顺铂与唑来膦酸序贯应用抑制肺癌细胞增殖的研究

目的: 探讨顺铂与唑来膦酸序贯联合应用对人肺巨细胞癌细胞株PLA-801D的生长抑制作用。方法: MTT法测定顺铂与唑来膦酸不同序贯方式处理后细胞生长的抑制率，并通过流式细胞术分析不同处理组细胞周期的变化。结果: 顺铂和唑来膦酸均能够抑制肿瘤细胞的生长，并在一定给药浓度范围内具有剂量依赖效应。两药联合应用对细胞生长抑制具有协同效应，其中以顺铂给药24 h后序以唑来膦酸处理对细胞生长的抑制效果最佳。顺铂与唑来膦酸序贯方式的改变，引起G0/G1期细胞比例下降，S期细胞比例显著提高。结论: 先顺铂后唑来膦酸的联合给药方式对肺癌细胞的生长抑制作用最强，不同序贯应用方式导致细胞生长抑制率的差异与细胞周期的变化具有一定的相关性。     

塞来昔布联合放射治疗对异位裸鼠人鼻咽癌模型中肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的: 探讨塞来昔布联合放射治疗对异位裸鼠人鼻咽癌模型中肿瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法: 建立裸鼠人鼻咽癌皮下移植模型,成瘤后40只裸鼠随机分成4组,即对照组、塞来昔布组、放射治疗组、联合组（塞来昔布与放射治疗）,观察肿瘤大小,计算抑瘤率;采用RT PCR方法考察肿瘤中COX-2的mRNA表达,并用免疫组化法以Ki-67为指标测肿瘤细胞增殖水平,末端脱氧核苷转移酶标记法（TUNEL）测凋亡细胞。结果: 对照组、塞来昔布组、放射治疗组、联合组瘤体体积分别为（1880±358）、（1574±265）、（1258±262）、和（881±197）mm³;塞来昔布组、放射治疗组、联合组抑瘤率分别为16%、33%和53%。四组中Ki-67阳性率分别为44%、29%、22%和11%;肿瘤细胞凋亡指数（AI）分别为9%、22%、30%和38%;塞来昔布组、联合组肿瘤组织中COX-2 mRNA表达显著低于对照组和放射治疗组。 结论: 塞来昔布可显著抑制裸鼠人鼻咽癌模型中肿瘤细胞COX-2 mRNA表达,抑制肿瘤细胞Ki-67表达,诱导肿瘤细胞凋亡,与放射治疗联合应用可提高抗肿瘤效果。     

扶正康复合剂联合顺铂抑制胃癌SGC7901细胞荷瘤裸鼠肿瘤增殖作用的实验研究

目的:探讨扶正康复合剂联合顺铂抑制小鼠移植性胃癌的增殖作用。方法:将28只裸鼠随机分为4组：模型对照组，扶正组，顺铂组，顺铂+扶正组，每组7只。皮下注射胃癌SGC7901细胞株，建立胃癌荷瘤裸鼠模型，顺铂及扶正康复合剂连续给药7 d，称取体重及瘤重，计算抑瘤率，并利用PCR法和免疫组化法分别检测瘤体内细胞凋亡靶点（Bcl-2、Bax、Survivin）和血管新生促进因子（VEGF）的mRNA和蛋白的表达情况。结果:在抑瘤率方面，与模型对照组相比，各组裸鼠瘤重均有不同程度的减轻（P<0.05），且顺铂+扶正组抑瘤率最高（66.67%）。在细胞凋亡方面，扶正康复合剂联合顺铂能明显上调Bax的表达，下调Bcl-2、Survivin和VEGF的表达（P<0.05）。结论:扶正康复合剂联合顺铂具有抑制肿瘤增殖的作用。     

胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬的影响及其作用机制研究

目的:探讨胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬及PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法:50只裸鼠随机分为5组,每组10只,分为模型组、3-MA组、胡黄连苷Ⅱ高剂量（100 mg/kg）、中剂量(10 mg/kg)、低剂量(1 mg/kg)组。体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,随后移植于裸鼠体内,建立MCF-7乳腺癌皮下移植瘤模型。测量各组裸鼠体质量;测量乳腺肿瘤体积并计算出肿瘤抑制率;HE染色法观察肿瘤细胞形态;TUNEL法检测MCF-7细胞凋亡情况;Western blot检测Beclin1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果:胡黄连苷Ⅱ能显著抑制乳腺癌裸鼠体质量的降低（P<0.01）;提高肿瘤抑制率（P<0.01）;改善病理组织结果;促进MCF-7细胞凋亡;增加Beclin1蛋白的表达;降低PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达（P<0.01）。结论:胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞具有显著抑制作用,其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR通路从而增强MCF-7细胞自噬有关。     

CL2MDP脂质体的制备及对小鼠肝脏Kupffer细胞的作用

目的: 建立制备氯磷酸二钠（CL₂MDP）脂质体的方法,并观察其剔除小鼠肝脏Kupffer细胞的效果。方法: 采用脂质体包裹CL₂MDP,分光光度计检测包封率;并给BALB/c小鼠尾静脉注射（0.1 mL/10 g）;3 d 后,免疫组化检测小鼠Kupffer细胞的数量(抗小鼠F4/80表达阳性),流式细胞仪检测分离后肝脏贴壁细胞表达的CD11c,数据统计分析。结果: CL₂MDP包封率( %) 为 20.1±2.9;免疫组化结果,小鼠Kupffer细胞数量在PBS组为（16.2±1.8）个,CL₂MDP脂质体组为（4.3±1.1）个（P<0.05）;流式细胞仪检测分离后肝脏贴壁细胞,PBS组细胞高表达CD11c(82.3±1.8)％,而CL₂MDP脂质体为(7.3±0.9)％（P＜0.01）。结论: 本研究建立了CL₂MDP脂质体剔除小鼠肝脏Kupffer细胞的模型,为进一步研究Kupffer细胞功能,提供新的手段。     

多糖染料木素复合多糖脂质体的制备及其抗前列腺癌机制的研究

目的:通过制备多糖染料木素复合多糖（genistein combined polysaccharide，GCP）脂质体，分别从体内和体外实验评估GCP脂质体用于治疗前列腺癌潜在应用价值，促进纳米技术在前列腺癌化疗中的应用。方法:采用乙醇注入法制备GCP脂质体。通过细胞增殖检测和细胞周期分析技术以及建立前列腺癌荷瘤动物模型等，从体外和体内验证GCP脂质体抗肿瘤效果。结果:GCP脂质体增强了GCP对雄激素敏感的LNCaP细胞增殖的抑制作用，增强了GCP诱导雄激素敏感的LNCaP细胞的凋亡作用。同时，GCP脂质体增强了GCP对肿瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。结论:GCP脂质体相较于GCP，对雄性激素敏感的人类前列腺癌细胞有更好的抗肿瘤效果。     

乳腺癌组织中CD73表达及其与临床病理特征的相关性研究

目的: 探讨乳腺癌组织中CD73表达及其与临床病理特征的相关性。方法: 对2015年4月至2016年10月期间100例乳腺癌的肿瘤组织及60例正常乳腺组织石蜡标本进行切片,采用免疫组化法对切片进行CD73染色检测;同时采用免疫组化法检测乳腺组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、癌基因人表皮生长因子受体（HER-2）、P53和Ki-67表达情况。分析CD73表达情况及与组织Ki-67、P53、ER、PR、HER-2表达相关性,与临床病理特征的相关性。结果: 乳腺癌组织中CD73高表达发生率为76.0%,正常乳腺组织中CD73高表达率为21.7%,差异有统计学意义（P<0.05）;CD73高表达与年龄、组织学分级、肿瘤大小、肿瘤位置等临床病理特征无显著相关（P>0.05）,CD73高表达与TNM分期、淋巴结转移、PR、ER、HER-2、Ki-67、P53阳性表达密切相关（P<0.05）;Ki-67、P53、PR、HER 2阳性表达是CD73高表达的影响因素（OR分别为：8.233,5.091,4.670,3.000）,ER阳性表达是CD73高表达的保护因素（OR为：0.291）。结论: 乳腺癌组织中CD73高表达,且与TNM分期、淋巴结转移、PR、HER-2、Ki-67、P53阳性表达相关,对临床治疗及预后判断具有重要意义。     

