PET瓶装无气天然矿泉水中污染菌及其系统进化分析

目的：了解某一批次聚对苯二甲酸乙二醇酯（polyethylene terephthalate,PET）瓶装无气天然矿泉水产生异味的缘由。方法：首先采用膜过滤结合平板菌落计数法分离和计数污染菌,16S rRNA序列分析鉴定其为假单胞菌属（Pseudomonas spp.）,再采用假单胞菌属特异性rpoB引物进行梯度聚合酶链式反应优化扩增条件,产物进行测序和序列分析将污染菌鉴定到种。结果：这批产品的主要污染菌是一种2009年从南极分离鉴定的假单胞菌属新种P. extremaustralis。反接实验证实该菌能在天然矿泉水中生长繁殖,并产生刺激性异味。结论：P. extremaustralis部分细菌能够透过两级串联0.2 μm过滤器,耐受中、低压紫外杀菌工艺,耐低温和低氧压,能在无任何添加的PET瓶装无气天然矿泉水中生长并产生异味。     

椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌16S～23S rRNA基因间区序列的比较研究

目的研究比较我国分离的椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌不同致病型菌株的16S～23SrRNA基因间区序列,分析不同菌株基因水平的差别,并阐述其系统发育关系。方法设计2对伯克霍尔德菌属特异引物,扩增16S～23SrRNA基因间区序列。应用分子生物学软件,对3株分别代表唐菖蒲伯克霍尔德菌3种不同致病型的国际参考菌株（ATCC10248、NCPPB947、NCPPB3580）、1株伯克霍尔德菌属B．phenazinium种代表株（LMG2247）及8株从我国不同地域、不同食物样品中分离的椰酵假单胞菌（HN2y、Co14、Co8、Co36、Sx8801、90—3、56（2）、56（2））的16S～23SrRNA基因序列进行测定,并与核酸数据库（GenBank）中相关菌株序列进行比较分析。结果通过不同菌株16S～23SrRNA间区序列的分析比较,发现分离的椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株存在2个序列高可变区及特异基因序列,阐述了我国椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌的系统发育关系,将DNA测序结果在核酸数据库中注册,并绘制了系统发育进化树。结论该研究结果为进一步鉴定椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株,从分子水平探讨其产毒机制及系统发育关系提供了新的、可靠的理论依据和技术支撑。     

一株好氧反硝化细菌的分离与鉴定

为研究活性污泥中的反硝化细菌，从实验室驯化培养的活性污泥反应器中，分离获得1株反硝化细菌P7，进行了菌株形态观察及生理生化测定，并在此基础上，经PCR扩增后测定该菌株的16SrRNA基因序列，由16SrRNA基因序列比较可知，菌株P7与睾丸酮假单胞菌（Comamonas testosteroni）和稻草假单胞菌（Pseudomonas straminea）亲缘关系最为接近，16SrRNA基因相似性达到99．65％。可初步判定其为丛毛单胞菌属（Comamonas sp．）。结合生理生化实验结果，综合分析后，将其鉴定为丛毛单胞菌属（Comamonas sp．）的睾丸酮假单胞菌（Comamonastes tosteroni）。     

杏鲍菇污染菌的分离、鉴定及其特性

从夏季被细菌污染的杏鲍菇上分离纯化得到2 株病害菌（CTE722-B、CTE722-C）,结合显微结构和生理生化实验结果,以及对它们16S rDNA序列的分析确定这两株菌的系统发育地位;通过抑菌圈实验考察几种工厂常用消毒剂对病害菌的抑菌影响。结果表明：菌株CTE722-B鉴定为恶臭假单胞菌属（Pseudomonas putida）,CTE722-C为边缘假单胞菌属（Pseudomonas marginalis）。消毒剂菇保、甲酚皂、苯扎溴铵消毒液在短时间内对这两种细菌都有较好的抑菌效果;但因其具有挥发性,故防治效果不理想。从污染菇体分离得到的2 株病害菌CTE722-B和CTE722-C被鉴定为假单胞菌属,因常用消毒剂只在短时间内对其有抑菌性,防治效果较差。     

