新疆塔城地区哈萨克族传统奶酪中酵母菌的分离鉴定

为保护新疆哈萨克族传统奶酪中的优良酵母菌株,从新疆塔城牧区不同牧场采集的10份哈萨克族传统奶酪样品中,分离得到44株酵母菌。采用形态学、生理生化特性鉴定、5.8S rDNA序列同源性分析相结合的方法,对分离菌株进行鉴定。共鉴定出5个种,其中34株库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）,为优势菌株,6株戴尔有孢圆酵母（Torulaspora delbrueckii）,2株乳酸克鲁维酵母（Kluyve- romyces lactis ）,1株马克思克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus ）,1株发酵毕赤酵母（Pichia fermentans ）。结果表明,哈萨克族传统奶酪制品中所含酵母菌与其他地区的存在差异性,有其独特的酵母菌资源。     

高酸度水果果酒酿造产酯酵母的鉴定及发酵特性研究

采用脱氧核糖核酸（DNA）鉴定比对、生长特性和耐受性实验对从蓝莓果皮及特香型白酒酒醅中筛选得到的6株产酯酵母进行菌种亲缘性鉴定和发酵特性比较。结果表明,6株产酯酵母（E1～E6）分别被鉴定为异常毕赤酵母（Pichia anomala）、库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）、异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）、光滑假丝酵母（Candida glabrata）、戴尔凯氏有孢圆酵母（Torulaspora.delbrueckii）和德巴利汉逊酵母（Debaryomyces hanseni）。通过发酵特性和耐受性实验分析发现,菌株E1（P. anomala）生长速度最快,发酵性能俱佳,总酯产量为3.71 g/L,且在酒精度9%vol、SO2质量浓度200 mg/L、pH 3.0及蔗糖含量＜70%的发酵液中都能有良好的生长状态,是一株蓝莓等高酸度水果果酒酿造的优良产酯酵母菌株。     

老白干酒曲中酵母菌多样性分析

采用微生物分离培养与分子鉴定相结合的方法,在对酒曲中的酵母菌进行分离、纯化和形态学鉴定基础上,进行菌株核糖体26S rDNA聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析技术结合的分子鉴定。并采用非培养方法,直接提取酒曲中的总DNA进行聚合酶链式反应扩增、电泳和切胶与回收,通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE）法鉴定酵母菌。结果表明,采用培养方式分离到57?株6?种不同形态的酵母菌,经鉴定为5?种分子类型,分别为奥默毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）、葡萄牙棒孢酵母（Clavispora lusitaniae）、异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）、胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）、阿氏丝孢酵母（Trichosporon asahii）。经PCR-DGGE法鉴定得到10 株酵母菌,分别为W. anomalus、Wickerhamomyces sp.、T. asahii、热带假丝酵母（Candida tropicalis）和Candida sp.各1 株,Hyphopichia burtonii 2?株,另有uncultured Saccharomycopsis 3?株。培养与非培养两种方式共鉴定得到10 株酵母菌,分别属于8?个属,包括P. kudriavzevii、C. lusitaniae、W. anomalus、R. mucilaginosa、T. asahii、uncultured Saccharomycopsis、H. burtonii、Wickerhamomyces sp.、C. tropicalis、Candida sp.,该研究结果可为进一步研究酒曲的发酵能力提供参考。     

自然发酵生姜猕猴桃酒醅中酵母菌区系分析

采用传统培养方法、模拟环境培养方法以及寡培养的方法分析了自然发酵期间生姜猕猴桃酒醅中酵母菌区系。根据菌落形态、大小和颜色从样品中共分离得到265株酵母菌株。根据5.8S rDNA-ITS区序列分析比对结果显示,所分离得到的265株酵母分属于7属11种,分别是桔假丝酵母(Candida quercitrusa)、福山假丝酵母(Candida fukuyamaensis)、葡萄酒有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)、奥莫柯达酵母(Kodamaea ohmeri)、美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)、卡里比克毕赤酵母(Pichia caribbica)、膜醭毕赤酵母(Pichia membranifaciens)。毕赤酵母(Pichia)为生姜猕猴桃自然发酵的优势菌群。     

