LC-MS/MS法同时测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度

目的: 建立LC-MS /MS法同时测定人全血中环孢素A、依维莫司、他克莫司和西罗莫司的浓度。方法: 人全血样品用乙腈沉淀蛋白后,上清液用叔丁基甲醚提取后选用ZORBAX SB C₁₈(2.1 mm×100 mm, 3.5 μm)色谱柱,流动相采用甲醇10 mmol/L 乙酸铵溶液(均含0.1%甲酸)梯度洗脱,采用电喷雾离子化源,正离子方式,多反应监测(MRM)扫描方式进行监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 1 202.6→m/z 425.1（环孢素A）、m/z 975.8→m/z 908.6（依维莫司）、m/z 821.6→m/z 768.5（他克莫司）、m/z 931.8→m/z 864.2（西罗莫司）和m/z 366.2→m/z 132.0（内标吲达帕胺）。 结果: 全血中环孢素A的线性范围为10~2 000 ng/mL( r=0.996 2), 定量下限为 10 ng/mL,依维莫司、他克莫司和西罗莫司的线性范围为 0.50~100 ng/mL (r＞0.99),定量下限为 0.50 ng/mL;四种药物的平均回收率 95.1%~110.6%;日内、日间RSD均小于15%;提取回收率在 78.6%~85.9%之间。结论: 该方法快速、灵敏、准确,专属性强,重复性好,适用于人全血中同时测定环孢素A、依维莫司、他克莫司和西罗莫司浓度。     

LC-MS/MS法测定人血浆中西格列汀浓度及其药物动力学研究

目的: 建立LC-MS /MS法测定人血浆中西格列汀的浓度并进行药动学研究。方法: 人血浆样品用乙酸乙酯提取后,选用ZORBAX Eclipse XDB C18(2.1 mm×100 mm, 3.5 μm)色谱柱,以乙腈-10 mmol/L醋酸铵溶液（80∶20,含0.1%甲酸）为流动相,流速为0.30 mL/min,采用电喷雾离子化源,正离子方式,多反应监测(MRM)扫描方式进行监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 408.1→m/z 235.1（西格列汀）和m/z 303.2→m/z 152.9（内标橙皮素）。结果: 血浆中西格列汀的线性范围为0.20~1 000 ng/mL ( r=0.998 0),定量下限为0.20 ng/mL;方法回收率在93.2%~105.5%;日内、日间RSD均小于15%;提取回收率81.6%~86.5%,无明显基质效应。结论: 该方法快速、灵敏、准确,专属性强,重复性好,适用于人血浆中西格列汀浓度的测定,可应用于西格列汀的血药浓度检测和药物动力学研究。     

LC-MS/MS法测定肿瘤患者血浆中阿帕替尼浓度及其临床应用

目的: 建立一种快速、灵敏地测定人血浆中阿帕替尼的LC-MS/MS方法,并应用于肿瘤患者的药物浓度测定。方法: 选用索拉菲尼作为内标,血浆样品用乙腈直接沉淀蛋白后,色谱柱采用 Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm, 3.5 μm),流动相为乙腈-10 mmol/L醋酸铵溶液（均含0.1%甲酸） 85∶15(V/V),流速为0.25 mL/min,采用电喷雾离子化源,正离子方式,扫描方式为多反应监测(MRM),用于监测的离子反应分别为m/z 398.1→m/z 212.0（阿帕替尼）和m/z 465.3→m/z 270.1（内标索拉菲尼）。方法学验证后用于肿瘤患者的血药浓度检测。结果: 血浆中内源性物质对测定无干扰,阿帕替尼2.0～2 000.0 μg/L范围内线性关系良好(r=0.996 8);4个不同质控浓度水平(定量下限,低、中、高浓度)的准确度96.1%~105.3%范围内;批内(n=5)和批间(n=3)精密度良好,相对标准误差（RSD）均小于15%;阿帕替尼和内标的提取回收78.0%~87.8%,内标归一化阿帕替尼基质效应因子为92.4 %~107.3%。结论: 本方法特异性强,灵敏度高,符合临床生物样本分析要求,适用于人血浆中阿帕替尼浓度的测定。     

