多重PCR方法对大豆转基因食品的定性检测

为了同时检测转基因食品中所含的多个目标基因序列,本文采用多重PCR分析技术对转基因大豆食品进行了检测。为了排除扩增结果的假阴性,大豆外源凝集素基因和肌动蛋白基因被作为内部对照以评价所有PCR反应的效率。当转基因大豆含量仅为0.15%时,仍然可以对转基因食品进行可靠的鉴定,从而表明该方法的高度敏感性。该文所述的多重PCR系统是一种简单、准确并且敏感的检测方法,只需要进行一个反应就可以检测多个目标基因序列,因而可以用来对转基因原材料及加工成品进行高精度、高灵敏的检测。     

PCR方法对转基因食品定性检测的研究

转基因食品的检测一般基于聚合酶链式反应（PCR）方法，对35S启动子和NOS终止子进行筛选。本实验以转基因大豆、玉米（购自Fluka）为参照物，转基因含量为0％，1％，2％，5％的样品均获得正确识别。以上介绍的方法能对转基因原材料及加工成品实施高精度、高灵敏的检测。     

玉米加工食品中转基因成分的PCR检测

通过分子生物学手段，以聚合酶链式反应（PCR）技术为基础，建立了从玉米加工食品中检测转基因成分的方法，实验分别采用CTAB法（十六烷基三乙基溴化铵）和试剂盒（Kit)方法对市场上选购的玉米片，玉米面，香脆玉米角，窝窝头，爆玉米等5种玉米食品中的DNA进行了提取，并用聚合酶链式反应（PCR）方法对玉米内标基因Inverase进行扩增，采用凝胶电泳对结果分析，比较两种DNA提取方法的优越性，再对通常转入的基因构建元件35S启动子，NOS终止子进行扩增对玉米转基因成分进行检验，结果表明：试剂盒法对玉米加工食品中的总DNA有更好的提取效果，并得到一个适宜的扩增条件参数；5种玉米食品的转基因检测结果均为阳性，即都含有转基因成分。     

食品中转基因成分的检测

本研究建立了多种精加工和深加工食品中提取DNA的简便、易操作的方法。根据转基因农作物最常使用的外源基因设计引物,采用荧光PCR－GeneScan技术,在食品中检测出35S启动子、NOS终止子、nptII标记基因以及目的基因Gry和EPSPS等转基因成分,并对PCR产物进行测序槿酶切分析确认,防止假阳性。     

食品中单核增生性李斯特菌的PCR快速检测研究

为提高食品中单增李斯特菌的检测水平,针对单增李斯特菌中多个稳定的特异性基因hlyA、plcB、prfA、iap,设计并筛选出7对引物组成多重-巢式PCR联合检测体系,并结合高灵敏性的聚丙烯酰胺凝胶电泳,对单增李斯特菌进行快速检测,多重PCR的灵敏度达到1×102CFU ml,巢式PCR的灵敏度达到1×10CFU ml。结果表明该检测体系具有快速可靠、灵敏准确及特异性好的特点,而且有效缩短了检验周期,从传统的7～14d缩短到1～2d。     

转基因食品的快速PCR鉴定

用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA,经PCR扩增,鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品.该方法的灵敏度可达0.1%,并且具有很好的稳定性.     

多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 3 5S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列 ,设计合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 (FDCP) ,分别建立了多重PCR、应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分 3 5S启动子和NOS终止子的方法 .并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测 ,发现 1 3份样品中有 6份检出3 5S启动子、NOS终止子 ,其余 7份样品的检测结果为阴性 .表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出 3 5S和NOS成分 ,其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点 ,多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确     

