盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌HepG2细胞凋亡的抑制作用

目的: 探讨盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法: 盐酸表柔比星和奥沙利铂单独及联合给药用MTT法测定HepG2细胞的增殖,用Hoechst 33258染色法检测细胞核凋亡情况,用DNA ladder检测DNA的裂解情况。结果: 人肝癌HepG2细胞经奥沙利铂、盐酸表柔比星以及两者联合作用后,在不同时间、不同浓度均能出现细胞抑制作用,并且均呈现剂量-时间依赖效应,与单药组相比,联合用药组抑制率明显增高,q值大部分为 0.85～1.15,呈现明显的相加作用,在(35+5) μg/mL 组作用 24 h,(20+2) μg/mL 组作用48、72 h 时两组实验组q值＜0.85,出现拮抗作用。(25+3) μg/mL 组作用 24 h 为最佳作用时间和作用浓度。结论: 奥沙利铂及盐酸表柔比星对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合作用表现为相加作用,其机制需进一步研究。     

5-氟尿嘧啶配伍姜黄素抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的: 研究5-氟尿嘧啶(5-FU)与姜黄素联合用药对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用及相关机制。方法: 采用MTT法检测5-FU和姜黄素单独及联合用药后细胞活力,并计算5-FU与姜黄素联合用药后q值;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;PI单染流式细胞仪分析细胞周期的变化;Annexin V/PI 双染流式细胞仪分析凋亡率;Western blotting法检测Caspase-9、Caspase-3蛋白变化。结果: MTT结果表明,单独给予5-FU和姜黄素在一定的浓度范围内能够抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖;联合用药具有协同作用;JC-1染色结果显示单独给药组的SGC-7901细胞线粒体膜电位有所降低,而联合用药组与单独给药组相比则膜电位明显降低;PI单染检测发现50 μmol/L姜黄素和 20 μmol/L 5-FU作用于SGC-7901细胞 24 h 后,细胞周期阻滞于G₂/M期;AV/PI双染经流式细胞仪检测后发现,5-FU与姜黄素单独和联合作用均能诱导SGC-7901细胞凋亡,且联合用药组与单独用药组相比细胞凋亡率增加;Western blotting法实验结果表明,单独给药组中Caspase-9和Caspase-3蛋白表达上调,而联合用药组蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论: 5-FU与姜黄素联合作用于人胃癌SGC-7901细胞具有协同效应,其作用机制可能与诱导细胞活性氧产生,细胞线粒体损伤和阻滞细胞周期而诱导细胞凋亡有关。     

雷替曲塞或5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂一线治疗晚期胃癌的对比性研究

目的: 观察雷替曲塞联合奥沙利铂(A组)与5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂(B组)一线治疗晚期胃癌的近期疗效和毒副反应。方法: 晚期胃癌43例,具体用法:A组(21例):雷替曲塞 3 mg/m² 静滴,第1 天;奥沙利铂 130 mg/m² 静滴,第1 天。B组(22例):亚叶酸钙 200 mg/m² 静滴,第1~5天;氟尿嘧啶 375 mg/m² 静滴,第1~5 天;奥沙利铂 130 mg/m² 静滴,第1 天。两方案均3 周为1 周期。每3 个周期评价疗效,直至疾病进展或毒副反应不能耐受,最多化疗6 周期。结果: 两组的有效率(RR)分别为 47.6%和 31.8%(P=0.289),A组中位无进展生存期(PFS)9.8个月,明显优于B组的 6.6 个月,两组对比差异有统计学意义(χ²=3.928,P=0.047)。两组方案的恶心呕吐及手足综合征反应差异具有统计学意义(P＜0.05),余毒副反应发生率近似。结论: 与5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂(B组)方案相比,雷替曲塞联合奥沙利铂(A组)方案一线治疗晚期胃癌可延长患者的无进展生存期(PFS),且耐受性较好。     

