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目的优化毕赤酵母工程菌GS115/xyn11A产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质。方法采用单因素试验和L(934)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响;并分析重组木聚糖酶的酶学性质。结果影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值>诱导时间>诱导温度>甲醇添加量,重组酵母产酶最佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5%,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35 IU/ml;酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH 4.5~7.5的范围内较稳定。结论优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据。 相似文献
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对产真菌腈水解酶的重组大肠杆菌的培养基种类、培养基成分、诱导剂种类和浓度、诱导条件、p H和温度进行了系统考察。摇瓶发酵优化结果显示:以甘油作为主要碳源,蛋白胨和酵母膏作为主要氮源,并添加微量元素的SOC培养基作为发酵培养基,最适接种量为0.5%;较优的诱导剂诱导条件为:采用0.5 mmol/L的IPTG诱导12 h,发酵p H=7.5,诱导温度25℃时产酶效果最佳。经过优化后,重组酶的酶活得到了显著提高,总酶活最高达到了3.84 U/m L,相比初始水平(0.84 U/m L)提高约4倍。5 L发酵罐的放大实验表明,产酶效果良好,总酶活和比酶活均与摇瓶水平基本持平。全细胞催化性质考察研究结果表明,该菌株所产腈水解酶催化反应的最适催化反应温度是45℃,最适反应p H约为7.2。 相似文献
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《精细化工》2015,(10)
对产真菌腈水解酶的重组大肠杆菌的培养基种类、培养基成分、诱导剂种类和浓度、诱导条件、p H和温度进行了系统考察。摇瓶发酵优化结果显示:以甘油作为主要碳源,蛋白胨和酵母膏作为主要氮源,并添加微量元素的SOC培养基作为发酵培养基,最适接种量为0.5%;较优的诱导剂诱导条件为:采用0.5 mmol/L的IPTG诱导12 h,发酵p H=7.5,诱导温度25℃时产酶效果最佳。经过优化后,重组酶的酶活得到了显著提高,总酶活最高达到了3.84 U/m L,相比初始水平(0.84 U/m L)提高约4倍。5 L发酵罐的放大实验表明,产酶效果良好,总酶活和比酶活均与摇瓶水平基本持平。全细胞催化性质考察研究结果表明,该菌株所产腈水解酶催化反应的最适催化反应温度是45℃,最适反应p H约为7.2。 相似文献
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南极假丝酵母脂肪酶发酵条件优化及酶学性质 总被引:7,自引:0,他引:7
分别用摇瓶和15L发酵罐,对南极假丝酵母产胞外脂肪酶的培养基成分和操作条件进行了实验研究。得到最优的培养基组成为:豆粉40g/L,淀粉15g/L,豆油5mL/L,K2HPO4g/L,MgsO4·7H2O1g/L,Tween-800.1%,酵母膏5g/L;操作条件为:温度24℃,初始pH值为6.0,通气量为10.0L/min。在此培养条件下,发酵周期缩短至54h。由15L发酵罐生产的酶液酶活达到19.2U/mL。酶液在pH值为4.0~6.0和7.5~9.0范围内较稳定,其最适宜pH值范围为6~8.5;70℃时酶的催化活性最大.在40~70℃的温度范围内保持1h后残留酶活为60%。 相似文献
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虾青素是一种极具潜力的色素和抗氧化剂,在水产养殖、饲料、食品和医药工业具有广阔的应用前景。本文对产虾青素的红发夫酵母的培养基优化进行了研究。摇瓶培养正交实验优化条件下,红发肤酵母的生物量为11.16g/L,比初始条件下的酵母生物量提高了57%;虾青素含量为0.70mg/kg,提高了66%;虾青素产量为7.83mg/L,提高了1.6倍。 相似文献