负载MAGE-A3抗原的树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共培养对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响

目的：探究负载黑色素瘤相关抗原基因A3（MAGE-A3）的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响。方法：采集人外周血分离单个核细胞,利用细胞因子分别诱导生成DC和CIK;MAGE-A3孵育DC后与CIK共培养,流式细胞仪检测DC-CIK、MAGE-A3-DC-CIK的表型;流式细胞仪分选子宫内膜癌细胞系Ishikawa的CD133+干细胞,以子宫内膜癌干细胞作为靶细胞,分别以CIK、DC-CIK及MAGE-A3-DC-CIK作为效应细胞,MTT法检测效靶比为10∶1、20∶1、40∶1的细胞杀伤活性,ELISA法检测联合培养细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-17水平,Annexin V-FITC/PI双染法检测子宫内膜癌干细胞凋亡;建立子宫内膜癌干细胞移植瘤裸鼠模型,尾静脉注射DC-CIK或MAGE-A3-DC-CIK,观察裸鼠肿瘤生长情况,每隔2 d测量瘤体大小,21 d后取肿瘤组织,电子天平称重,HE染色观察肿瘤组织病理形态学变化,免疫组织化学染色检测肿瘤组织内Ki-67表达。结果：分离获得细胞表面CD80、CD86、HLA-DR表达分别达到88%、86%和90%的DC;MAGE-A3-DC-CIK组细胞表面CD8+CD3+、CD56+CD3+比例均高于DC-CIK组（P<0.01）;经磁珠分选后获得CD133+细胞比例高达90.23%的子宫内膜癌干细胞;与CIK组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组在不同效靶比下对子宫内膜癌干细胞的杀伤能力升高,细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-12及IL-17的分泌水平升高,培养液上清处理的子宫内膜癌干细胞凋亡率增加,差异均具有统计学意义（P<0.01）;同时,与对照组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组移植瘤裸鼠的肿瘤体积小,肿瘤重量轻,肿瘤组织内细胞稀疏,Ki-67阳性细胞率减小,差异均具有统计学意义（P<0.01）。 结论：负载MAGE-A3的DC与CIK联合培养能促进CIK成熟,提高对子宫内膜癌干细胞的杀伤性,并抑制移植瘤裸鼠的恶性进展。     

青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7血管生成和肿瘤浸润作用研究

目的: 观察青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7血管生成及浸润转移的抑制作用。方法: 建立人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤模型,给予不同剂量青蒿琥酯治疗并观察其对移植瘤的抑制作用;用免疫组化检测移植瘤组织细胞中VEGF、HIF-1α、uPA、E-cadherin蛋白表达和Western blot检测移植瘤组织细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果: 青蒿琥酯低、高剂量组抑瘤率分别为(24.39±10.20) %、(40.24±7.02 ) %;免疫组化结果显示,与生理盐水组比较,青蒿琥酯低、高剂量组VEGF、HIF-1α蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05); uPA和E-cadherin蛋白在生理盐水组和青蒿琥酯低、高剂量组中的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),HIF-1α/VEGF之间表达呈正相关(r=0.983,P=0.000);Western blot 结果显示,青蒿琥酯低、高剂量组中VEGF、HIF-1α蛋白下调,表达量低于生理盐水组,青蒿琥酯高剂量组的蛋白表达量最低。HIF-lα与VEGF蛋白表达之间存在一致性。结论: 青蒿琥酯可显著抑制乳腺癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抗肿瘤血管及抑制肿瘤侵袭相关。     