贺兰山东麓产区葡萄自然发酵液中酵母的多样性研究

为了分析宁夏贺兰山东麓葡萄自然发酵液中酵母多样性,从贺兰山东麓不同产区（广夏、立兰、银川和红寺堡）葡萄自然发酵的不同阶段分离酵母菌,并采用WL培养基与26S rDNA D1/D2序列分析法进行鉴定。结果表明,共分离到316株酵母,经鉴定被归为6个属9个种,其中在各产区均分离到有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）、美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）、Candida zemplinina和酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）;在立兰、银川和红寺堡均分离到克鲁维毕赤酵母（Pichia kluyveri）;在红寺堡还分离到加利福尼亚假丝酵母（Candida californica）和伽状毕赤酵母（Pichia galeiformis）;库德里阿兹威氏毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）仅存在于立兰和银川;戴尔有孢圆酵母（Torulaspora delbrueckii）仅存在于银川。宁夏贺兰山东麓葡萄自然发酵汁中酵母的多样性分析不仅为该产区酵母的开发利用奠定基础,也将为其他产区酵母筛选提供参考依据。     

红提葡萄中酵母菌多样性的研究

为研究红提葡萄酵母菌多样性,以石河子地区的红提葡萄为原料,采用传统分离培养方法从中筛选酵母菌,并通过形态 观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。 结果表明,共筛选鉴定出24株酵母菌。 其中毕赤酵母属（Pichia）16株、汉逊 酵母属（Hanseniaspora）4株、梅奇酵母属（Metschnikowia）4株。 库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）为优势种,占分离菌株的50%。 该 研究可为红提葡萄酵母菌资源的开发与利用提供理论依据。     

贵州黔南地区泡制酸菜中酵母菌的分离与鉴定

采用纯培养的方法从贵州黔南地区20份自然发酵泡制酸菜中分离出115株酵母菌,通过WL培养基观察菌落特征,并结合显微细胞形态及生理生化特性,将115株酵母分为17种类型。从每种类型中挑选一株进行26S rDNA D1/D2区系列测定,通过序列分析及构建系统发育树,进行种属鉴定。结果表明：17类酵母共115株分属于11个属,其中30.43%为Kazachstania酵母、26.96%为毕赤酵母属(Pichia)、17.39%为地霉属(Geotrichum)、4.35%为假丝酵母属(Candida)、3.48%为耶罗威亚酵母属(Yarrowia)、3.48%为丝孢酵母属(Trichosporon)、3.48%为Meyerozyma酵母、2.61%为有孢汉逊酵母属(Hanseniaspora)、2.61%为Wickerhamomyces酵母、2.61%为Apiotrichum酵母、2.61%为棒孢酵母属(Clavispora)。     

发酵馕面团中优势菌群的分离及其在馒头发酵中的应用研究

对新疆地区3份发酵馕面团样品中微生物进行分离、纯化,通过形态观察及分子生物学技术对分离菌株进行鉴定,并通过测定乳酸菌的产酸和酵母菌的产气能力,筛选优良菌株用于发酵馒头的制备,分析其对馒头感官品质及风味物质的影响。结果表明,分离纯化得到36株乳酸菌和51株酵母菌,乳酸菌包括旧金山乳杆菌（Lactobacillus sanfranciscensis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）和粪肠球菌（Enterococcus faecalis）4种;酵母菌包括发酵毕赤酵母（Pichia fermentans）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和膜毕赤酵母（Pichia membranifaciens）3种。植物乳杆菌产酸量最大,为113.55～127.8 g/L;酿酒酵母和发酵毕赤酵母产气较快。发酵毕赤酵母与安琪酵母单独发酵馒头时,在醇类和酯类物质的种类和相对含量上差异较大,风味差异明显;植物乳杆菌与发酵毕赤酵母菌混菌发酵馒头时,随着发酵毕赤酵母添加量增加,可降低馒头中醇类、醛类...     