豆腐中转基因大豆成分的检测

目的探索适合豆腐样品的DNA抽提方法并采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对豆腐试样中的转基因大豆成分进行检测。方法分别采用CTAB和SDS配制抽提缓冲液提取18个豆腐样品中的DNA,针对转基因大豆都含有大豆内源基因lectin及共同元件CaMV35S启动子、nos终止子及epsps基因进行实时荧光PCR扩增。结果 SDS法比CTAB法提取的豆腐DNA质量更好;18个豆腐样品均检测到了lectin,其中有2个样品检测到了CaMV35S启动子的荧光信号,4个样品检测到了nos终止子的荧光信号,所有样品均未扩增出epsps基因。结论 SDS法比CTAB法更适合于抽提豆腐样品的DNA,提取到的DNA可用于实时荧光PCR法检测豆腐内源基因和外源基因。     

PCR技术在转基因食品检测中应用

该文在简述转基因食品安全性基础上,提出其检测方法—PCR技术,重点介绍PCR技术在转基因食品检测上应用及发展趋势。     

用PCR检测熟食中的转基因Bt-玉米

用8种已知并已发表的PCR（聚合酶链反应）引物组进行比较，用以测定熟食中转基因Bt“极产”玉米“event 176”的zein(玉米醇溶蛋白－－泽注）基因，crylA(b)基因，bla基因、bar基因和35S cauliflower mosaic virus promoter(花椰菜马赛克病毒启动区－－译注）。以转基因爆玉米花、粟粉粥、酥饼作样品。粟粥粉和酥饼用含有不同百分率（100％，1％，0．1％，w/w)的转基因玉米粉制作。在不同熟时间从样吕提取的DNA，其平均DNA碎片长度逐渐下降，但仍能通过PCR扩增。试验的几种引物组，以Cyr 03/04表现最好，可以检测出仅含0．1％Bt-玉米DNA的熟食中的转基因DNA。     

串珠镰刀菌分离菌株PCR筛选鉴定方法的研究

为监测粮食中的串珠镰刀菌污染，根据rDNA18S、5．8S、28S及其间区ITS和ITS2序列，设计了1对镰刀菌属特异性引物Fu3／Fu4及2对串珠镰刀菌种特异性引物Fu5／Fu4(Ⅰ型ITS2特异性)和Fu3／Fu2(Ⅱ型ITS2特异性)，建立了串珠镰刀菌PCR及复合PCR检测方法。Fu3／Fu4、Fu3/Fu2和FuS／Fu4分剐扩增516bp、375bp和188bp的DNA片段。Fu3／Fu4 PCR的检出灵敏度为10pg，FuS／Fu4为100pg，复合PCR(Fu3、Fu5和Fu4)的检出限为100pg，分别相当于每次反应检出10^3、10^4和10^4个孢子。复合PCR可以同时鉴别镰刀菌属和串珠镰刀菌种。检测了32株从山东、浙江、安徽和河南4省区分离的串珠镰刀菌及交孢镰刀菌，26株为Ⅰ型ITS2特异性，4株为Ⅱ型ITS2特异性，两株待定。该方法可用于大量快速筛选串珠镰刀菌，有利于进一步开展串珠镰刀茵在我国的生态分布、生物地域学及系统发育学等方面的研究。该方法快速、敏感、特异，适宜粮食中串珠镰刀菌污染的监测。     

食品中单核细胞增生性李斯特氏菌PCR快速检测方法

为建立食品中单核细胞增生性李斯特氏菌 (单增李斯特氏菌 )的快速、敏感、特异的PCR检测方法 ,选取hlyA基因作为靶序列设计一对引物 ,用该引物对 6 3株从国内食品中分离的李斯特氏菌 (进行传统方法验证 )和 2 0株非李斯特氏菌进行PCR扩增 ,并用此方法对人工污染食品进行检测 ,扩增片段表现出极好的单增李斯特氏菌种特异性 ,人工污染的生肉、冷冻虾仁、卷心菜的检出限为 39cfu g ,为食品中单增李斯特氏菌的快速、敏感并且特异的检测方法。     