睑板腺癌中MMP-2的表达及其临床意义

目的: 探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metallop roteinase-2,MMP-2)在睑板腺囊肿和睑板腺癌组织中的表达差异及其与睑板腺癌临床病理特征的关系和临床意义。方法: 采用免疫组化SP法检测睑板腺囊肿和睑板腺癌组织中MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,以CD34标记检测肿瘤内的微血管密度(microvessel density, MVD),分析MMP-2与临床病理因素、VEGF、MVD的关系。结果: MMP-2在睑板腺癌组织中阳性表达率高于睑板腺囊肿(56% vs 20%),差异具有统计学意义(P﹤0.05),而VEGF表达在睑板腺癌和睑板腺囊肿中差别无统计学意义;MMP-2蛋白表达与肿瘤复发和局部浸润有关 (P﹤0.05),与患者年龄、组织学分级、病理类型和病程无关 (P﹥0.05)。MMP-2阳性的肿瘤组织内MVD明显高于MMP-2阴性肿瘤(P﹤0.05),VEGF的表达与MMP-2无相关性(r=-0.049,P=0.748)。结论: MMP-2在睑板腺癌中高表达,可能通过非VEFG依赖途径促进肿瘤的血管生成,进而参与肿瘤浸润和复发。     

桑黄多糖调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制肝癌腹水荷瘤小鼠及对化疗的减毒增效作用

目的:研究桑黄多糖通过调控PI3K/AKT/mTOR通路对肝癌腹水荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用。方法:SPF级雄性昆明种小鼠90只,随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、桑黄多糖组及桑黄多糖+环磷酰胺组。制备肝癌腹水荷瘤小鼠,各给药组分别给予30 mg/kg的环磷酰胺或（和）200 mg/kg的桑黄多糖,灌胃给药。正常组及模型组灌胃10 mL/kg的生理盐水。观察小鼠抑瘤率、肝脏、脾脏等指数、肿瘤组织内VEGF与炎性因子含量、PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达。结果:环磷酰胺组、桑黄多糖组及桑黄多糖+环磷酰胺组小鼠体质量、瘤体质量、肿瘤组织内血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素（IL）-6、PI3K、AKT及mTOR磷酸化水平均低于模型组,IL-1β水平高于模型组;桑黄多糖+环磷酰胺组小鼠体质量、抑瘤率、肿瘤组织内VEGF、TNF-α、IL-6、PI3K、AKT及mTOR磷酸化水平高于桑黄多糖组及环磷酰胺组,瘤体质量及IL-1β水平低于桑黄多糖组及环磷酰胺组(P<0.05)。结论:桑黄多糖联合环磷酰胺可有效抑制肝癌腹水荷瘤小鼠肿瘤的增殖,发挥减毒增效作用,其机制可能与下调PI3K/AKT/mTOR通路的表达有关。     

华蟾素对肺癌NCI-A549移植瘤裸鼠的抑制作用及机制研究

目的: 研究华蟾素抗肺癌细胞NCI-A549的抗肿瘤活性及机制。方法: 40只小鼠被随机分为4组：正常组、模型组、华蟾素组和顺铂组,检测各组小鼠的体质量变化、抑瘤率、血液和肝肾功能,应用Western blot分析凋亡相关蛋白表达情况。结果: 华蟾素可显著抑制A549移植瘤的生长,对小鼠血液及肝肾功能无明显影响,各组抑瘤率分别为58.0%和82.3%,Western blot结果显示华蟾素可以显著上调Bax/Bcl-2的表达,促进cleaved-Casp3和cleaved-PARP的表达并抑制p-AKT(ser473)的表达。结论: 华蟾素可以显著抑制肺癌A549移植瘤的生长,其分子机制可能与抑制PI3K/AKT通路的活化,从而促进肿瘤细胞凋亡相关。     