LC-MS/MS法测定对氨基水杨酸浓度及在大鼠组织分布研究中的应用

目的:开发HPLC-ESI-MS/MS方法测定大鼠组织对氨基水杨酸浓度以改善以往方法的复杂前处理过程及低灵敏度的问题,并应用于研究其在大鼠体内的分布。方法: 采用一步蛋白沉淀的前处理,选择菲诺门Synergi 4u Polar-RP 80A (150 mm×4.6 mm;4 μm)色谱柱以及梯度法进行色谱分离。内标为氯唑沙宗。采用API4000液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法测定。扫描方式采用多重反应监测（MRM）,负离子模式。对氨基水杨酸及内标（氯唑沙宗）监测离子对为m/z 152.0→108.1,m/z 167.9→131.9。 结果:总分析运行时间为6.5 min。对氨基水杨酸在0.05～50 μg/mL内线性关系良好,定量下限低至0.05 μg/mL。本实验方法学所有验证结果都符合FDA生物样品分析指导原则要求。结论:本分析方法准确可靠,并成功应用于临床前组织分布研究。     

基于GC-MS建立载气吹扫实验装置匹配测定电子烟雾尼古丁浓度

目的: 建立匹配电子烟烟雾尼古丁浓度的实验装置。方法: 采用GC-MS检测尼古丁，建立尼古丁浓度与峰面积线性方程。同法测定不同流速空气为载气吹扫液态尼古丁形成气溶胶中尼古丁浓度。ELISA法测定尼古丁大鼠体内代谢物可替宁浓度。结果: 在0.226 0~2.269 7 μg/mL范围内，尼古丁峰面积与其质量浓度呈现良好线性关系，决定系数（r²=0.993 7）。在标准气态尼古丁浓度分别为0.567 4、1.134 8、1.702 3 μg/mL水平下，平均回收率分别为97.2%、113.7%、108.1%，相对标准差（RSD）分别为6.1%，20.8%，16.9%（n=3）。标准品与电子烟雾尼古丁保留时间均为13.41 min，均出现碎片定量离子m/z 84.03，辅助定量离子为m/z 133.03，方法专属性好。电子烟烟雾尼古丁浓度为0.584 μg/mL。 条件: 25 ℃尼古丁液面高度为20 cm，空气流1.1 L/min时，实验装置内的气溶胶尼古丁浓度与电子烟烟雾匹配。与对照组血清中可替宁浓度(2.05±0.83) ng/mL相比，尼古丁组血清中可替宁浓度（5.31±0.62）ng/mL明显升高(P<0.01)。结论: 建立了与电子烟烟雾尼古丁浓度相匹配的实验装置，实验装置气体可以使大鼠感染尼古丁。     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中吲哒帕胺的浓度

目的: 建立一种简便、灵敏的测定人体血浆中吲哒帕胺浓度的高效液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS/MS) 方法。方法: 以瑞格列奈钙为内标,采用乙腈:0.1%甲酸水溶液=90∶10为流动相,以Agilent-ZORBAX-C₁₈柱(2.1 mm×150 mm,5.0 m)色谱柱为分析柱,通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行进样检测。检测离子为 [M+H]+m/z 364.1 m/z 188.8(吲哒帕胺)和[M+H]+m/z 451.1 m/z 134.8(瑞格列奈钙,内标)。结果: 吲哒帕胺线性范围为 0.5～50 ng/mL,定量下限为 0.5 ng/mL,线性关系良好;高、中、低三个浓度的日内、日间的RSD均<15%,平均回收率为 94.60%～110.33%。结论: 本方法专属性强,操作简便,灵敏度高,适用于吲哒帕胺制剂的临床药动学研究。     

HPLC-MS-MS法测定人血浆中芬太尼浓度及其生物等效性研究

目的: 建立液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS) 测定人血浆中芬太尼的浓度。 方法: 以D5-芬太尼为内标,采用正己烷处理血浆样品。色谱柱为Thermo Hypurity C₁₈(150 mm×2.1 mm, 5 μm),流动相为甲醇∶水(含 0.1%甲酸)=(85∶15,V/V),流速为 0.3 mL/min,柱温 40 ℃;质谱条件为电喷雾电离源(ESI),检测方式为正离子方式、多离子反应监测(MRM),用于定量分析的离子为芬太尼m/z 337.1→188.1,D5-芬太尼m/z 341.9→187.9。 结果: 芬太尼血药浓度在 19.53～5000 pg/mL 范围内线性关系良好,定量下限为 19.53 pg/mL,日内和日间变异均小于 5.16%,提取回收率均在90％以上;应用此方法研究了24名健康男性受试者使用两种芬太尼透皮贴剂的药代动力学特点,受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为(94.0±19.5)%。 结论: 本法具有快速、简便、灵敏、准确等特点,适合人血浆中芬太尼浓度测定。两种制剂生物等效。     

