低浓度牛血清培养Vero细胞的研究

用人血浆组分IV中某些成分配制的低浓度牛血清（2％）培养液（称Ⅱ号培养液），培养Vero细胞的效果与美国GIBCO公司的低浓度牛血清培养基添加物Gms－A类似；用所培养的Vero细胞感染狂犬病毒，其病毒滴度均大于6．0logLD50／ml）；而残余牛血清含量从50～100μg／ml降至5～10μg／ml。     

应用细胞倍增时间测定新生牛血清的质量

应用细胞倍增时间测定24批新生牛血清的促细胞生长效应,从中优选出5批,在用于杂交瘤细胞的研究工作中均获得满意的结果。其操作方法简便,实验数据准确可靠。为新生牛血清的质量控制打下了基础。     

~(60)Co γ-射线辐照新生牛血清对细胞培养的影响

目的研究新生牛血清(newborn calf serum,NBCS)经~(60)Coγ-射线辐照后对细胞培养的影响。方法用20 k Gy~(60)Coγ-射线辐照NBCS后,培养Vero和CHO-K1细胞,通过连续传代培养及绘制低密度生长曲线,比较辐照前后的促细胞生长效果。结果 Vero细胞的传代培养结果与未辐照前接近,生长曲线峰值略低于未辐照组,辐照前后细胞的最大增殖密度为73.38×10~4和65.33×10~4个/ml(P0.05),倍增时间为24.38和25.33 h(P0.05);CHOK1细胞传代培养无未辐照组致密,生长曲线较未辐照组平缓,辐照前后细胞的最大增殖密度为80.03×10~4和79.3×10~4个/ml(P0.05),倍增时间为19.73和23.62 h(P0.05)。结论 NBCS经20 k Gy ~(60)Coγ-射线辐照后,对Vero细胞影响不明显,使CHO-K1细胞生长速度变慢。     

灭能与未灭能新生牛血清培养细胞效果的比较

目的比较灭能与未灭能新生牛血清培养Vero细胞和MRC-5细胞的效果,为细胞培养的相关研究和生产提供参考。方法分别采用照射剂量为8和16 k Gy的60Coγ-射线及56℃30 min加热灭能新生牛血清,用两种方式灭能的血清及未灭能的新生牛血清培养Vero细胞和MRC-5细胞,显微镜观察细胞的生长情况,计数并计算细胞倍增时间及存活时间。结果未灭能新生牛血清培养的两种细胞增殖更多更快速;热灭能的新生牛血清培养的两种细胞的增殖速度和数量明显低于γ-射线照射灭能及未灭能血清培养的细胞。结论未灭能的新生牛血清比灭能后的血清培养Vero细胞和MRC-5细胞的效果好,其促细胞生长增殖效果最佳。     

牛血清中牛腹泻病毒牛肾细胞直接病变检测方法的建立

目的建立牛血清中牛腹泻病毒(BVDV)的牛肾细胞直接病变检测法。方法将样品接种至牛肾(CK)细胞上,通过观察细胞病变,判定样品是否污染BVDV。结合病毒增殖曲线及不同培养时间的检出率,确定最佳判定时间,并对检测方法进行验证及应用。结果该方法的最佳判定时间为10d;测定限度为100～240CCID50/ml;样品冻融次数及不同批次的牛血清样品对试验结果影响较大;应用该方法检测134批牛血清样品,BVDV污染率约为7.5%。结论已建立牛血清中牛腹泻病毒牛肾细胞直接病变检测法。     

牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法的建立及验证

目的建立牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法,并进行验证。方法建立直接免疫荧光法检测牛血清中牛病毒,对细胞接种浓度和血清浓度、病毒接种量、荧光抗体浓度、染色温度及时间进行优化;对优化的方法进行重复性、特异性、灵敏度验证,并与细胞培养法的检测结果进行比较。结果优化的试验条件为:Vero和BT细胞的接种浓度分别为0.5×105和1.0×105个/ml,血清浓度为5%,病毒接种量为100~300 CCID50,荧光抗体1∶10稀释,4℃染色12 h以上,但不超过24 h。2名实验人员按建立的方对3批牛血清分别进行3次检测,均未检出6种牛病毒;每种病毒仅在相应抗体进行染色时出现荧光;该方法检测6种牛病毒的灵敏度较高。分别采用细胞培养法和直接免疫荧光法检测15批新生牛血清和5批胎牛血清,结果均未检出牛病毒。结论建立的牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法重复性好,特异性强,灵敏度高,操作简便,与细胞培养法的检测结果无差异,可应用于牛血清中牛病毒的检测。     

