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目的 为了提高体外培养的杂交瘤细胞单克隆抗体的合成分泌,并为治疗型人源化单克隆抗体生 产摸索条件。方法 应用5L篮式及非篮式生物反应器培养1A5杂交瘤细胞,以分泌干扰素单克隆抗体,从中对 1A5细胞的接种浓度、反应动态、培养方式等进行研究。结果 细胞最适的接种浓度为2.0×105/ml左右;同非篮式 培养相比,在篮式培养过程中,通过葡萄糖消耗率的监测,及时地调节培养条件及换液时间,延长了培养周期,增加 了每罐收液批次,并且每次是全量换液,最高收液效价为1:4096。结论(1)1A5 细胞分泌干扰素单抗属于负生长 耦连型,葡萄糖消耗率与细胞的生长呈线性关系,可以利用糖消耗率的变化判断篮式生物反应器中细胞生长状况; (2)篮式生物反应器载体培养优于非篮式生物反应器悬浮培养;(3)适当地增加培养基中葡萄糖的量,可以提高干 扰素单抗的合成分泌。 相似文献
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体外培养杂交瘤细胞生产人用鼠源单克隆抗体 总被引:3,自引:0,他引:3
<正>目前,人用鼠源单抗的生产方法一般分为体内法和体外法2种。体内法即腹水法。尽管腹水中抗体浓度比较高(2~10mg/ml),但由于所用的BALB/c小鼠必须达到SPF级,繁殖、饲养BALB/c小鼠及生产腹水、纯化抗体的厂房必须符合GMP要求,WHO及我国对体内法生产的人用鼠源单克隆抗体的质检项目繁多,要求严格,因此限制了体内法在人用鼠源单抗生产领域的应用。由于体外法(杂交瘤细胞体外培养法)的产品纯度高,可以避免鼠类病毒的污染,简化质检项目,操作具有可控制性,适用于大规模工业生产, 相似文献
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应用转瓶大规模培养杂交瘤细胞生产ABO血型单克隆抗体的工艺 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立用转瓶悬浮培养杂交瘤细胞生产ABO血型抗原单抗的工艺。方法 在无CO2条件下, 应从转瓶培养分泌抗人A和B血型抗原单抗的杂交瘤细胞。结果在适当的pH、转速和起始密度的条件下,细胞 的生长密度和单抗效价均超过静态培养水平。结论该工艺投资少,操作简便,运行稳定,适于规模化生产。 相似文献
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抗人 A 血型杂交瘤15B_4细胞在 CelliGen 细胞培养罐中进行连续灌注培养,细胞密度达1.6×10~7/ml。每天灌注新培养液量由1000ml 增到2300ml,第14天后又逐日减少至1000ml,死细胞数随着转速的增加和灌注量的减少而增多。血凝效价呈梯度上升,滴度达到2~(14),相当于腹水效价。培养6天 IgM 产量为0.2克/升/天,10~18天波动在1.45~1.8克/升/天。15B_4细胞代谢与葡萄糖、乳酸有关,与氨无关。CelliGen 自控效果较好,适用于杂交瘤细胞的高密度培养。搅拌速度在120~150r/min 对细胞产生的剪切力有明显地破坏作用。溶氧控制系统有待改进。 相似文献
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目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。 相似文献
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生物反应器大规模培养脊髓灰质炎病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
目的应用生物反应器大规模培养脊髓灰质炎病毒。方法用7L、75L和550L生物反应器逐级放大培养Vero细胞,每天取样进行细胞计数。在550L生物反应器中培养脊髓灰质炎病毒,观察细胞病变,并检测病毒感染性滴度。结果一级细胞培养(灌流培养法)、二级细胞培养(循环培养法)和三级细胞培养(批培养法)的平均细胞密度分别为2.79×106、2.38×106和1.04×106个/ml,一级培养的细胞倍增数最高;病毒培养体积达350L,病毒收获液滴度大于7.625lgCCID50∕ml。结论通过三级放大工艺,可大规模培养脊髓灰质炎病毒。 相似文献
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目的研究利用微载体技术规模化制备肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的方法。方法利用NBSCelliGen 310 5 L生物反应器进行Vero细胞微载体培养,考察了不同微载体Cytodex-1浓度(3、10、15、20 g/L)对Vero细胞生长代谢及细胞密度的影响,并且与细胞工厂(Cell factory,CF)中Vero细胞染毒后的病毒繁殖进行比较。分别采用上清液、洗涤液、洗脱液模式收毒,比较不同收毒方式中EV71的抗原含量及病毒滴度(CCID50)。结果采用10 g/L微载体浓度,批次培养方式培养Vero细胞120 h后,细胞密度可达5.47×106个/ml;当微载体浓度大于15 g/L时,由于葡萄糖消耗速度快,需采用灌注模式培养。按MOI 0.2染毒后,微载体培养的收毒时间比CF慢48 h,但其病毒滴度可达8.8 Log10CCID50/ml,约为CF的5倍。EV71与微载体存在离子交换吸附作用,按上清液加洗脱液方式收毒,抗原总量可达12 61 U/ml,约为CF的3倍。结论已成功建立了生物反应器微载体5 L发酵培养Vero细胞生产EV71的方法,为进一步EV71大规模培养以及疫苗研发奠定了基础。 相似文献