基于第三代测序与理化指标评价不同压曲工艺酱大曲品质

基于第三代测序解析不同压曲工艺酱香大曲中微生物群落结构,并结合理化指标评价机械仿生压曲（AQ）与传统人工踩曲（MQ）成品曲的品质。结果表明,机械仿生压曲AQ的糖化与投粮作用优于传统人工踩曲MQ。从酱香大曲样品中共检测出63个真菌和272个细菌菌种,其中相对丰度较高的真菌种均为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）、微皱篮状菌（Talaromyces rugulosus）、米曲霉（Aspergillus oryzae）,相对丰度较高的细菌种均为丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）、绿针假单胞菌（Pseudomonas chlororaphis）、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）、假单胞杆菌（Pseudomonas sp.）CC6-YY-74、防御假单胞菌（Pseudomonas protegens）、沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、Pseudomonas silesiensis、贪噬菌属（Variovorax sp.）PMC12。机械仿生压曲AQ中物种总数和多样性均高于传统人工踩曲MQ。综合来看,机械仿生压曲AQ的品质高于传统人工踩曲MQ。     

肉桂油对大菱鲆荧光假单胞菌腐败能力的抑制作用

利用报告菌株紫色杆菌CV026检测模型,验证肉桂油具有群体感应抑制活性。以大菱鲆灭菌鱼汁为研究对象,接种荧光假单胞菌后,经3μL/m L肉桂油处理并于4℃下贮藏,每隔24 h测定细菌菌落总数、荧光假单胞菌落数、TMA和TVB-N,结合感官评价,研究肉桂油对荧光假单胞菌腐败能力的抑制作用。结果表明:肉桂油能够显著减缓鱼汁感官品质的下降（p<0.05）,有效降低鱼汁的TMA和TVB-N（p<0.05）,但不影响荧光假单胞菌的生长。可见,肉桂油可以通过干扰荧光假单胞菌的群体感应系统,来降低其腐败能力,并且这种效果不是利用抑菌作用来实现的。      

建始地区酸豇豆盐水细菌多样性及乳酸菌分离鉴定

该研究采用MiSeq高通量测序技术对酸豇豆盐水的细菌多样性进行了解析,并通过纯培养方式分离了其中的乳酸菌。结果发现,细菌以硬壁菌门（Firmicutes）和变形菌门（Proteobacteria）为主,平均相对含量分别为84.41%和10.52%;细菌属以乳酸杆菌属（Lactobacillus）、魏斯氏菌属（Weissella）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、假单胞菌属（Pseudomonas）和片球菌属（Pediococcus）为主,平均相对含量分别为57.02%、9.33%、7.07%、4.73%和3.40%;发现44个操作分类单元（OTU）存在于所有样品中,所包括序列占总序列数的25.06%,其中有6个、11个和13个分别被鉴定为假单胞菌属（Pseudomonas）、魏斯氏菌属（Weissella）和乳酸杆菌属（Lactobacillus）,所含序列平均含量分别为4.61%、4.97%和14.46%;通过纯培养共分离出了13株乳酸菌,其中12株被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。由此可见,乳酸杆菌为建始地区酸豇豆盐水中的优势细菌,且乳酸杆菌主要为植物乳杆菌。     

仿刺参肠道可培养微生物多样性研究

为了解大连地区仿刺参肠道可培养微生物种群的多样性信息,用2216、TCBS和葡萄糖琼脂培养基从大连地区冬、春两季的仿刺参肠道中共分离得到141株细菌,通过16SrDNA-RFLP分析后,得到17个不同的类群。从各个类群中随机选取代表菌株进行16SrDNA序列测定和系统发育分析,结果表明,大连地区仿刺参肠道细菌主要包括假单胞菌属（Pseudomonas）,弧菌属（Vibrio）,芽孢杆菌属（Bacillus）,希瓦氏菌属（Shewanella）,交替假单胞菌属（Pseudoalteromonas）,不动杆菌属（Acinetobacter）,气球菌属（Aerococcus）,发光菌属（Photobacterium）,葡萄球菌菌属（Staphylococcus）和Kushneria菌属共10个菌属。说明大连地区仿刺参肠道可培养微生物具有一定的多样性。      