传统发酵牦牛酸乳中酵母菌的分子生物学鉴定

通过提取羊八井地区传统发酵牦牛酸乳中分离到的36 株酵母菌的基因组DNA,经聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增其26S rDNA并测定序列,将序列输入GenBank中通过基本局部序列检索工具（Basic Local Alignment Search Tool,BLAST）检索确定种属（同源性≥99%）。结果表明：传统发酵牦牛酸乳中酵母菌主要为马克斯克鲁维酵母17 株（47.2%）、酿酒酵母6 株（16.7%）、平常假丝酵母5 株（13.9%）、喜仙人掌毕赤酵母4 株（11.1%）、发酵毕赤酵母3 株（8.3%）,1 株鉴定失败。并构建系统发育进化树结合分子鉴定结果分析酵母菌的遗传多样性。     

浓香型白酒糟醅中可培养酵母18S rDNA全序列的系统学分析

从发酵7d的浓香型白酒发酵酒酷中分离到84株酵母菌,通过形态特征、生理特性检测及18SrDNA分子生物学水平鉴定方法将其归为6个类群,并建立系统发育树。结果表明,样品酒醅中可培养酵母以伊萨酵母属（Issatchenkia）和毕赤酵母属（Pichia）为主,得巴利酵母属（Debaryomyces）和假丝酵母属（Candida）占有相当的比例,其中还有一定数量的其他属种如酵母属（Saccharomyces）和红酵母属（Rhodotorula）。     

新疆自然发酵酸马奶中酵母菌的分离鉴定

从自然发酵酸马奶中分离出25株酵母菌,并对酵母菌进行传统形态学、生理生化特性鉴定。鉴定结果为:12株为克鲁维酵母属Kluyveromyces(8株为马克思克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus,4株为乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis)、1株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、1株为白地霉Galactomyces geotrichum,其他菌株无法推断出。再利用5.8S rDNA序列同源性分析,对25株酵母菌进行分子生物学鉴定,同时对1、2、18、25、27、28号菌株进行系统发育树分析。鉴定结果为:10株单孢酿酒酵母Kazachstania unispora、8株马克思克鲁维酵母K.marxianus、4株乳酸克鲁维酵母K.lactis、1株酿酒酵母S.cerevisiae、1株白地霉G.geotrichum、菌株27疑似新种。     

新疆哈萨克族传统发酵酸马奶中酵母菌的分离鉴定

从新疆南山、水西沟、伊犁昭苏采集的哈萨克族传统发酵酸马奶中共分离得到酵母菌34株。采用传统形态学、生理生化特性方法对酵母菌进行鉴定,鉴定结果为Schizosaccharomyces 1株、Sehizoblastosporion 1株、Torulopsis 1株、Saccharomycodes 1株、Kloechera 9株、Kluveromyces 5株、Dekker 8株、Trichosporon 3株、Hansenula 2株、Brettanomyces 3株。利用5.8S rDNA序列同源性分析和系统发育树对菌株12号进行分子生物学鉴定,鉴定结果为:菌株12与标准菌株HQ396523.1同源性达到96%,为Kluveromyces的Kluveromyces marxianus,与传统鉴定结果一致,表明5.8S rDNA序列分析在酵母菌鉴定上的准确性。     

新疆发酵驼乳中分解植酸盐酵母菌的筛选及鉴定

为发掘和保护新疆牧区传统发酵驼乳中潜在益生酵母菌资源,从新疆伊犁地区不同牧区采集12份传统发酵驼乳样品,通过酵母浸出粉胨葡萄糖（YPD）培养基分离酵母菌,通过富含植酸二钾的培养基初筛及降解植酸盐能力的测定从中筛选可降解植酸盐的酵母菌,通过形态观察、生理生化试验及5.8S rDNA ITS1/ITS4区域序列同源性分析进行菌种鉴定,并测定其耐酸及耐胆盐性能。结果表明,筛选出11株可分解植酸盐的酵母菌,鉴定8株为库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）,2株为白地霉（Geotrichum candidum）,1株为乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）,其中库德毕赤酵母菌BJ9-12在模拟胃液和模拟肠液中的存活率分别为87.79%和81.50%,耐酸及耐胆盐性能较好,且培养48 h时分解植酸盐的透明圈直径达到3.45 cm,在发酵食品中具有良好的应用潜力。     

