牛初乳中sIgA双抗夹心ELISA检测方法的建立

为定量检测牛初乳中sIgA,建立双抗夹心ELISA方法。以牛初乳中的sIgA为抗原,免疫新西兰白兔,制得抗血清,经纯化后作为包被抗体;利用简易过碘酸钠法对兔抗牛sIgA标记辣根过氧化物酶(HRP),制得酶标抗体;通过方阵滴定法确定ELISA最佳工作条件;进行特异性、重复性、稳定性实验并且检测牛初乳粉样本中的sIgA含量。结果:成功建立了一种定量检测牛初乳中sIgA的双抗夹心ELISA方法。该方法线性范围:15.625～1 000μg/L;最低检测限(LOD)为15.625μg/L;精密度为:批内CV=4.8%;批间CV=6.5%。     

阴离子交换色谱法一步分离牛初乳中的sIgA

利用强碱3#树脂阴离子交换色谱法从牛初乳中分离获得分泌型免疫球蛋白A。考察了缓冲液pH和离子强度对所获免疫球蛋白A产品纯度的影响,获得从牛初乳中分离免疫球蛋白A的最优条件为pH7.0,离子强度为0.03mol/L的磷酸盐缓冲液,最终可获得纯度为91.24%的免疫球蛋白A,回收率达到47%。因此,利用以强碱3#树脂为基质的阴离子交换色谱分离牛初乳中的免疫球蛋白A具有很好的发展潜力。     

阴离子交换色谱法一步分离牛初乳中的sIgA

利用强碱3#树脂阴离子交换色谱法从牛初乳中分离获得分泌型免疫球蛋白A。考察了缓冲液pH和离子强度对所获免疫球蛋白A产品纯度的影响,获得从牛初乳中分离免疫球蛋白A的最优条件为pH7.0,离子强度为0.03mol/L的磷酸盐缓冲液,最终可获得纯度为91.24%的免疫球蛋白A,回收率达到47%。因此,利用以强碱3#树脂为基质的阴离子交换色谱分离牛初乳中的免疫球蛋白A具有很好的发展潜力。      

牛初乳中转化生长因子β的分离纯化

建立一种快速、简单的从牛初乳中提纯转化生长因子β(TGF-β)的方法.采用酸醇抽提法从牛初乳中初步提取TGF-β,阳离子交换层析和凝胶过滤层析将其纯化,再以SDS-PAGE凝胶电泳测定其的含量.SDS-PAGE电泳及凝胶过滤色谱检测,显示纯化所得蛋白分子量为25 ku,与标准品相同.本方法可用来从牛初乳中提取出TGF-β.     

牛初乳中乳铁蛋白的分离和纯化

利用超滤、盐析和层析三种方法,采用单因素实验和正交实验对酸牛乳清中的乳铁蛋白进行分离和纯化,得到盐析的最佳条件为:先以50%硫酸铵除去杂蛋白,然后在30°C,pH8.5,80%硫酸铵进行盐析。用CM-SephadexC-100进行层析,进样量为2mL,洗脱液pH为7.4时可以得到乳铁蛋白纯品。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明,牛初乳中乳铁蛋白的纯度为92%,分子量大约为78000±2000Da。      

牛初乳中乳铁蛋白的分离和纯化

利用超滤、盐析和层析三种方法,采用单因素实验和正交实验对酸牛乳清中的乳铁蛋白进行分离和纯化,得到盐析的最佳条件为:先以50%硫酸铵除去杂蛋白,然后在30°C,pH8.5,80%硫酸铵进行盐析。用CM-SephadexC-100进行层析,进样量为2mL,洗脱液pH为7.4时可以得到乳铁蛋白纯品。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明,牛初乳中乳铁蛋白的纯度为92%,分子量大约为78000±2000Da。     

牛初乳sIgA的制备与检测

牛初乳sIgA与人初乳sIgA具有相同的免疫源性,对提高机体的免疫力有着重要的作用。采用盐析、超滤、凝胶过滤层析和离子交换层析的方法进行分离sIgA,并用HPLC进行检测,制得的sIgA纯度为75.38%,收率约为54%,本研究为实现牛初乳sIgA的工业化生产提供了有益的探索。     

牛初乳中抗高血压因子的分离纯化工艺

以牛初乳为原料,利用超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析技术对其中抗高血压成分的提取工艺进行了研究。通过多次重复凝胶过滤层析,使终产物的含盐率大大降低,应用原子吸收分光光度计对终产物Na含量进行分析,最终产物含盐量达到了细胞实验可以接受的水平。     

牛初乳中IGF-I分离纯化过程中前处理条件的优化研究

本实验从牛初乳中分离纯化胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),重点对分离获取高水甲IGF-I的前处理条件进行了较为细致的条件优化,每一步骤中IGF-Ⅰ的质量浓度检测均采用放射免疫法测定.为后续工作中采用超滤法规模化、高水平生产IGF-I提供了实验依据.     