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荧光假单孢菌高活性木聚糖酶产酶研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从盐碱土中获得一样荧光假单孢菌(P.flu.01),研究了该菌木聚糖酶产酶条件。虽然木聚糖为木聚糖酶产酶最佳碳源,但以未处理的玉米芯为碳源,胰蛋白际和酵母混音为氮源时.经60h培养后,木聚糖酶活高达164.OIU/mL,而CMC酶活很低,只有0.29IU/mL。同时该菌对pH值具有广泛的适应性,在起始pH=6.0-11.0范围内其木聚糖产酶能力相差不大。有机氛胰蛋白股和酵母混音比无机氛更有利于酶活的提高,并且木聚糖酶活力的提高和有机氟含量增加成正比。玉米芯的物理状态即粗细度对产酶影响不大,但玉米芯的含量增加对广酶有强烈的挺进作用。该酶最合适pH值为6.5,最适反应温度为50℃。 相似文献
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土壤中产壳聚糖酶霉菌的筛选及产酶条件优化 总被引:1,自引:0,他引:1
为筛选壳聚糖酶的高产菌株,利用壳聚糖水解圈作为筛选模型,从沈阳化工学院附近农田土壤中筛选得到了产壳聚糖酶能力较高的霉菌M19。对其产酶条件进行优化,最终得到培养基中最佳碳源为1.0%壳聚糖胶体,最佳氮源为1.0%(NH4)2SO4加1.0%蛋白胨,最适初始pH为6.0,最适溶氧量为50mL摇瓶装20mL培养基,最适接种量为7.5%,且发酵72h时该菌产酶能力最强。该方法简便、直观,很适合大量、快速筛选。 相似文献
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目的优化天然N-末端人白细胞介素-29(Human interleukin-29,hIL-29)成熟肽在毕赤酵母中的表达条件,高效表达天然N-末端hIL-29成熟肽。方法采用单因素试验和L(934)正交试验,分析摇瓶发酵条件下甲醇添加量、起始pH值、诱导时间及诱导温度对毕赤酵母工程菌GS115/hIL-29发酵液A450值的影响;用5 L发酵罐初步探索工程菌株的高密度发酵策略。结果影响重组毕赤酵母摇瓶发酵液A450值的因素重要性依次为:诱导温度>起始pH值>甲醇添加量>诱导时间,最佳发酵条件为:起始pH值7.5、甲醇添加量1.5%、26℃诱导60 h,在此条件下,发酵液的A450值达1.72;高密度发酵策略为:pH 7.5,甲醇与溶氧反相偶联,26℃诱导12 h,在此条件下,目的蛋白的表达量明显高于摇瓶水平;高密度发酵12、24 h表达的蛋白与羊抗人IL-29多抗的反应强度明显高于摇瓶发酵表达的蛋白。结论优化了工程菌株GS115/hIL-29摇瓶发酵和发酵罐高密度发酵条件,实现了重组天然N-末端hIL-29成熟肽在毕赤酵母GS115中的高效表达,为其进一步的中试放大工艺奠定了基础。 相似文献
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重组大肠杆菌生产极端耐热木聚糖酶 总被引:1,自引:1,他引:1
将含有来自于嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)Rt46B.1编码极端耐热木聚糖酶基因xynB的表达载体pET-DBc转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),获得重组菌E. coli DB1,目的基因可表达出有活性且耐90oC的木聚糖酶. 初步优化的E. coli DB1发酵培养基的组成为(g/L):葡萄糖50,NH4Cl 3,MgSO4 0.5,CaCl2 0.6,Na2HPO4×7H2O 12.8,KH2PO4 3.0,NaCl 0.5. 重组菌E. coli DB1木聚糖酶的耐热特性有利于木聚糖酶的下游回收和提取. 相似文献
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糠醛萃取精馏分离甲醇-碳酸二甲酯二元共沸物研究 总被引:11,自引:1,他引:10
采用糠醛作萃取剂 ,用萃取精馏法对甲醇 -碳酸二甲酯二元恒沸物进行分离 ,找到了合适的实验条件和色谱分析方法 ,得到纯度为 99. 7%的碳酸二甲酯产品 ;研究了萃取剂的配比对分离性能的影响 ,得到最佳萃取剂配比为糠醛 /甲醇 (质量比 )为 6~ 8;考察了萃取剂的循环使用对分离性能的影响 ,发现糠醛经减压蒸馏提纯后循环使用基本不影响分离性能 ;对整个过程物系的回收率进行了考察 ,发现各组分的回收率均比较高。结果表明糠醛是一种毒性较小 ,价格较低 ,分离效果比较理想的新型萃取剂。 相似文献