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大规模提取体内治疗用单克隆抗体的工艺 总被引:1,自引:1,他引:0
用两步法从WuT3细胞培养上清中提取WuT3单克隆抗体(McAb),首先将培养上清直接上SP离子交换柱,再上DEAE柱,获取提纯的McAb。该工艺的确定及放大均在Pharmacia产Biopilot中试纯化系统上进行。一次投料20L,纯化规模达2g,纯化的McAb经SDS-PAGE测定,纯度基本达到95%,免疫荧光活性为66±9%。热原质合格,支原体、残余DNA均为阴性,达到体内制剂质控要求。 相似文献
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目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定。结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1∶4×103、1∶8×104和1∶1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4ng/ml以上的DNA。结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础。 相似文献
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目的 建立能分泌人肝细胞生长因子(hHGF)的杂交瘤细胞株。方法 从4~5月龄的人胎肝中分 离贮脂细胞,与次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型人肝癌细胞株(SMMC-7721)融合成杂交瘤细胞,用 超滤膜对培养上清液初步分离,并用H3-TdR掺入法测定各组分中hHGF的生物活性。结果 培养上清液中相对分 子质量 10 000~ 30 000的组分hHGF活性显著增高,对小鼠肝细胞增殖有明显的促进作用,并存在量效依赖关系,而 相对分子质量小于10 000或大于 30 000的组分与对照相比 hHGF活性无明显改变。结论 hHGF杂交瘤细胞的建 立可作为获得hHGF的一条新途径。 相似文献
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体内治疗用鼠源性乙脑单克隆抗体细胞系的质量控制 总被引:2,自引:2,他引:0
分泌乙脑单克隆抗体(JEV-McAb)原始细胞株2H4、2F2复苏后,在克隆化阳性率达100%时,细胞体外长期传代6个月,观察分泌抗体的稳定性,并对冻存0、1、4、7年的细胞复苏,按常规制备腹水,作ELISA、中和、血凝抑制和体内保护试验进行抗体特异性检定。结果,细胞传代6个月仍能持续稳定分泌特异性抗体,培养上清和腹水抗体效价不降低。冻存0~7年细胞复苏后抗体特异性不变。支原体及鼠源性病毒检测均为阴性,与人体16种组织不发生交叉反应。表明原始细胞库及生产细胞库其稳定性与特异性均符合质控要求。 相似文献
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抗人红细胞表面抗原glycophorin A杂交瘤细胞株的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
应用杂交瘤技术,用纯化人红细胞表面抗原glycophorin A“N”型免疫纯系BALB/c小鼠,用glycophorin A“M”型作为固相抗原,用EIA间接筛选出识别“M”、“N”血凝抗原以外的抗glycophorin A的抗体,进而利用Coombs原理,加入抗免疫球蛋白,筛选出非凝集型抗glycophorin A抗体,得到61株非凝集型抗glycophorin A杂交瘤,其中12株有限稀释法克隆4次后得到5株稳定分泌非凝集型抗体的杂交瘤并进行初步鉴定。单抗上清血凝效价可达1:20~50,腹水血凝效价为1:800~1:1 600。 相似文献
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无血清培养中杂交瘤细胞的能量代谢特性 总被引:2,自引:0,他引:2
在 10L生物反应器中 ,研究杂交瘤细胞C5 0在无血清培养条件下生长和能量代谢的特性。结果表明 ,细胞的比耗氧速率、ATP比生成速率和比生长速率有着相似的过程曲线 ,ATP比生成速率与比生长速率呈线性相关 ,反映了细胞能量代谢与生长之间的密切关系。同时发现 ,耗氧速率 (OUR)能够及时、敏感地反映细胞的代谢活力 ,预示细胞的生长变化。据此提出了利用OUR控制补料速率的初步设想。 相似文献
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牛布氏杆菌抗独特型杂交瘤细胞的悬浮培养研究 总被引:1,自引:0,他引:1
牛布氏杆菌抗独特型杂交瘤细胞F9株能稳定地分泌高效价的抗独特型抗体,其Ig类型为IgG2a,并具有抗原“内影象”和良好的免疫原性。该细胞培养在Techne-T104型1.5L细胞培养装置中,最适连续培养条件是pH7.1~7.5;36.5±0.5℃,搅拌速度35~45r/min。在连续悬浮培养时,细胞密度维持在3.2×105~8.2×105/ml,单克隆抗独特型抗体浓度可达1.04mg/ml,培养上清ELISA捕获法效价达1:160。 相似文献