生物农药苏云金芽孢杆菌的研究进展

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)制剂是目前应用广泛而有效的一种微生物杀虫剂.本文介绍了苏云金芽孢杆菌的菌种优选、发酵过程及剂型研究进展,具体阐述了发酵过程中培养基和发酵条件的优化、各种发酵方式和发酵设备等. 指出了目前发酵生产苏云金芽孢杆菌中存在的问题,提出了解决问题的建议并展望了其发展前景.     

城市污泥可生产苏云金杆菌

日前,南京农业大学资源与环境科学学院利用未脱水的城市污泥作原料发酵苏云金杆菌菌种获得成功,并生产出生物杀虫剂。城市污泥含有丰富的有机碳氮和无机盐,有望作为发酵苏云金杆菌的培养基质。与常规利用黄豆粉作为培养基相比,该项研究芽孢大量形成时间约提前10小时,且芽孢在30     

枯草芽孢杆菌发酵蔗渣生产黄腐酸的工艺条件优化

对实验室筛选的发酵蔗渣产黄腐酸的4株（25B、BT、12、E）细菌进行工厂扩大发酵,并运用分子生物学方法对高产黄腐酸菌种进行鉴定。研究高产菌种的发酵周期、接种量、发酵培养基初始pH以及发酵堆料层等因素对菌种发酵蔗渣产黄腐酸的影响,利用正交实验方法优化发酵培养基的碳源添加与配比。实验结果表明,E菌株为发酵蔗渣高产黄腐酸的菌种,16SrDNA法鉴定结果为枯草芽孢杆菌。     

正交设计法优化Bt发酵培养基

采用正交实验方法,进行摇瓶发酵培养基筛选试验来优化苏云金芽孢杆菌发酵培养基,通过测量发酵液吸光度值来确定不同农副产品培养基成分对苏云金芽孢杆菌发酵的影响,从而使培养基优化过程简单易行。实验结果表明,不同培养基成分配比对发酵效果影响差别很大,试验所得的最佳培养基组合为:玉米粉2.0%、豆饼粉3.5%、鱼粉2.0%、花生饼粉2.0%、淀粉1.0%、K2HPO40.3%、CaCO30.3%。     

苏云金杆菌发酵培养基研究进展

苏云金杆菌前世界上用途最广、产量最大的微生物杀虫剂,本文综述了苏云金杆菌发酵研究所用的培养基的类型,包括传统发酵原料、城市污泥、工业废液、蓝藻、废弃物等及其特点,为企业选择适合的原料和工艺提供了借鉴作用,并对苏云金杆菌发酵培养基的研究进行了展望。     

苏云金芽孢杆菌固态发酵培养基的优化

采用正交实验法,对苏云金芽孢杆菌固态发酵培养基进行优化,将发酵产品干燥粉碎后制成菌悬液,通过测量其吸光度来确定不同农副产品培养基成分对苏云金芽孢杆菌发酵的影响.实验结果表明,不同培养基成分配比对发酵效果影响差别很大,确定最佳培养基组分为:麦麸63.9%、豆饼粉16.0%、玉米粉8.0%、酵母粉1.6%、米糠8.0%、KH2PO4 0.5%、FeSO4 0.3%、(NH4)2SO4 1.1%和MgSO4 0.6%.     

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FS6摇瓶发酵条件优化

[目的]对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FS6的摇瓶发酵工艺进行优化。[方法]通过对发酵培养基成分和发酵条件的单因素试验和正交试验,测定生防菌株FS6对人参立枯丝核菌的抑菌效果和菌体生长量,来确定其最适发酵培养基和发酵条件。[结果]最适摇瓶发酵培养基配方为葡萄糖30 g,酵母浸粉40 g,Mg SO_4·7H_2O_2 g,甘油10 m L,K_2HPO_42 g,H_2O 1000 m L;最优培养条件为接种量6%,摇瓶装液量50 m L/250m L,摇床转速160 r/min,初始p H值6.0,培养温度28℃,培养时间12 h。[结论]解淀粉芽孢杆菌FS6在最适摇瓶发酵培养基及发酵条件下,对人参立枯病菌的抑菌活性最好,为该菌株的工业化生产奠定了基础。     

耐高温秸秆降解菌的筛选、鉴定及复合菌剂降解效果分析

[目的]筛选耐高温秸秆降解菌,并对其进行鉴定,分析复合菌剂的秸秆降解效果。[方法]从河南地区农田腐烂的玉米秆、麦秸秆、枯枝败叶中通过分离培养基分离出4株耐高温且具有纤维素降解能力的菌种,并对其进行16/18SrRNA鉴定,NGW11菌株为米曲霉菌,NGW12菌株为芽枝孢霉菌,NGW13菌株为枯草芽孢杆菌,NGW14菌株为苏云金芽孢杆菌,复合菌液降解菌种组合为3︰1︰4︰2。[结果]通过DNS法测定各菌株对不同秸秆的纤维素降解酶活,结果表明复合菌液对不同秸秆都有较好的降解效果。     

苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1的分离筛选及鉴定

目的从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌,并进行鉴定。方法分离自被污染的蝴蝶兰初代培养基的苏云金芽孢杆菌经富集后,筛选伴胞晶体产生菌BZ-1,显微镜观察进行鉴定;采用PCR法分析菌株BZ-1的16S rDNA和脂肽抗生素合成相关基因,SDS-PAGE分析菌株的伴胞晶体;制备菌株发酵粗提液,提取活性物质,分别置于不同温度(50、60、80、100℃)30 min、用不同的蛋白酶(蛋白酶K、胰蛋白酶)于37℃处理30 min,以枯草芽孢杆菌作为指示菌检测菌株的抑菌活性;并检测菌株对小菜蛾的毒力。结果菌株BZ-1能产生芽孢,并在芽孢旁形成多个无规则伴胞晶体;该菌株的16S rDNA扩增产物测序结果经与GenBank中登录的16S rDNA核苷酸序列进行BLAST比对,与B.anthracis str.Ames(NR_074453)、B.cereus(NR_074540)和B.thuringiensis Bt407(NR_102506)菌株相似度达99%,表明菌株BZ-1属于芽孢杆菌属,结合扫描电镜观察结果,可初步确定该菌株为苏云金芽孢杆菌;该菌株可扩增出脂肽抗生素合成相关基因sfp、mycB、ituA、fenB;该菌株从培养2 d芽孢形成后开始分泌相对分子质量约130 000的晶体蛋白,4 d时蛋白表达量增加,6 d后蛋白表达量基本达到稳定;该菌株具有一定的热稳定性,对蛋白酶K具有一定的耐受性;该菌株于30℃培养6 d,对小菜蛾表现出较高的毒力。结论从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选的苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1所产的抗菌物质主要抑制革兰阳性细菌,具有较高的毒力,可作为原始菌株发酵进行田间生物防治,也可为构建杀虫基因工程菌以及培育抗虫转基因植物提供高毒力的候选基因,具有较好的应用前景。     

杀线虫苏云金芽孢杆菌研究进展

简述了近年来对线虫有杀灭活性的苏云金芽孢杆菌（B．t）及其晶体蛋白的研究进展,主要包括具有杀灭线虫活性的B．t种类、B．t所杀线虫的种类、杀线虫晶体蛋白结构特点和作用机理以及有关的专利。讨论了杀线虫基因的克隆、表达和B．t制剂的应用。展望了B.t生物杀虫剂在线虫的生物防治中的应用前景。     

人参内生拮抗细菌NJ13的鉴定及发酵条件

[目的]菌株NJ13是1株对人参常见病原菌有较强拮抗作用的内生细菌,为了有效防治人参病害,进行了菌种鉴定和发酵培养工艺的试验。[方法]通过培养特性、形态特征、生理生化特性和16S rDNA同源性序列分析,对菌株NJ13进行鉴定;采用牛津杯法测定抗菌谱;同时通过发酵单因素实验和各因素正交试验确定菌株的发酵工艺。[结果]确定菌株NJ13为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus),该菌对多种植物病原菌有拮抗作用,适宜的发酵培养基配方:葡萄糖3%,淀粉1.5%,酵母浸粉1.5%,K2HPO40.1%,NaCl 0.5%;最适培养条件:接种量4%,装液量75 mL/250mL,起始pH值8.0,28℃、180 r/min摇瓶培养96 h。[结论]为人参病害的防治提供新的生物防治资源。     

山东奥丰生物科技自主研发枯草芽孢杆菌BSn5生物农药通过科技成果鉴定

<正>近日,由山东奥丰生物科技有限责任公司自主研发的"枯草芽孢杆菌BSn5生物农药的研究"项目,顺利通过科技成果鉴定。来自中国科学院微生物研究所、山东农业大学、山东省植保总站、山东省农药检定所等的专家组成了鉴定委员会,形成了以下鉴定意见:项目筛选分离出魔芋内生枯草芽孢杆菌BSn5菌种,采用正交试验和响应面法确定菌种最佳接种量为5%,最佳工业发酵培养基营养成分配比为:麦芽浸粉1g/L,     

小米自然发酵菌株的鉴定及发酵菌株特性分析

目的自然发酵筛选对小米改性起主要作用的菌种,并对发酵菌株的特性进行分析。方法用培养基筛选小米自然发酵液中主要菌种,分离纯化后,进行菌株生理生化鉴定、26S r DNA、16S r DNA序列测定,菌株纯培养后的p H、微生物菌落数曲线绘制,发酵菌株有机酸含量检测,并对不同菌株的产酸、产胞外淀粉酶的能力进行检测。结果从自然发酵液中筛选出的菌种主要为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、芽孢菌(Bacillus)。植物乳杆菌在发酵12 h时菌落数达到生长的指数期,之后p H迅速下降;戊糖片球菌及屎肠球菌在发酵24 h时菌落数达到生长的指数期,之后p H迅速下降,培养40 h时戊糖片球菌的p H明显低于二者;酿酒酵母及芽孢菌在发酵36 h时菌落数达到生长的指数期,之后p H略有下降。相同时间内,戊糖片球菌的产酸能力植物乳杆菌屎肠球菌,而酿酒酵母和芽孢杆菌不具产酸能力;戊糖片球菌有较强的产酒石酸及乳酸的能力,植物乳杆菌具有产酒石酸及乳酸的能力,但弱于戊糖片球菌,而屎肠球菌有较强的产乳酸的能力;植物乳杆菌、戊糖片球菌、屎肠球菌、酿酒酵母不能产胞外淀粉酶,而芽孢杆菌具有较强的淀粉降解能力。结论确定了自然发酵小米中的主要菌种,为研究自然发酵小米淀粉老化特性等奠定了基础。     