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A xylanase-producing bacterium, isolated from deep sea sediments, was identified as the cold-adapted marine species Acinetobacter Johnsonii. A cold-adapted marine species Acinetobacter Johnsonii could grow at 4 ℃. The optimum temperature and pH of xylanase from a cold-adapted marine species Acinetobacter Johnsonii were 55 ℃ and pH 6.0. Xylanase from a cold-adapted marine species Acinetobacter Johnsonii remained at 80% activity after incubation for 1 h at 65 ℃. The xylanase activity was 1.2-fold higher in 4% ethanol solution than in ethanol free solution. Gibbs free energy of denaturation, ΔG, was higher in 4% ethanol solution than in ethanol free solution. Thermostable ethanol tolerant xylanase was valuable for bioethanol production by simultaneous saccharification and fermentation process with xylan as a carbon source. 相似文献
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目的在毕赤酵母中表达人纤溶酶原K5基因,并检测hK5蛋白的抗肿瘤活性。方法根据酵母遗传密码的偏爱性优化设计hK5基因,构建重组表达质粒p819-8α-hK5,经G418加压筛选和甲醇诱导表达,并对摇瓶发酵条件进行优化。表达的hK5蛋白经纯化后,通过荷H22肿瘤昆明小鼠模型检测其抗肿瘤活性。结果筛选到2株高表达hK5蛋白的转化子,摇瓶表达量超过150mg/L,纯化后的蛋白纯度大于95.0%,并能够显著抑制昆明小鼠H22肿瘤的生长。结论hK5基因能够在毕赤酵母中高效分泌表达,且表达的hK5蛋白具有良好的抗肿瘤活性。 相似文献
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麦草生物化机浆的木聚糖酶漂白 总被引:6,自引:0,他引:6
探讨了在由PhanerochaetechrysosporiumME446麦草上固态发酵制得的木聚糖粗酶对麦草生物化机浆漂白效果的改善作用,并对其预处理工艺进行了优化。实验结果表明,当木聚糖酶用量为15IU/g,浆浓15%,处理3h后,麦草生物化机浆的白度可达到66.1%ISO。文章还对木聚糖酶处理前后的麦草化机浆纤维进行了扫描电镜的观察。 相似文献
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玉米秸秆半纤维素制备木糖醇的研究 总被引:5,自引:1,他引:4
首先采用无污染的碱性过氧化氢法研究了半纤维素的分离与提取,然后对提取的半纤维素分别进行化学水解和酶水解比较,最后研究了水解液发酵制备木糖醇。结果表明,半纤维素分离提取的优化参数为:2%过氧化氢,2%氢氧化钠,加热时间4 h,反应温度75℃。使用CF3COOH水解半纤维素所得木糖含量为67%~73%,水解率为76%~84%,稀盐酸预处理半纤维素再化学水解所得木糖含量高达88%,水解率上升至大约90%。半纤维素的酶水解实验表明,木聚糖酶的水解专一性高于半纤维素酶,木聚糖酶水解率为38%~60%。在水解液发酵实验中,酶水解液的木糖醇转化率高于化学水解液。另外,通过浓缩半纤维素水解液,提高发酵液的木糖初始浓度,有利于菌株生长,可以提高木糖醇转化率。研究对于玉米秸秆半纤维素制备化学品具有一定的指导意义。 相似文献