基于纯培养和高通量测序技术解析仙桃地区鲊菜细菌多样性

为解析湖北省仙桃地区鲊菜中细菌多样性,该研究在采用纯培养技术对乳酸菌菌株进行分离鉴定的基础上,进一步使用Illumina Mi Seq高通量测序技术对其细菌多样性进行解析。纯培养结果发现,分离到的44株乳酸菌隶属于乳酸杆菌属（Lactobacillus）、明串珠菌属（Leuconostoc）、魏斯氏菌属（Weissella）和乳球菌属（Lactococcus）,其中植物乳杆菌（L. plantarum）和戊糖乳杆菌（L. pentosus）分别占总分离株含量的40.91%和34.09%。Illumina Mi Seq高通量测序结果显示,鲊菜中优势细菌属主要包括乳酸杆菌属、明串珠菌属、魏斯氏菌属、假单胞菌属（Pseudomonas）和肠杆菌属（Enterobacter）,其平均相对含量分别为85.03%、3.31%、1.68%、1.50%和1.05%。由此可见,仙桃地区鲊菜中乳酸菌具有较高的多样性,且以植物乳杆菌和戊糖乳杆菌为主。     

芳樟醇对三文鱼源莓实假单胞菌的抑菌机理

本研究应用高通量测序技术分析不同贮藏期三文鱼的菌相变化,并分离、纯化、鉴定出1 株4 ℃贮藏环境下三文鱼的优势腐败菌——莓实假单胞菌MS 02（Pseudomonas fragi MS 02）。再以分离出的莓实假单胞菌MS 02为靶标菌,深入探究芳樟醇对其抑菌性能及其抑菌机理。结果表明：4 ℃贮藏三文鱼的菌相呈现动态变化的趋势,其中发光杆菌属、假单胞菌属、青枯菌属和不动杆菌属细菌在三文鱼贮藏中占主要地位。随着贮藏时间的延长,假单胞菌属的相对丰度逐渐增大,而莓实假单胞菌是三文鱼在贮藏期间增长速率最快的菌种。以分离鉴定出的莓实假单胞菌MS 02为研究对象,发现芳樟醇对其具有良好的抑菌效果,扫描电子显微镜观察结果表明芳樟醇能使细菌细胞膜产生凹陷褶皱,而电导率、OD260 nm、二乙酸荧光素荧光强度和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）、钠钾ATP酶活力测定结果证明芳樟醇能破坏莓实假单胞菌的细胞膜和细胞壁的通透性和完整性,进而影响细菌细胞正常能量代谢,最终导致菌体死亡。     

ARTP诱变选育高产海藻糖菌株及酶促反应条件优化

以实验室保藏的节杆菌属菌株Arthrobacter sp.SH为出发菌株,经常压室温等离子体（atmospheric and room temperature plasma,ARTP）诱变选育后,筛选到一株以淀粉为原料Tre Y-Tre Z途径生产海藻糖的高产突变菌株Arthrobacter sp.SH-52。该突变菌株酶催化能力达到129.6 U/m L,比出发菌株提高了46.1%。对菌株Arthrobacter sp.SH-52的酶促反应条件进行优化,结果表明,酶促反应最适温度45℃,最适反应时间30 h,最适初始p H 6.5,最适底物为浓度20%的淀粉液化液（DE值为11.9）。经酶促反应优化后,采用未经纯化的粗酶液进行催化,转化率达到37.6%。实验结果表明ARTP诱变是选育高酶活海藻糖生产菌的有效方法,研究结果对工业化生产海藻糖具有一定的借鉴价值。      

海藻糖合成酶产生菌筛选、鉴定及其产酶特性

以麦芽糖为唯一碳源高盐培养基,经高温培养,从温泉水样及其附近土壤中筛选得到一株菌株T2,经过生物合成途径初步验证,该菌株产海藻糖合酶,能够通过海藻糖合成酶（TreS）途径将麦芽糖转化为海藻糖。菌株T2为革兰氏阳性菌,杆状,有芽孢,经过生物学鉴定,将其初步鉴定为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）。对其产海藻糖合酶的酶学性质进行了研究：酶反应最适作用温度为60 ℃,在60 ℃条件下保温100 min仍能保持酶活性80.7%;最适作用pH值为7.0,在pH 6.0～7.5范围内稳定。采用正交试验对其发酵培养基配方进行了优化研究,确定了最佳的培养基组成为牛肉膏3.0 g/L,麦芽糖20.0 g/L,蛋白胨7.5 g/L,无机盐（K2HPO4＋NaH2PO4＋MgSO4·7H2O）3.0 g/L。在此条件下,菌株T2产海藻糖合酶酶活力达到310.6 U/L。     