pH值对牛初乳中胰岛素样生因子-1(IGF-1)分离纯化的影响

通过搅拌式超滤器对牛初乳中的IGF-1超滤粗提，制备IGF-1的粗提物。对超滤条件的研究发现，在pH值为8．0碱性条件下的IGF-1回收率比在pH值为4．2酸性条件下高,将超滤后的粗提物分别用SDS-PAGE电泳检测，来验证每步骤的提纯效果,再将浓缩后的IGF-1粗提物用葡聚糖G-200柱层析进一步分离纯化，得到IGF-1纯品,每一步骤的IGF-1质量浓度利用放射免疫测定法（RIA）测定。     

牛乳中乳过氧化物酶的分离纯化

采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法,对牛乳中的乳过氧化物酶进行了分离和纯化,利用SDS-PAGE定性检测。结果表明,分离出的乳过氧化物酶显示为单一区带,相对分子质量为76186u。该酶酶活回收率为83.07%,纯化倍数达到44.63倍。     

免疫初乳中IgG_1和IgG_2的分离纯化

采用硫酸胺盐析、DE－52离子交换色谱、Sephacry1 S－100凝胶过滤色谱从免疫初乳分离纯化出了IgG1和IgG2,经SDS－PAGE电泳及免疫电泳证实为纯品;并对IgG1和IgG2的抗体凝集价进行了测定。     

牛初乳中乳铁蛋白的分离及纯化

乳铁蛋白(Lactoferrin,简称Lf)作为一种糖蛋白,主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中,如乳汁、眼泪、唾液等,乳汁尤其是初乳中Lf的含量很高犤1犦。本文通过盐析法和有机溶剂沉淀法从牛初乳中分离出乳铁蛋白,并应用酶联免疫法鉴定各步骤中分离的乳铁蛋白,获得的乳铁蛋白的相对分子量为75,000Da。      

大枣多糖的分离和纯化

对大枣的糖分组成、大枣多糖的提取、纯化、纯度鉴定等方面进行了研究。     

Assessment of the opsonic activity of purified bovine sIgA following intramammary immunization of cows with Staphylococcus aureus

The phagocytosis of Staphylococcus aureus by bovine polymorphonuclear neutrophils (PMN) requires the presence of antibodies. Among the major isotypes of bovine antibodies, IgG2 and IgM are considered opsonic for bovine PMN. However, the role of purified bovine secretory IgA (sIgA) as an opsonin has not been assessed. In the present study, IgG2 were obtained from serum and sIgA, IgG1, and IgM were purified from the colostrums of three cows intramammarily immunized with heat-killed Staphylococcus aureus. The Ig preparations were assayed for specific antibodies, and the opsonic capacity of every isotype was investigated. Despite the presence of antibodies, we observed no distinct chemiluminescence response of PMN stimulated with sIgA- or IgG1-opsonized S. aureus, whereas IgM or IgG2 bound to bacteria induced a marked chemiluminescence response. Moreover, the counting of internalized bacteria per PMN after phagocytosis revealed a low uptake of S. aureus opsonized with sIgA or IgG1, in contrast to IgM or IgG2, which triggered efficient ingestion of bacteria. Priming of neutrophils by TNF-alpha, IFN-gamma, or C5adesArg did not promote an oxidative burst or uptake of sIgA-opsonized S. aureus to a greater extent than with IgG1-opsonized bacteria. Furthermore, analysis of uningested bacteria by flow cytometry after incubation with PMN showed a preferential uptake of IgM-opsonized S. aureus by PMN and only few sIgA-positive stained bacteria were PMN-associated. These experiments indicate that sIgA, like IgG1 and unlike IgM or IgG2, could not be considered as a major opsonin for phagocytosis of S. aureus by bovine blood PMN.     

桦褐孔菌多糖的分离纯化及其组成分析

为更好地开发利用桦褐孔菌这一丰富的真菌资源,采用水提法得到桦褐孔菌粗多糖（CIP）,经DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析、SepharoseCL-6B和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到一个桦褐孔菌多糖组分（IP2a）。采用高效液相色谱法、比旋度法及琼脂糖电泳法鉴定其纯度,气相色谱法、高效液相色谱法及红外光谱研究其组成、相对分子质量和结构。结果表明IP2a为均一组分;IP2a由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为2.3∶4.5∶1∶2.5,其相对分子质量为86053u,含有α-型糖苷键。IP2a是一种不含核酸和蛋白质的杂多糖,是桦褐孔菌水溶性多糖的重要组成。      

小球藻糖蛋白的分离纯化与抗氧化活性评价

小球藻经热水抽提、脱蛋白、醇析得粗糖蛋白,再经葡聚糖凝胶层析得到两种糖蛋白组分(CGPⅠ和CGPⅡ),经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,证明为电泳纯物质,分子量分别为63.7,21.0kDa。利用α-脱氧核糖法、连苯三酚自氧化法进行抗氧化实验,结果显示:CGPⅠ和CGPⅡ均有一定抗氧化能力,且CGPⅡ高于CGPⅠ。