检测牛血清中污染大肠杆菌噬菌体方法的建立

用大肠杆菌标准噬菌体株选择确定的大肠杆菌44451和44369作为宿主菌，建立了检测牛血清污染大肠杆菌噬菌体的直接噬菌斑法和增殖法。此法操作简便、灵敏度高。     

新生牛血清中微生物的电镜检测及结果分析

目的　探索利用电镜快速、有效的进行新生牛血清外源因子检测。方法　利用膜表面富积法制备新生牛血清样品 ,在电镜下观察样品 ,并与其它检测方法比较。结果　利用电镜检查 ,实验组的外源因子检测阳性率远高于对照组 ;所检市售国内外品牌新生牛血清均有不同程度的外源因子存在。结论　电镜法检测新生小牛血清是一种快速、广谱的外源因子检测方法 ,并具有检测精度高的优点 ;它为新生牛血清的质量监测提供了一种新的参比方法     

国产牛血清的现状

本文概述了牛血清中的生长因子、激素、贴壁和扩展因子、结合蛋白质等 8种主要成分在细胞培养中的重要作用 ;全面介绍了自 2 0 0 0年版《中国生物制品规程》颁布生物制品用牛血清质量标准以来 ,国产牛血清的现状。 4年间 ,牛血清在质量管理GMP化 ,生产模式产业化 ,加工工艺现代化 ,产品开发多元化 ,人员培训系统化等方面取得了长足的进步 ;目前与国外产品的差距主要表现在现行质量标准有局限性 ,生产规模小 ,技术、设备、工艺落后 ,品种单一 ,在生产用牛的溯源管理上不完善等。了解这些 ,对进一步推动国产牛血清产业的发展大有益处     

细胞培养用牛血清现状与进展

牛血清用于细胞培养已超过50年,虽然其污染外源因子的风险不能完全排除,但是至今许多贴壁细胞系和原代细胞还需采用添加牛血清的培养基进行大规模培养。本文综述了牛血清的基本营养成分、生长因子和其他功能性成分以及牛血清中最常见的外源病毒及应检测的病毒种类,并比较屠宰法和供体牛法获取血清的优缺点。     

反胶束萃取牛血清白蛋白

研究了ＣＴＡＢ－正己醇－正辛烷反胶束溶液萃取ＢＳＡ的性能。考察了水相的ｐＨ值与离子强度和种类、有机相中表面活性剂浓度和助溶剂浓度等因素对萃取行为的影响，并从反胶束的微观结构予以解释。     

应用定量动态浊度法检测牛血清中的内毒素

目的　应用定量动态浊度法检测牛血清中细菌内毒素。方法　应用BET 32B型细菌内毒素测定仪 ,应用定量动态浊度法检测牛血清中内毒素含量。同时与鲎试剂凝胶法进行比较。结果　采用该法可定量检测牛血清中内毒素含量 ,变异系数≤ 10 % ,快速简捷 ,一次检测样品多 ,稳定性好 ,精确度、灵敏度高 ,可以在 0 0 0 1～ 10EU/ml的范围内定量 ,与鲎试剂凝胶法测定结果比较 ,符合率达 96 2 %。结论　应用BET 32B型细菌内毒素测定仪 ,采用定量动态浊度法检测牛血清中内毒素的方法准确性好 ,性能稳定 ,具有广阔的应用前景。     

双氟磺草胺与牛血清白蛋白相互作用的研究

1 引言 蛋白质是生命现象的物质基础。而血清白蛋白作为载体蛋白，对脂肪酸、氨基酸、金属离子及药物等在血浆中的传输、分配及新陈代谢等起着重要作用，因此研究各种试剂与血清蛋白之间的相互作用已成为化学、生命科学和临床医学等领域的热点。HSA是由585个氨基酸残基组成的单肽链蛋白质，分子量约为66500。     