高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中的达比加群

目的: 建立了一种简单、快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定大鼠血浆中达比加群的浓度,进行了系统的方法学验证研究,并应用于达比加群酯大鼠灌胃给药后的药代动力学研究。方法: 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,通过Ecosil-C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm) 色谱柱分离,流动相为甲醇5%甲醇水溶液（含有10 mmol/L甲酸铵及 0.1%甲酸）,梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子化源正离子条件下多反应监测模式,监测反应离子对为达比加群［M+H]⁺ m/z 472.2→289.2,内标苯海拉明［M+H］⁺ m/z 256.1→167.0。结果: 达比加群在 0.25~500 ng/mL 浓度范围内线性关系良好（r =0.9970）,定量下限为 0.25 ng/mL;日内、日间精密度（RSD）均小于 9.57%,准确度（RE）均在±6.5%以内;血浆中无内源性物质干扰,基质效应为108%~112%,提取回收率为 92.6%~94.2%;达比加群的血浆样品经室温放置 4 h、-80 ℃三次冻融循环、-80 ℃冻存三周,处理后的样品在进样器内放置 24 h 均稳定;药物浓度超出曲线范围的样品经空白血浆稀释5倍后,其准确度均在±8.00%以内,精密度小于4.92%。结论:本文建立的LC-MS/MS方法学验证,成功适用于大鼠灌胃20 mg/kg给药达比加群酯药代动力学研究。     

丙戊酸钠缓释片在健康人体内的药动学研究

目的: 建立用于测定人血浆中丙戊酸的LC-MS/MS法,研究丙戊酸钠缓释片在健康人体内的药动学。方法: 色谱条件：色谱柱为Waters YMC C₁₈柱(150 mm×2.1 mm,5 μm),流动相为乙腈和10 mmol/L醋酸铵 (85∶15,V/V),流速为300 μL/min,柱温为40 ℃,进样量为2 μL;质谱条件：电喷雾负离子化,三重四极杆质谱多反应监测模式,丙戊酸和内标甘草次酸的选择性反应检测离子分别为m/z 143.0→143.0和m/z 469.4→425.5。24名中国成年健康男性作为受试者,按随机数表分为2组,采用自身双交叉试验设计,单剂量空腹口服0.5 g丙戊酸钠缓释片受试制剂或参比制剂,并于不同时间点采集肘静脉血（0～96 h）;随后进行多剂量试验,将另外24名受试者分成2组,连续8 d服用受试制剂或参比制剂(0.5 g,qd),于第8天服药后按单剂量试验中的采血方案在各时间点采集血样。对采集的所有血样进行血浆分离及处理,采用建立的LC-MS/MS法测定丙戊酸血药浓度,用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果: 分析方法学评价：丙戊酸血药浓度在0.087 5～89.6 μg/mL范围内线性关系良好,方法精密度、准确度和回收率均良好,且无明显基质效应。药动学评价：受试制剂单剂量和多剂量给药后的主要药动学参数分别为C_max (42.9±14.4)和C_ss,max (65.1±31.6) μg/mL,以及AUC_{0-96 h} (1 214.5±372.8)和AUC_ss (1 106.6±484.9) μg•h•mL^-1,均与参比制剂无统计学差异（P>0.05）。结论: 建立的LC-MS/MS法专属、灵敏、准确,可满足丙戊酸钠缓释片的药动学研究要求。     

液相色谱串联质谱法测定人血清中匹多莫德的浓度

目的: 建立液相色谱串联质谱法测定人血清中匹多莫德的浓度。方法: 血清样品用甲醇沉淀蛋白,内标为格列吡嗪,色谱柱为Lichrospher C₁₈ (4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温为 30 ℃,流动相为甲醇-2.5 mmol/L NH₄Ac(90∶10,V/V),流速为 0.5 mL/min。质谱采用ESI离子源负离子检测,定量分析的离子对为:m/z 242.9/153.0(匹多莫德),m/z 444.0/169.9(内标格列吡嗪)。结果: 匹多莫德在 0.1~10 mg/L 范围内线性关系良好(r=0.9995),批内批间RSD均小于15%,提取回收率为 85.52%~98.30%。结论: 该方法快速,灵敏,准确,可用于匹多莫德的临床药动学研究。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中乌头碱的浓度

