胺及(±) SKF38393处理下细胞内基础cAMP的水平及激动剂诱导的cAMP的水平。 结果: 经双酶切及测序证实野生型和突变型DRD1pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体构建正确。在forskolin处理的情况下,空载体组和阴性对照组细胞内cAMP的水平分别为(0.40±0.14)和(0.78±0.24) pmol/well,两者之间并没有显著差异（P=0.082）,野生型组和突变型组细胞内cAMP的水平分别为(2.06±0.35)和(1.37±0.12) pmol/well,野生型组细胞内cAMP水平显著高于空载体组（P<0.001）和突变型组（P=0.007）;在多巴胺及SKF38393处理的情况下,细胞内cAMP的水平均呈浓度依赖性升高,但突变型组细胞内的cAMP水平均显著低于野生型组(P<0.001)。多巴胺的EC50值在野生型组为625 nmol/L,突变型组为9 612 nmol/L,比野生型组增加15倍;SKF38393的EC50值在野生型组为421 nmol/L,突变型组为417 nmol/L,两者之间不存在明显差异。结论: 本研究成功构建了野生型和突变型DRD1pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体;DRD1Ala229Thr多态性影响受体的激活和信号转导功能,与野生型相比,229Thr型受体信号转导功能显著降低。     

胰岛素受体底物1低表达促进头颈部鳞状细胞癌的侵袭转移

目的: 研究胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1, IRS-1)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)侵袭转移中的作用及其可能的机制。 方法: 应用定量RT-PCR法检测HNSCC患者淋巴结转移灶和原发灶癌组织中IRS-1 mRNA的表达,以及不同转移能力头颈部肿瘤细胞株上IRS-1 mRNA的表达。用Taqman探针法检测miR-9及U6的相对表达量。利用小干扰RNA技术阻抑IRS-1表达,肿瘤细胞侵袭实验检测IRS-1干扰前后对细胞侵袭能力的影响。用定量RT-PCR和Western blot检测上皮-间叶转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的标志物E-cadherin及vimentin mRNA和蛋白的表达;用SRB法检测细胞存活率。 结果: (1)HNSCC患者淋巴结转移灶中IRS-1 mRNA的表达低于原发灶(P<0.05);高转移性HNSCC细胞株中IRS-1 mRNA的表达低于低转移性细胞株(P<0.05)。(2)下调IRS-1表达,肿瘤细胞的侵袭能力增强,上皮-间叶转化标志物E-cadherin表达下降,同时伴有miR-9表达的升高。 结论: IRS-1低表达可能通过上皮-间叶转化和上调miR-9而增强细胞的侵袭能力,促进HNSCC的转移。     

人参皂苷Rg1对lactacystin诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的: 探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)对lactacystin所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制。方法: 实验分正常对照组、lactacystin组、lactacystin和Rg1联合处理组(0.1,1,10 μmol/L),分别用CCK-8检测细胞活力,免疫荧光法、流式细胞术测定法检测二价金属离子转运蛋白1（divalent metal transporter 1,DMT1）表达情况,calcein-AM 荧光检测细胞的摄铁能力,JC-1 染色检测细胞线粒体膜电位,荧光探针carboxy-H2DCFDA检测胞内氧化应激水平。结果: 与lactacystin组相比,lactacystin和Rg1联合处理组的细胞活力显著增加,细胞DMT1表达减少,细胞摄铁能力下降,线粒体膜电位增加,胞内氧化应激水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论: Rgl对lactacystin诱导损伤的SH-SY5Y细胞具有一定的神经保护作用,其作用机制可能与下调DMT1介导的细胞摄铁能力,稳定线粒体膜电位,降低氧化应激反应有关。     

醒脑静注射液对脑梗死缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的: 观察醒脑静注射液对脑梗死患者的疗效及对缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-lα)水平的影响。方法: 68例脑梗死患者随机分为治疗组35例和对照组33例,对照组给予常规治疗,治疗组在对照组治疗的基础上给予醒脑静注射液,疗程均为10 d。治疗前,治疗后3 d、10 d分别进行神经功能缺损评分（NIHSS）及检测血清HIF-lα水平。结果: 治疗后3 d、10 d,治疗组的NIHSS评分较治疗前下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,治疗组下降更明显,两组差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后3 d、10 d两组血清HIF-lα水平均较治疗前下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与治疗组比较,对照组下降更明显,两组差异具有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析显示HIF-lα水平与NIHSS减少值呈正相关（P<0.05）。结论: 醒脑静注射液可通过上调血清HIF-lα表达水平保护、治疗缺血脑组织。     

内质网应激通过C/EBP同源蛋白调控死亡受体5对肝星状细胞凋亡的影响

目的:研究内质网应激（ERS）与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对肝星状细胞凋亡的影响以及在凋亡过程中二者相互关系。方法:以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,使用毒胡萝卜素作为内质网应激诱导剂,熊去氧胆酸作为内质网应激抑制剂,SP600125作为c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂,将HSC-T6分成正常组、DMSO组、TRAIL组、毒胡萝卜素组、熊去氧胆酸组、siCHOP组及SP600125组。利用流式法检测毒胡萝卜素诱导HSC-T6凋亡程度;应用小分子RNA干扰技术沉默CHOP基因;免疫组化法检测Caspase-8表达;RT-PCR与Western blot法检测ERS标志性蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体死亡受体5（DR5）的表达。结果:随着毒胡萝卜素浓度增加(1 μmol/L,2 μmol/L,4 μmol/L,8 μmol/L,16 μmol/L),可诱导HSC-T6发生不同程度的凋亡。RT-PCR与Western blot结果表明ERS标志性蛋白CHOP可诱导TRAIL受体DR5及Caspase-8表达上调;同时,siCHOP及JNK抑制剂SP600125的应用,均可使HSC细胞中DR5及下游Caspase-8的表达随之减少。结论:CHOP和JNK可能是调节DR5表达的潜在因子,两者在诱导肝星状细胞凋亡的过程中发挥着重要的作用。     

不同胰高血糖素样肽-1受体激动剂对骨代谢影响的研究进展

骨质疏松是2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus, T2DM）常见并发症之一,近期研究表明T2DM治疗药物胰高血糖素样肽-1受体激动剂（glucagon-like peptide-1 receptor agonists, GLP-1RAs）可以促进骨形成抑制骨吸收,提示这类降糖药物可能使合并骨质疏松和高骨折风险的T2DM患者获益,但其潜在机制尚不完全清楚,并且不同的GLP-1RAs表现出不同的骨骼效应及分子机制。本文将对几种不同GLP-1RAs对骨代谢的影响进行综述。