进口胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒的分离及鉴定

目的对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离及鉴定。方法Trizol法提取待检胎牛血清中的病毒RNA后,利用套式RT-PCR扩增BVDV,并利用生物信息学Lasergene 7.0软件对其核苷酸序列进行同源性分析。取生长状态良好的MDBK细胞,按1%比例加入待检胎牛血清,收获F1代BVDV FBS2014,反复冻融3次后,再次接种MDBK细胞,连传4代。采用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光试验及抗原捕获ELISA法对收获的病毒进行鉴定。结果扩增产物大小均与预期相符,与已报道的BVDV-1 NADL株的核苷酸序列一致性为92.2%,属于BVDV-1a亚型毒株;分离的病毒经鉴定为BVDV,命名为BVDV FBS2014,病毒基因拷贝数为10~4拷贝/μl,感染MDBK细胞可见特异性绿色荧光;各代次的病毒收获液中BVDV的基因拷贝数均大于10~(4.92)拷贝/μl,BVDV抗原检测结果均为阳性。结论购买的进口胎牛血清中成功分离到可致MDBK细胞产生细胞病变的病毒,经鉴定所分离的病毒为BVDV,命名为FBS2014株,该病毒属于BVDV-1a亚型毒株。     

皮革中禁用偶氮染料的快速筛选方法

建立了用于皮革中禁用偶氮染料快速筛选的气相色谱-质谱法(GC-MS)测定方法。该方法将偶氮染料分解后,以乙酸乙酯为溶剂进行振荡萃取,萃取液经净化后进行GC-MS测定,内标法定量。对实验中的萃取溶剂,萃取时间进行选择优化。试验结果表明:各种芳香胺的检出限值均小于5 mg·kg-1,大部分芳香胺加标回收率范围在80%～100%,相对标准偏差范围在3%～5%。该方法能够缩短30%以上的前处理时间,并且可节省40%的试剂和耗材费用。     

乳糖酰胺季铵盐与牛血清白蛋白的相互作用

文章采用荧光猝灭和三维荧光光谱法研究了N,N-二甲基-N[3-(乳糖酰胺基)]丙基-N-十二烷基溴化铵(C12DLPB)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果表明:当作用时间为15 min,c(NaCl)=0.02mol/L,pH=6.5时,为C12DLPB与BSA相互作用的适宜条件;运用Stern-Volmer方程...     

Vero细胞培养流感病毒的低血清培养基的筛选

目的筛选Vero细胞生长的最适低血清培养基,用于流感病毒的细胞培养。方法分别以MEM、M199、DMEM/F12、DMEM/F12与MEM混合物(1∶1)为基础培养基,添加5%、2%、1%的小牛血清传代培养Vero细胞,通过细胞形态观察、细胞计数及MTT法检测细胞的增殖活力筛选最适基础培养基;将流感病毒接种低血清适应的Vero细胞,检测病毒收获液的血凝效价及残留BSA含量,电子显微镜观察病毒形态。结果以DMEM/F12与MEM混合物(1∶1)为基础培养基,添加2%小牛血清培养的Vero细胞长势良好,细胞数量较多,增殖活力最强。低血清适应的Vero细胞培养的流感病毒血凝效价最高可达1∶512,平均值为1∶384;病毒液中的残留BSA含量约为正常血清培养条件下的1/18;病毒形态完整。结论成功筛选出Vero细胞培养流感病毒的低血清培养基,为更具生物安全性的流感疫苗的研发奠定了基础。     

同步荧光光谱法研究叶酸与牛血清白蛋白的相互作用

采用紫外光谱法和同步荧光光谱法分析研究了叶酸与牛血清白蛋白的相互作用,由实验结果表明:叶酸(FA)与牛血清白蛋白(BSA)之间具有较强的结合作用而导致荧光猝灭;利用实验数据结合Stern-Volmer方程和热力学方程求出了热力学参数、结合常数及结合位点数。此外,研究了常见金属离子对二者结合有较为显著的影响作用。     

阳离子反胶团体系萃取牛血清白蛋白

采用一种新的阳离子反胶团体系(CTAB/异辛烷-正戊醇),研究了反胶团萃取牛血清白蛋白(BSA).用单变量法考察了表面活性剂浓度、水相pH值、离子种类和浓度、萃取时搅拌速率和油水比对BSA萃取率的影响.实验表明,静电作用力是该萃取过程的主要动力,随水相pH值增大,BSA的萃取率逐渐升高;对于不同种类的离子,基本随其浓度增大,萃取率下降.在优化的操作条件下,BSA萃取率可达98%以上,因此,CTAB/异辛烷-正戊醇反胶团体系适合BSA的萃取.