目的: 建立LC-MS/MS法检测大鼠血浆中乌头碱的浓度。方法: 以维拉帕米作内标,血浆样品经MTBE液液萃取后,采用HyPURITY Cyano (150 mm×2.1 mm, 5 μm)柱分离,流动相为乙腈:10 mmol/L 甲酸铵=(70∶30,V/V),流速为 0.30 mL/min。然后采用电喷雾离子源(ESI源)正离子多反应监测(MRM)扫描分析,乌头碱和维拉帕米的离子选择通道分别为:m/z 646.4→586.4 和 455.2→164.9。结果: 乌头碱的线性范围为 9.3～2390 pg/mL,最低检测浓度为 9.3 pg/mL,日内和日间变异均<15%。结论: 本方法灵敏度高,适用于乌头碱在鼠内的药物代谢动力学研究。     

高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中吲达帕胺浓度及生物等效性研究

目的: 建立一种简单、有效且灵敏的液质联用法(LC-MS/MS)检测人血浆中吲达帕胺浓度。方法: 血浆样品经叔丁基甲基醚(tert-Butyl Methyl Ether, MTBE)萃取后,选安定作内标。色谱柱为Luna C₁₈柱(150 mm×2.0 mm, 5 μm);流动相为 10 mmol/L 甲酸铵(含0.1%甲酸):甲醇=(20∶80,V/V);流速为 0.30 mL/min;采用ESI+ MRM方式监测;源电压:3.5 kV;源温度:100 ℃;吲达帕胺和安定的离子选择通道分别为:m/z 366.2→132.1,285.2→154.1。结果: 吲达帕胺线性范围为 0.536~45.733 ng/mL,最低检测浓度为 0.536 ng/mL,提取回收率在69%~81%,日内、日间RSD均<15%。由湖南协力药业有限公司生产生产的吲达帕胺缓释片(1.5 mg/片)与施维雅(天津)制药有限公司生产的吲达帕胺缓释片(商品名:纳催离,1.5 mg/片)经单次及多次给药试验研究,具有生物等效性。结论: 本方法简单、灵敏,可准确检测人体血浆中吲达帕胺的浓度。     

人体中伊曲康唑及其活性代谢产物羟基伊曲康唑的整合药代动力学研究

目的: 羟基伊曲康唑(OH-ITZ)为目前临床一线抗真菌药伊曲康唑(ITZ)的主要活性代谢产物,其与ITZ有着相似的抗菌活性,且血药浓度较母体药物高,因此OH-ITZ的体内过程对临床疗效的影响研究不容忽视。本文旨在建立灵敏、快速的液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中ITZ及OH-ITZ,并应用整合药代动力学模型进行整体评价。方法: 血浆样品经沉淀蛋白后,以乙腈(甲酸 0.1%)-水(甲酸 0.1%)为流动相梯度洗脱,Zorbax XDB C₁₈柱分离,采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测。定量分析所用的离子反应分别为m/z 705 →m/z 392(ITZ),m/z 721→m/z 408(OH-ITZ)和m/z 386→m/z 122(内标,丁螺环酮)。结果: 测定血浆中ITZ及OH-ITZ的线性范围均为 0.50~500 ng/mL,日内、日间精密度(RSD)均小于 12.4%,准确度(RE)均在±7.5%以内;整合药动学研究结果显示综合浓度药-时曲线符合口服给药药物消除规律,整合后主要药动学参数t_1/2和AUC_0-∞分别为 19.5 h,5754 ng·h·mL^-1。结论: 本方法运行时间短、选择性强、灵敏度高、操作简便、血浆用量少,适用于ITZ及OH-ITZ的临床药代动力学研究;其整合药动学模型研究所获参数能够表征ITZ和OH-ITZ的整体处置规律,符合经典药代动力学模型特征。     

LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度及其药代动力学应用

目的：建立LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度并应用于人体药代动力学研究。方法：采用液-液萃取法从人血浆中提取安立生坦和内标后，在Waters Symmetry C18柱（4.6 mm×100 mm, 5 μm）上进行色谱分离，有机相：40%甲醇-60%乙腈，水相：5 mmol/L乙酸铵-10%乙腈，流速：0.5 mL/min，电喷雾离子化源，多反应监测，负离子模式，安利生坦和内标的监测离子对分别为m/z 377.1→301.2和m/z 380.4→301.0。结果：安立生坦在2～2 000 ng/mL浓度范围内线性良好，定量下限为2 ng/mL，批内精密度小于2.72%，批间精密度小于8.98%，经内标归一化后的基质效应在92.3%～98.3%之间，提取回收率在74.6%～80.5%之间。 结论：该方法灵敏、经济、可靠，适用于人血浆中安立生坦浓度的测定，满足人体药代动力学研究。