当归挥发油联合卡铂对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的: 探讨当归挥发油与卡铂联用对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法: MTT比色法检测两药单用及联用对A549细胞的体外杀伤活性;用流式细胞术检测A549细胞凋亡;AO/BE双荧光染色法观察A549细胞凋亡。结果: 当归挥发油单独应用及与卡铂合用对A549细胞的增殖均具有浓度依赖性抑制作用,两药联用IC50较单用IC50下降,说明当归挥发油对卡铂抑制A549细胞增殖的作用具协同效应。流式细胞术检测结果表明,当归挥发油单用及与卡铂合用均可诱导A549细胞凋亡、坏死,两药合用后细胞凋亡、坏死率显著升高。AO/BE双荧光染色法结果显示,联合用药组细胞凋亡、坏死率上升。结论: 当归挥发油与卡铂具有协同诱导A549细胞凋亡的作用。     

皖南蝮蛇毒抑瘤组分I对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠体内抑制作用的研究

目的:研究皖南蝮蛇毒抑瘤组分I(Agkistrodon halys venom antitumor component I,AHVAC-I)对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠的体内抑制作用及瘤细胞增殖活性变化,并初步探讨其作用机制。方法: 取生长状态良好的浓度为1×10⁷个/mL的SGC-7901人胃癌细胞悬液 0.1 mL 接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤后随机分为模型组、紫杉醇阳性对照组、AHVAC-I高、中、低剂量组,隔日连续给药5次,定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,HE染色观察瘤体形态学变化,免疫组化SP法检测Ki-67增殖指数,原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果: AHVAC-I在 1.0 mg/kg 剂量时对SGC-7901细胞有抑制作用,抑瘤率达 42.2%;在 3.0 mg/kg 剂量时有显著抑制作用,抑瘤率达 78.5%。实验组肿瘤内Ki-67阳性细胞数量下降,凋亡细胞明显增多。结论:AHVAC-I能明显抑制裸鼠体内SGC-7901人胃癌细胞的生长,其作用机制可能与诱导胃癌细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。     

扶正康复合剂联合顺铂抑制胃癌SGC7901细胞荷瘤裸鼠肿瘤增殖作用的实验研究

目的:探讨扶正康复合剂联合顺铂抑制小鼠移植性胃癌的增殖作用。方法:将28只裸鼠随机分为4组：模型对照组,扶正组,顺铂组,顺铂+扶正组,每组7只。皮下注射胃癌SGC7901细胞株,建立胃癌荷瘤裸鼠模型,顺铂及扶正康复合剂连续给药7 d,称取体重及瘤重,计算抑瘤率,并利用PCR法和免疫组化法分别检测瘤体内细胞凋亡靶点（Bcl-2、Bax、Survivin）和血管新生促进因子（VEGF）的mRNA和蛋白的表达情况。结果:在抑瘤率方面,与模型对照组相比,各组裸鼠瘤重均有不同程度的减轻（P<0.05）,且顺铂+扶正组抑瘤率最高（66.67%）。在细胞凋亡方面,扶正康复合剂联合顺铂能明显上调Bax的表达,下调Bcl-2、Survivin和VEGF的表达（P<0.05）。结论:扶正康复合剂联合顺铂具有抑制肿瘤增殖的作用。     

四君子汤及其拆方对胃癌SGC-7901侧群细胞增殖、侵袭能力的影响

目的: 探讨含四君子汤及其拆方的药物血清对胃癌细胞株SGC-7901侧群细胞（side population,SP）增殖、侵袭能力的影响。方法: 制作含四君子汤及其拆方的兔药物血清;流式细胞仪分选体外培养的胃癌SGC-7901细胞株中的SP;平板克隆实验观察含四君子汤及其拆方的药物血清干预后SP细胞与非侧群细胞（non side population,NSP）体外增殖能力的变化;Transwell侵袭实验观察含四君子汤及其拆方的药物血清干预后SP细胞与NSP细胞侵袭能力的变化;比较药物血清干预后SP与NSP细胞的不同。比较四君子汤与其各拆方对SP与NSP细胞干预能力的强弱。结果: 胃癌SGC 7901细胞株中分选出SP,比例为（2.68±0.58）%;含四君子汤及其拆方药物血清干预后,SGC-7901 SP与NSP细胞体外增殖、侵袭能力均受到抑制（P<0.05）;相同干预条件对SGC-7901 SP与NSP细胞体外增殖、侵袭能力的影响有差异（P<0.05）。四君子汤的抑制作用强于各拆方。结论: 胃癌SGC-7901细胞株中存在且能成功分选出SP;含四君子汤及其拆方的药物血清能够抑制胃癌SGC-7901细胞株SP的体外增殖、侵袭能力;药物血清干预后,SP细胞的增殖、侵袭能力仍强于NSP。四君子汤对SP、NSP细胞的抑制作用均强于各拆方。     