南极假丝酵母Pseudozyma sp.JCC207的培养及其海藻糖提取工艺优化

本文研究了南极假丝酵母Pseudozyma sp.JCC207的培养条件,对其海藻糖的提取工艺进行优化。利用单因素实验研究了培养温度和初始p H对南极假丝酵母生长的影响,采用RSM分析法确定了三氯乙酸(TCA)法提取南极假丝酵母海藻糖的最优工艺。结果表明其最适培养温度为25℃,起始p H为5~9范围内酵母生长情况差别不大;最优提取条件为:三氯乙酸浓度0.6 mol/L、体积15.20 m L、提取时间29 min;每克南极假丝酵母湿菌体中海藻糖的提取量为17.72 mg;功能实验表明,与甘油(20%)和二甲基亚砜(10%)等传统保种试剂相比,0.5%海藻糖溶液在短期内(5 d)对酵母具有更好的保种能力。      

昆明假单胞菌HL22-2海藻糖合酶基因的克隆、表达及酶学性质研究

采用热不对称交错聚合酶链式反应（Tail-PCR）克隆云南磷矿来源昆明假单胞菌（Pseudomonas kunmingensis）HL22-2的海藻糖合酶（TreS）基因HL22-2TreS,将该基因与表达载体pETM3C连接后在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）pLysS中进行异源表达,通过Ni-NTA柱纯化重组酶HL22-2TreS,并对其酶学特性进行分析。结果表明,HL22-2TreS基因全长3 336 bp,编码1 111个氨基酸,氨基酸序列与Genbank数据库中相关的海藻糖合酶具有极高的相似性。重组酶HL22-2TreS的分子质量约126 kDa,该酶的最适反应温度和pH值分别为40 ℃和7.0,在温度20～50 ℃及pH值6.0～9.0条件下比较稳定,Cu2+、Hg2+、Ba2+及Al3+对海藻糖合酶的活力有强烈的抑制效果。HL22-2TreS基因对麦芽糖和海藻糖的米氏常数（Km）分别为20.6 mmol/L和87.5 mmol/L,对麦芽糖具有更高的亲和性,更容易将麦芽糖转化成海藻糖。     

原生质体紫外诱变选育L-半胱氨酸高活力转化菌株

对Pseudomonas sp.HJ-14的原生质体制备和再生条件进行了研究,并对其原生质体紫外辐照诱变选育L-半胱氨酸高活力转化菌株。在37℃、2 mg/mL溶菌酶作用下酶解60 min,其原生质体的形成率和再生率分别为78.6%和28.6%。经过紫外辐照诱变Pseudomonas sp.HJ-14原生质体,在含DL-2-氨基-△~2-噻唑啉- 4-羧酸(DL-ATC)再生平板上筛选抗性菌株,获得1株酶活较高的正突变株B-3,该菌株具有良好的遗传稳定性和酶活稳定性。采用5L罐进行产酶培养,并在pH8.0、DL-ATC·3H_2O浓度为10 g/L、42℃酶促反应9 h,L-半胱氨酸最高产量达4.63 g/L,摩尔转化率为76.5%,较HJ-14提高了117.7%。     

铜绿假单胞菌对萘和菲降解特性研究

研究不同pH和温度条件下,铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）对多环芳烃中萘和菲的降解效果。结果表明,以活性炭为吸附载体,多环芳烃为唯一碳源,将此菌株培养48 h后,pH值为7.0时,萘的降解率可达25.68%,脱氢酶活性达到33.42 （μg/mL）·h;菲的降解率可达41.9%,脱氢酶活性达到37.44 （μg/mL）·h。当温度为37 ℃时,萘的降解率可达27.7%,脱氢酶活性达到33.60 （μg/mL）·h;菲的降解率可达34.5%,脱氢酶活性达到39.96 （μg/mL）·h。     

Bioaccessibility of environmentally aged 14C-atrazine residues in an agriculturally used soil and its particle-size aggregates