苏云金杆菌与化学药剂对酒曲害虫的毒杀效果

苏云金杆菌是一种革兰氏阳性细菌，它能产生对害虫专一性的杀虫晶体蛋白，具有对人类健康和环境安全的优点。酒曲害虫是危害大曲的一类害虫的总称。研究结果表明：在非日照条件下，苏云金芽孢杆菌和有机磷类化学药剂以B.t.杀虫剂／无菌水5／10ml＋磷化铝0．0007g混合，在37℃条件下能杀死酒曲的主要害虫，降低虫害损失，保护环境，具有重大的经济意义。     

纳豆激酶液体发酵条件的优化

以纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)为出发菌,研究了其液体发酵产生纳豆激酶(Nattokinase,NK)的培养基组成(碳源、氮源、碳氮比和金属离子组成)和培养条件(温度、初始pH值、发酵时间、接种量和装液量)对产酶量的影响.结果表明,液体发酵培养基的最佳碳源为麦芽糖,浓度为1.0%;最...     

米糠渥堆发酵过程中代谢产物和菌群变化研究

米糠是很好的发酵饲料原料,但其固态发酵过程中的菌群及其代谢产物变化却少有报道。本文以全脂米糠为单一发酵原料,分别接种发酵乳杆菌MRS8、枯草芽孢杆菌ZLK1或地衣芽孢杆菌BL50,研究发酵过程中乳酸、乙酸、乙醇等代谢产物及其菌群的变化情况。发酵起始时,米糠中乳杆菌科占比在80%以上,随着发酵启动,空白组中肠杆菌科增殖很快,但乳酸含量变化最小。发酵乳杆菌MRS8组乳酸升高最快,两天达到最大值。枯草芽孢杆菌ZLK1组乳酸含量随着发酵时间延长持续升高。研究表明:外加益生菌株发酵可以提高米糠发酵的乳酸含量,幵降低有害菌的丰度。     

灵芝提取液的发酵优化及保湿性能评价

以灵芝提取液为原料,在纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌和开菲尔菌这3种菌株中筛选出适宜的发酵菌株,结果发现选择纳豆芽孢杆菌作为菌种较为合适。以保湿率为评价指标,通过单因素及正交试验对灵芝提取液发酵工艺条件进行了优化。实验结果表明：碳源果糖6%、氮源氯化铵8.5%、接种量12%、发酵温度31℃、发酵周期32 h为发酵的最佳工艺条件,在此条件下得到的灵芝提取发酵液8 h保湿率为11.51%,保湿能力强于阳性对照组SK-Ⅱ和10%甘油,且优于灵芝提取液和空白培养基。     

高产乳酸细菌发酵厨余垃圾生产乳酸的试验研究

应用从厨余垃圾中分离到的一株乳杆菌TD175作为接种菌株,强化厨余垃圾的乳酸发酵.在不控制pH值条件下厌氧发酵2d,菌株TD175可以得到9.20g/L的乳酸,比不接种的对照实验乳酸浓度高88%.菌株TD175发酵厨余垃圾的最适接种量为15%.采用原料不灭菌的开放式发酵比原料灭菌后再发酵更有利于提高乳酸产量.     

石油降解菌的筛选、鉴定及降解石油的初步研究

从被石油污染的土壤中分离得到一株石油降解菌O-D-1,通过形态、生理生化实验和16S rDNA序列分析对其进行了鉴定.结果表明,该菌的形态及生理特征与芽孢杆菌相似,芽孢杆菌的代表菌株B.anthracis、B.cereus、B.thuringienssi与该菌的同源性达99%.从系统发育树也可以看出,该菌与苏云金芽孢杆菌B.thuringiensis的距离最近,归属于芽孢杆菌属(Bacillus).通过对降解条件的研究,确定了降解菌O-D-1的最适生长条件为:初始pH值5、温度37℃、渗透压1%NaCl、辅助营养物质蛋白胨浓度4 g·L-1.     

响应面法优化乳杆菌发酵生产奶味香精的工艺研究

主要研究了利用响应面法优化保加利亚乳杆菌发酵生产奶味香精的工艺条件。选择底物浓度、菌种接种量、发酵温度、发酵时间为考察因素,利用Design-Expert软件进行设计和分析,确定了发酵产香的最佳工艺条件为:底物浓度21%、菌种接种量16%、发酵温度38℃、发酵时间21 h。