食品中副溶血性弧菌PCR快速检测方法的研究

为建立食品中副溶血性弧菌 (VP)的PCR检测方法 ,选取tl基因作为靶序列设计一对引物 ,用该引物对 14株从国内食品中分离的副溶血性弧菌 (经传统方法验证 )和 30株非副溶血性弧菌进行PCR扩增 ,并用此方法对人工污染食品进行检测。扩增片段表现出极好的特异性 ,对人工污染的冷冻虾仁、沙丁鱼的检出限为 10CFU g ,且与传统方法结果吻合。该方法适宜于食品中副溶血性弧菌的检测。     

转基因大豆DNA检测芯片的研究

为提高对转基因大豆的监督检测能力，研制了转基因大豆DNA检测芯片。根据转基因大豆(Roundup Ready)中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、NOS终止子、NOSIEPSPE基因和内源Lectin基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIGdUTP标记杂交探针，并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试。结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．5％，由于采用了多重PCR技术，一次可同时检测多个基因，提高了检测的准确性和效率。     

基于HACCP体系的食品快速检验机构质量控制体系研究

危害分析和关键控制点(Hazard Analysis and Critical Control Point, HACCP)体系是一种被广泛应用于各个领域的质量管理工具。本文将HACCP体系应用于食品快速检验机构的质量控制,阐述其应用在食品快速检验机构的工作思路和方法,并以组织中氯霉素快速检测为例,分析了HACCP体系在食品快速检验机构的质量控制中的应用。以期提高食品快速检验机构食品快速检验结果的准确性,使食品快速检验结果成为食品监管部门靶向监管的技术保障,同时对相关食品检验机构的质量控制提供新思路。     

Development of a rapid detection method for genetically modified rice using the ultra-fast PCR system

Food Science and Biotechnology - Genetically modified (GM) rice varieties containing traits such as tolerance to abiotic stress and resistance against pests and diseases continue to be developed....     

北京市城区居民的转基因食品知识、态度、行为及影响因素分析

为了解北京市居民对转基因食品的知识、态度和行为的现状及影响因素。抽取北京市居民中901人，调查转基因食品生物技术的知信行水平。转基因食品是生物技术的知晓率为72．7％，深入了解的49．3％，随化程度增高呈上升趋势。对转基因食品持乐观态度的占63．1％，持悲观态度(有害或害大于利)的占6．1％，乐观随化程度增高呈上升趋势，随年龄增高呈下降趋势；61．9％的调查认为转基因食品将走向大众(积极)，30岁以下及乐观的人群态度更为积极。持乐观、积极态度购买转基因食品的比率较高，为41．8％，而持悲观态度的为18．7％，差异有显性；购买转基因食品人群比例随年龄升高呈下降趋势，与化程度、性别没有关系；调整的价格对促进转基因食品购买有一定影响。北京市居民对转基因食品的知信行水平较高，态度影响购买行为，转基因食品的价格对购买有一定影响。     

Quantitative competitive PCR for the detection of genetically modified soybean and maize

 The surveillance of food labelling concerning genetically modified organisms (GMOs) requires DNA-based analytical techniques. Present assay systems allow the detection of GMO in food; however, they do not permit their quantitation. In this study, we report the development of quantitative competitive polymerase chain reaction (QC-PCR) systems for the detection and quantitation of the Roundup Ready soybean (RRS) and the Maximizer maize (MM) in food samples. Three DNA fragments that differ from the GMO-specific sequences by an insertion were constructed and used as internal standards in the PCR. These standards were calibrated by co-amplifying with mixtures containing RRS DNA and MM DNA, respectively. The calibrated QC-PCR systems were applied to nine commercial food samples containing RRS DNA and to three certified RRS flour mixtures in order to elucidate whether these food samples contain more or less than 1% RRS DNA. Finally, the GMO contents of four samples that were found to contain more than 1% RRS were determined by QC-PCR using various amounts of standard DNA. Received: 13 January 1998 / Revised version: 4 March 1998