酵母分离株分子鉴定及其挥发性香气成分检测分析

测定了8类不同食品来源的12株酵母分离株26S rDNA D1/D2序列,与Genbank登陆序列比较分析,12株分离酵母鉴定为:3株酿酒酵母,2株戴尔有孢圆酵母、1株马克斯克鲁维氏酵母、1株喜仙人掌毕赤酵母、1株鲁西坦念珠菌、1株膜噗毕赤酵母、2株Kudriavzevii毕赤酵母,1株疑似新种。选用固相微萃取-气质联用(SPME-GC/MS)方法,完成了各分离株挥发性成分的检测。结果表明,酵母发酵后的香气组分主要为酯类,包括乙酸乙酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、癸酸乙酯等,其中菌株A1发酵后产生多种含量较高的挥发性组分及独有组分己酸乙酯。结果表明,酵母产生的香气组分、含量与酵母分离来源、种类有关,这可能与不同酵母代谢途径的差异相关。     

浓香型白酒发酵旺盛期糟醅中酵母菌菌群研究

充分解析并挖掘浓香型白酒糟醅中的酵母菌株资源,对五粮液发酵旺盛期中的糟醅进行高通量测序以及纯培养。其中通过高通量测序技术共检测出11个种属的酵母菌群,包括:Kazachstania exigua、Saccharomyces cerevisiae、Kazachstania humilis、Pichia kudriavzevii、Zygosaccharomyces bailii、Saccharomycopsis fibuligera、Trichosporon ovoides、Debaryomyces hansenii、Naumovozyma castellii、Pichia manshurica、Geotrichum silvicola。利用7种培养基筛选五粮液发酵旺盛期糟醅中的酵母菌株,通过合并共获得57株纯培养酵母菌株,通过26S rDNA序列鉴定,发现其分属于Pichia kudriavzevii、Saccharomyces cerevisiae、Candida glabrata和Candida rugosa。结果表明:浓香型白酒发酵旺盛期糟醅中的酵母群体多样性丰富,但与高通量测序相比,纯培养法仅能分离到糟醅酵母群体中的少数种属,因此要充分挖掘浓香型白酒糟醅中的酵母菌株资源,还需进一步优化分离、培养方法。     

杨梅贮藏期真菌的分离鉴定及基于ITS序列的聚类分析

目的 分离并鉴定杨梅贮藏期真菌。方法 通过稀释涂布平板分离法以及划线纯化, 从贮藏期杨梅果实中分离、纯化真菌菌种, 并结合传统形态学与ITS (internal transcribed spacer)全序列分析对其进行准确鉴定。结果 最终鉴定出共14株真菌, 其中1株毛霉(Mucor racemosus)、1株白地霉(Geotrichum candidum)、 1株腐皮壳属霉菌(Diaporthe sp.)、1株好食链孢霉(Neurospora sitophila)、3株出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)、4株酵母菌(Pichia kudriavzevii, Pichia terricola, Hanseniaspora opuntiae, Saccharomycopsis crataegensis)以及3株青霉(Penicillium sp., Penicillium expansum, Penicillium herquei)。从进化关系上看有3类显示较近的亲缘关系, 第1类为青霉属, 第2类为出芽短梗霉, 第3类为毕赤酵母。结论 结合传统形态学与ITS全序列分析可对杨梅贮藏期真菌进行更为准确的鉴定。     

新疆传统馕发酵面团中酵母菌的多样性分析

采用平板分离与纯化、26S rDNA D1/D2区域序列测定和系统发育分析方法,对新疆乌鲁木齐、阿勒泰、伊犁、喀什、阿克苏及和田6 个地区民间传统馕面团发酵酵母菌多样性进行了研究。从中分离得到227 株酵母菌,它们隶属于10 个属14 个种：Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces servazzii、Pichia fermentans、Pichia membranifacies、Pichia kudriavzevii、Pichia anomala、Candida humilis、Hanseniaspora uvarum、Torulasporadelbrueckii、Wickerhamomyces anomalus、Cladosporium ramotenellum、Cryptococcus albidus、Kodamaea ohmeri、Issatchenkia orientalis;其中Saccharomyces cerevisiae为优势种,占总分离株的55.51%（126 株）,在系统发育树上形成2 个大分枝4 个小分枝,A1-1分枝由115 株菌株构成,是馕面团发酵的优势品系菌群。研究结果阐明了新疆民间传统馕面团中酵母菌的多样性,为开发利用传统馕面团的酵母菌资源提供了理论依据。