After 22 years of aging under natural conditions in an outdoor lysimeter the bioaccessibility of 14C-labeled atrazine soil residues to bacteria was tested. Entire soil samples as well as sand-sized, silt-sized, and clay-sized aggregates (>20, 20-2, and <2microm aggregate size, respectively) were investigated under slurried conditions. The mineralization of residual radioactivity in the outdoor lysimeter soil reached up to 4.5% of the total 14C-activity after 16 days, inoculated with Pseudomonas sp. strain ADP. The control samples without inoculated bacteria showed a mineralization maximum of only about 1% after 44 days of incubation. Mineralization increased in the clay-sized aggregates up to 6.2% of the total residual 14C-activity within 23 days. With decreasing soil aggregate sizes, residual 14C-activity increased per unit of weight, but only minor differences of the mineralization in the soil and soil size aggregates using mineral-media for incubation was observed. Using additional Na-citrate in the incubation, the extent of mineralization increased to 6.7% in soil after 23 days following incubation with Pseudomonas sp. strain ADP. These results show that long-term aged 14C-atrazine residues are still partly accessible to the atrazine degrading microorganism Pseudomonas sp. strain ADP.     

浩乳德用直投式发酵剂保护剂配方优化及应用

以植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）686为试验菌株,以甘油、山梨醇、脱脂乳、葡萄糖、菊粉、海藻糖、谷氨酸钠和谷胱甘肽为保护剂,以冻干存活率为评价指标,通过单因素试验及响应面试验优化发酵剂保护剂配方,用直投式（DVS）发酵剂制作浩乳德（奶豆腐）,并对其品质进行评价。结果表明,菌株686最佳保护剂配方为脱脂乳添加量12.5 g/100 mL、海藻糖添加量6.0 g/100 mL及谷氨酸钠添加量12.5 g/100 mL。在此优化配方条件下,菌株冻干存活率为81.59%。扫描电镜（SEM）观察结果表明,添加最优冻干保护剂的乳酸菌686完整无破碎,用其制作浩乳德的理化指标、鲜味及丰富度均有极大改善。     

HPLC-RI法测定食用酵母的海藻糖含量

目的:建立酵母海藻糖的提取方法,并比较啤酒酵母、葡萄酒酵母、高活性酵母、酿酒高活性酵母的海藻糖含量。方法:酵母菌体经液氮研磨后以乙醇-水溶液为溶媒,通过超声波辅助的方法提取海藻糖,采用HPLC法分析海藻糖含量。以酿酒高活性酵母为例,在单因素实验基础上通过正交实验优化酵母菌海藻糖的提取工艺,并比较4株食用酵母菌海藻糖的含量。结果:酵母菌细胞海藻糖提取的最优工艺条件为:在80℃的条件下,乙醇浓度为50%,料液比1∶15（g∶m L）,提取时间70min,海藻糖得率达（68.10±0.7）mg/g,四株食用酵母菌海藻糖含量大小次序为:酿酒高活性酵母>高活性酵母>葡萄酒酵母>啤酒酵母。结论:优化的酵母海藻糖提取的工艺简单,得率高;方法学分析显示HPLCRI分析海藻糖含量方法准确,重现性好,方便快捷;不同生产用途的酵母菌株海藻糖含量存在差异。      

高通量测序分析混合菌群中的呕吐毒素降解菌

为筛选具有降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）能力的微生物,利用高通量测序方法分析混合菌群中的DON降解菌。从土壤中获得具有DON降解能力的混合菌群LG-6,并发现不同梯度稀释倍数的混合菌群之间DON降解效果具有明显差异。稀释至10－7时混合菌群LG-6-7能完全降解DON,而稀释至10－8时混合菌群LG-6-8不能降解DON。对这2?个混合菌群的微生物多样性进行分析,发现混合菌群LG-6-7包括假苍白杆菌属、节细菌属、假单胞菌属、代尔夫特菌属和德沃斯氏菌属,而混合菌群LG-6-8包括假苍白杆菌属和节细菌属。故推测假单胞菌属、德沃斯氏菌属和代尔夫特菌属在降解DON的过程中必不可少。此外,假单胞菌B6-24和德沃斯氏菌A6-243混合培养时,48?h内完全降解DON。该混合菌群培养温度为37?℃、pH?7.0,培养基为MMT培养基,并发现该混合菌群是通过微生物代谢产生的酶对DON进行降解。本研究发现能完全降解DON的假单胞菌B6-24和德沃斯氏菌A6-243混合菌群,为呕吐毒素生物脱毒剂的研发提供一定理论依据。