奥沙利铂及其手性异构体的高效液相色谱分析

研究了用高效液相色谱(HPLC)分析奥沙利铂及其左旋异构体的方法.采用反相手性色谱柱CHIRALCEL OD-RH(甲苯氨甲酰纤维素衍生化合物键合硅胶,150mm×Φ4.6mm,5μm),流动相为乙腈∶乙醇(60∶40,V/V),甲醇为样品溶剂,检测波长250nm.本方法线性相关,奥沙利铂及左旋异构体的相关系数均为0.9997,最小检出限分别为:6.08μg/L、3.04μg/L,回收率分别是:98.64%～101.31%、98.76%～100.13%,奥沙利铂与左旋异构体的分离度＞2.本方法与文献方法相比具有手性色谱柱使用寿命长、分析耗时短、成本低、效率高等优点.     

OCTN2基因多态性影响结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性

目的：研究OCTN2基因多态性是否影响OCTN2的表达和功能,以及结直肠癌细胞系SW480对奥沙利铂敏感性。方法：构建OCTN2基因4种突变（F17L、E317K、S467C和P478L）转染细胞系。Real-time RT-PCR及Western blot检测OCTN2 mRNA和蛋白水平的表达。HPLC检测细胞内奥沙利铂含量。MTS法检测细胞活性。结果：所有突变型OCTN2 mRNA和蛋白表达水平与野生型表达无统计学差异。E317K和S467C细胞系对奥沙利铂摄取（Vmax和Km）与野生型相比无差异（P>0.05）,F17L的Vmax下降到66.4%,而Km值增加到120.3%,P478L的Vmax增加到132.6%,Km值降低到82.2%,与野生型相比有统计学差异（P<0.05）。所有过表达OCTN2细胞的IC50值显著降低。与SW480-OCTN2转染细胞系比较,没有转染的SW480细胞和F17L细胞系的IC50值分别升高175%和147%,而P478L细胞则下降到76.9%,有统计学差异（P<0.05）。E317K和S467C的IC50值无明显改变（P>0.05）。结论：OCTN2转运体基因F17L和P478L错义突变可以改变OCTN2对奥沙利铂的摄取,从而影响OCTN2稳定表达细胞系对奥沙利铂的敏感性。     

奥沙利铂治疗大鼠坐骨神经线粒体呼吸功能及抗氧化酶活性改变的研究

目的: 观察奥沙利铂治疗大鼠坐骨神经线粒体呼吸功能的改变及抗氧化酶活性的变化。方法: 选取SD雄性大鼠36只,用5%葡萄糖将奥沙利铂溶液稀释到 2 mg/mL,连续 5 d(d 0～d 4)腹腔注射 2 mg/kg;对照组大鼠接受对照液5%葡萄糖注射。并于 d 0、d 8、d 15、d 22、d 29、d 35 及 d 41 测定机械异常痛敏(4 g VFH)和机械痛敏(15 g VFH)。取 d 27～d 35 并确认存在异常痛敏和机械痛敏的大鼠及对照组大鼠各9只,处死大鼠并取坐骨神经,将神经制作成切碎的纤维细丝(M&T)标本,将标本放入呼吸测定仪里,分别加入底物并测定呼吸比率变化;再取模型和对照组大鼠各9只,取坐骨神经并提取线粒体,分别测定抗氧化酶硫氧还原蛋白还原酶(TrR)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性。结果: 与对照组大鼠比较,注射奥沙利铂大鼠在疼痛高峰期(d 27～d 35)呼吸比率明显下降(下降16%),奥沙利铂治疗大鼠线粒体加入细胞色素C后呼吸明显增加;而且TrR(下降23%)和GPx(下降 15.4%)的活性明显下降。结论: 奥沙利铂治疗大鼠坐骨神经线粒体功能受损,引起线粒体呼吸功能失调,预示损伤存在于复合物I或复合物II;抗氧化酶活性下降可能是线粒体呼吸功能降低的另一个原因。     