西妥昔单抗联合顺铂对鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤生长作用的影响

目的:探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)特异性单抗西妥昔单抗单药及与顺铂联合应用对鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的作用机制。方法:将鼻咽癌细胞HONE1制成细胞悬液后接种于裸鼠皮下,待成瘤后将裸鼠随机分入4个处理组:生理盐水组、西妥昔单抗组、顺铂组及两药联合组。定期测量每只裸鼠肿瘤最大径和最小径,计算肿瘤体积。用药结束后,处死裸鼠,取出肿瘤组织,称重,计算抑瘤率。用免疫组化方法检测肿瘤组织中磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和人磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达。结果:与生理盐水组相比,西妥昔单抗单药组肿瘤体积变化及治疗后平均瘤重差异均无统计学意义,顺铂单药组及两药联合组均有抑瘤效应,以两药联合组抑瘤效果尤为显著。免疫组化显示肿瘤组织AKT和ERK磷酸化水平在顺铂处理组上调,而在西妥昔单抗单药及联用组则较低。结论:西妥昔单抗单药对HONE1鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤的生长无明显影响,但其与顺铂联用可增加顺铂的抑瘤作用。     

四君子汤对SGC-7901侧群细胞裸鼠的抑瘤作用及其机制

目的:探讨四君子汤对胃癌细胞株SGC-7901侧群（SP）细胞、非侧群（NSP）细胞裸鼠成瘤能力的影响。方法:常规培养人胃癌细胞株SGC-7901后进行流式细胞仪分选出SP及NSP细胞，SP细胞比例约为1.9%，建立裸鼠成瘤模型，药物干预组给予四君子汤灌胃连续干预。30 d后处理所有小鼠，绘制肿瘤生长曲线，测定肿瘤生长抑制率，TUNEL法检测凋亡细胞。 结果:SP全方组、NSP全方组及其各自模型组平均肿瘤体积分别为(1 348.40±103.98) mm3、(628.99±98.87) mm3；(3 307.76±491.44) mm3、(2 202.87±67.80) mm3（P＜0.05），SP及NSP全方组抑瘤率为54.69%、60.19%，较模型组有统计学差异（P＜0.05）；侧群细胞与非侧群组之间成瘤存在统计学差异（P＜0.05）。TUNEL结果显示药物组出现较多凋亡细胞，SP群全方组、NSP全方组的凋亡率分别为20.21%、16.53%，明显高于模型组（P＜0.05）。 结论:四君子汤可抑制裸鼠人胃癌SGC-7901 SP细胞瘤体生长，其抑瘤机制可能与肿瘤细胞凋亡有关。     

4-甲基哌嗪-1-二硫代甲酸-(3-氰基-3, 3-二苯基)丙酯盐酸盐在小鼠的抗肿瘤作用

目的: 观察4-甲基哌嗪-1-二硫代甲酸-(3-氰基-3, 3-二苯基) 丙酯盐酸盐(Hyd) 对小鼠移植性肿瘤的抑制作用, 以确定该化合物的应用前景。方法: 采用小鼠肉瘤180 和肝癌22 及人胃癌异种移植裸鼠肿瘤模型, 观察Hyd 对小鼠移植性肿瘤生长的影响。结果: 通过口服灌胃给药, 不同浓度Hyd 对小鼠移植性肉瘤S180抑制率可达到46.4 %~ 59.6 %(P<0.01 ~ 0.001);对小鼠移植性肝癌H22抑制率可达到39.3 %~ 51.6 %(P<0.05 ~ 0.001);对裸鼠人胃癌异种移植瘤的抑制率可达到18.1 %~ 59.0 %。结论: Hyd 对小鼠移植性肝癌H22 和小鼠移植性肉瘤S180有明显抑制作用, 对人胃癌裸小鼠异种移植性肿瘤也有明显抑制作用。