胃瘤安不同组方对人胃癌SGC-7901增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的: 通过观察胃瘤安(全方、三棱莪术方、无三棱莪术方)小、中、大3个剂量作用于人胃癌SGC-7901细胞24、48 h,探讨其对胃癌细胞的生长抑制作用及细胞周期和凋亡的影响,并对3种组方的胃瘤安进行比较。方法: 用RPMI1640 培养液对人胃癌细胞SGC-7901进行传代培养,采用MTT法检测胃瘤安不同组方对SGC-7901的生长抑制作用,采用流式细胞术检测胃瘤安不同组方对SGC-7901细胞凋亡及周期的影响。结果: 胃瘤安3种不同组方均可抑制SGC-7901细胞增殖;3种不同组方的胃瘤安均可促进正常的SGC-7901细胞凋亡,细胞周期分析提示胃瘤安(全方)、胃瘤安(无三棱、莪术)将细胞SGC-7901阻滞于S期,胃瘤安(三棱、莪术)将SGC-7901细胞阻滞于G₀ /G₁期,效应均呈浓度和时间依赖性。结论: 胃瘤安3种不同组方均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,可将细胞阻滞在S和G₀/G₁期,其中以胃瘤安(全方)、胃瘤安(无三棱、莪术)效果最为明显。     

肉桂油活性成分(E)-肉桂醛对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肉桂油主要活性成分(E)-肉桂醛对人结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:采用CCK-8法测定(E)-肉桂醛对LOVO细胞增殖活性的影响。平板克隆形成实验检测(E)-肉桂醛对LOVO细胞克隆形成能力的影响。AnnexinV-PE/7-AAD双染色法测定(E)-肉桂醛对细胞凋亡的影响。Western blot分析细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。结果:(E)-肉桂醛能显著抑制结肠癌细胞LOVO的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05),且细胞增殖抑制作用随时间的延长和剂量的增加而增强。与对照组相比(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后,细胞凋亡率升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Bax、Caspase-3表达水平明显增高(P<0.05)。结论:(E)-肉桂醛能抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能是通过增加Bax、Caspase-3的活性及抑制Bcl-2的表达来实现的,(E)-肉桂醛是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

四君子汤对SGC-7901侧群细胞裸鼠的抑瘤作用及其机制

目的:探讨四君子汤对胃癌细胞株SGC-7901侧群（SP）细胞、非侧群（NSP）细胞裸鼠成瘤能力的影响。方法:常规培养人胃癌细胞株SGC-7901后进行流式细胞仪分选出SP及NSP细胞,SP细胞比例约为1.9%,建立裸鼠成瘤模型,药物干预组给予四君子汤灌胃连续干预。30 d后处理所有小鼠,绘制肿瘤生长曲线,测定肿瘤生长抑制率,TUNEL法检测凋亡细胞。 结果:SP全方组、NSP全方组及其各自模型组平均肿瘤体积分别为(1 348.40±103.98) mm3、(628.99±98.87) mm3;(3 307.76±491.44) mm3、(2 202.87±67.80) mm3（P＜0.05）,SP及NSP全方组抑瘤率为54.69%、60.19%,较模型组有统计学差异（P＜0.05）;侧群细胞与非侧群组之间成瘤存在统计学差异（P＜0.05）。TUNEL结果显示药物组出现较多凋亡细胞,SP群全方组、NSP全方组的凋亡率分别为20.21%、16.53%,明显高于模型组（P＜0.05）。 结论:四君子汤可抑制裸鼠人胃癌SGC-7901 SP细胞瘤体生长,其抑瘤机制可能与肿瘤细胞凋亡有关。     

内质网相关降解蛋白Derlin-1通过抑制ERK信号通路抗人结肠癌细胞增殖

目的: 探讨内质网相关降解蛋白Derlin-1对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法: 采用sh-Derlin-1-pGPU6/Neo质粒转染构建瞬时敲除Derlin-1基因的SW480细胞株,应用实时定量PCR和免疫印迹验证Derlin-1基因和蛋白的低表达,采用CCK8法检测SW480细胞增殖情况,流式细胞仪检测SW480细胞凋亡情况,Western blot检测SW480细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达量和ERK磷酸化水平。结果: 使用pGPU6/Neo载体能够稳定地抑制SW480细胞中Derlin-1的表达,sh-Derlin-1组细胞增殖率相对于对照组显著降低、凋亡率显著升高（P<0.05）,Western blot实验结果发现sh-Derlin-1组细胞中Bcl-2表达量显著降低、Bax表达量显著升高及ERK磷酸化水平显著降低,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论: Derlin-1表达的降低能抑制ERK信号通路活化,进而诱导人结肠癌SW480细胞凋亡、抑制增殖。     

miR-142-5p通过DNA甲基转移酶1抑制胃癌细胞增殖迁移的机制研究

目的:探究miR-142-5p在胃癌（GC）细胞中的作用并研究其机制。方法:qRT-PCR检测miR-142-5p表达;CCK-8和Transwell实验研究miR-142-5p对细胞增殖及迁移的影响;双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-142-5p的作用靶点。结果:miR-142-5p在GC组织及细胞系中的表达分别低于人正常胃组织及胃正常上皮黏膜细胞系GES-1,且其表达水平与胃癌肿瘤大小及淋巴结转移密切相关。在MKN28细胞中过表达miR-142-5p及在BGC-823细胞中沉默miR-142-5p能够分别抑制及促进胃癌细胞的增殖和迁移。DNA甲基转移酶1（DNMT1）是miR-142-5p直接作用靶点,miR-142-5p能够直接调节DNMT1的表达,并通过DNMT1调控胃癌细胞增殖及迁移。结论:miR-142-5p在GC中的表达降低,并在胃癌细胞中发挥抑癌基因的作用,能够通过抑制DNMT1来抑制胃癌细胞的增殖和迁移。     

硝普钠抑制K562 细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究

目的: 观察外源性一氧化氮(NO) 供体硝普钠对K562 细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用。方法: 将不同浓度的硝普钠与K562 细胞在体外培养, 观察其作用时间效应和剂量效应;用活细胞计数、MTT 法观察硝普钠对K562 细胞增殖的抑制作用;用DNA凝胶电泳、DNA 含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA 片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾(PFC) 对照组和空白对照组。结果: NO 能抑制K562 细胞生长, 并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系, 大部分细胞阻滞于G₀/G₁ 期;K562 细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变, DNA 片断化, 亚G₁ 峰检出并显著增加, Annexin V/PI 和DNA 片段原位末端标记表达增加等均证实NO 能诱导K562 细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论: NO 通过阻滞G₀/G₁期细胞显著抑制K562 细胞的增殖, 并有很强的致凋亡作用。     

miR-222、MBD2在胃癌患者中的表达及对铂类化疗敏感性的影响

目的:研究miRNA-222与甲基化CpG结合结构蛋白2（MBD2）水平在胃癌组织中的表达水平及其对铂类化疗敏感性的影响。方法:选择2016年2月至2017年5月在本院就诊的75例原发性胃癌患者作为研究对象。检测患者癌组织及癌旁组织中miR-222、MBD2表达水平;分析miR-222、MBD2水平与胃癌临床病理参数的相关性。将miR-222 inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞中miR-222和MBD2的表达水平,MTT法、流式细胞术分别检测转染对细胞增殖、凋亡的影响。结果:胃癌组织中miR-222的阳性表达率显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中miR-222相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中MBD2的阳性表达率显著低于癌旁组织（P<0.05）。miR-222及MBD2表达水平与分化程度、TNM分期有明显相关性（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组SGC-7901细胞中miR-222表达水平均显著低于空白对照组（Control组）和miR-NC组（NC组）（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞中MBD2 mRNA和蛋白表达水平显著高于Control组和NC组（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞的增殖率显著低于Control组和NC组（P<0.05）,且miR-222 inhibitor+顺铂（Cisplatin,CDDP ）组的细胞增殖率显著低于miR-222 inhibitor组及CDDP 组,细胞凋亡率显著高于miR-222 inhibitor组及CDDP 组（P<0.05）,且与CDDP联合运用能够更明显地抑制肿瘤细胞的增殖率,促进细胞的凋亡。结论:miR-222在胃癌组织中表达明显上调,MBD2显著下调,其表达高低与胃癌分化程度、TNM分期有明显相关性。miR-222可增强 CDDP 对胃癌的化疗敏感性,其可能通过抑制胃癌中的靶基因MBD2发挥作用。