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以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示:多克隆抗体中存在靶向偶联抗原3个区域的独特型抗体,总效价为1∶78 125,其中抗灵芝酸A特异性抗体效价为1∶3 125。间接竞争酶联免疫吸附测定法的灵芝酸A检出限为0.3μg/L,半数抑制浓度为4.0μg/L,线性范围在0.6~27.3μg/L之间。样品测定批间变异系数低于10%,样品加标回收率在82.9%~118.6%之间,对22份灵芝粉剂产品的测定结果显示不同品牌产品中灵芝酸A含量的差异极显著,该法测定结果与高效液相色谱法的测定结果相比,相关系数为0.972。结果表明,间接竞争酶联免疫吸附法测定灵芝酸A可行,该方法能够为灵芝保健品市场中相关产品的质量监控提供一种辅助方案。 相似文献
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本文将牛奶过敏原β-乳球蛋白抗原分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠制备其多克隆抗体和单克隆抗体,并对所获得的抗体进行了效价等特性测定;采用蛋白A亲和层析法将多克隆抗体进行了纯化,采用辛酸-硫酸铵法对单抗细胞株3A7进行了纯化;实验建立了双抗体夹心的ELISA检测方法,并对一些蛋白样品进行了初步的检测。实验结果表明,所制备的抗β-乳球蛋白兔多克隆抗体效价达到了1:6.56×106;Western-blotting鉴定结果显示所制备的多克隆抗体能够与β-乳球蛋白特异性反应;3株单抗的效价均在106以上,纯化后多抗仅与酪蛋白有一定的交叉反应,而纯化后单抗与乳中主要蛋白及其它过敏原蛋白基本没有交叉反应,特异性很好;利用所建立的方法对一些蛋白样品进行检测,准确率100%。 相似文献
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双抗夹心酶联免疫吸附法检测沙门氏菌 总被引:5,自引:0,他引:5
沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门氏菌单克隆抗体C1359作为检测抗体,建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法可以检测A、B、C、D、E等五种典型的沙门氏菌,对沙门氏菌纯培养液的最低检测量为1×104CFU/mL,与其他杂菌不存在交叉反应,具有较好的灵敏性和特异性。 相似文献
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为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度(IC50)为12.37ng/mL;定量检测线性范围(IC20~IC80)为0.439~110.78ng/mL;检测限(IC10)达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。 相似文献
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呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法 总被引:2,自引:0,他引:2
为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度(IC50)为12.37ng/mL;定量检测线性范围(IC20~IC80)为0.439~110.78ng/mL;检测限(IC10)达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。 相似文献
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恩诺沙星快速酶联免疫吸附法检测试剂盒的研制 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:研制恩诺沙星酶联免疫吸附法检测试剂盒。方法:采用EDC-NHS 法制备ENR-M-BSA 免疫原和ENR-OVA 检测抗原,用ENR-M-BSA 免疫BALB/C 小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法筛选单克隆抗体并采用间接竞争ELISA 对其进行分析。结果:通过公式计算ENR-M-BSA 摩尔偶联比为15:1,ENR-OVA 摩尔偶联比为7.2:1。筛选出1 株特异性分泌株3E9,其腹水纯化后间接竞争ELISA 测其效价为107,分型试剂盒测试显示此抗体属于IgG1 型;检测限为1ng/mL,线性范围在1~100ng/mL 之间,半量抑制浓度(IC50 值)为10ng/mL,与4 种结构类似物交叉反应均小于1%。结论:此株单克隆抗体可以用来建立恩诺沙星ELISA 检测试剂盒。 相似文献
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提取制备荞麦过敏原蛋白(TBt)并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法(ELISA)用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.1616μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。 相似文献
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双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白 总被引:1,自引:0,他引:1
提取制备荞麦过敏原蛋白(TBt)并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法(ELISA)用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16~16μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。 相似文献
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目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的dcELISA检测虾过敏蛋白。结果:所建立的dcELISA法最低检测限为3.94ng/mL,标准曲线在0.12~128.86ng/mL范围内线性良好,批内和批间变异系数分别为6.16%和2.73%,回收率为82%~98%。结论:该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为进一步研制检测虾过敏蛋白的ELISA试剂盒提供有效的方法。 相似文献
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目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的dcELISA检测虾过敏蛋白。结果:所建立的dcELISA法最低检测限为3.94ng/mL,标准曲线在0.12~128.86ng/mL范围内线性良好,批内和批间变异系数分别为6.16%和2.73%,回收率为82%~98%。结论:该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为进一步研制检测虾过敏蛋白的ELISA试剂盒提供有效的方法。 相似文献
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通过三唑磷与乙酰氯反应,得到三唑磷半抗原,通过免疫动物得到抗三唑磷单克隆抗体,将其应用于能够检测蔬菜中三唑磷残留量的酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒,结果表明:该试剂盒对结球甘蓝中三唑磷的检测限为49.6 μg/kg,IC50为6.9 μg/L,加样回收率为70.0%~93.5%,三唑磷标准曲线线性范围为1~81 μg/L,批内、批间的相对标准偏差(RSD)<10%,三唑磷单克隆抗体与毒死蜱、对硫磷的交叉反应率分别为2.3%,3.8%。4 ℃条件该试剂盒下能够保存12个月,稳定性较好。 相似文献
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目的 制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法 首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果 GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r2=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration, IC50)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%~110.35%,... 相似文献
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西马特罗单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过制备西马特罗半抗原,载体蛋白与之偶联合成免疫原,免疫原用于免疫动物,获得抗西马特罗单克隆抗体,制备能够检测猪尿中西马特罗残留量的酶联免疫试剂盒。结果表明,该试剂盒对猪尿中西马特罗的检测限为0.295 μg/L,半抑制浓度(IC50)值为0.870 μg/L,回收率范围为81.5%~103.5%,标准曲线线性范围为0.1~8.1 μg/L,精密度试验结果批内、批间的相对标准偏差(RSD)均<15%,表明该检测方法准确度和精密度高。该试剂盒特异性较好,于4 ℃条件下能够保存12个月,稳定性较好,可以用于猪尿中西马特罗德快速检测。 相似文献
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以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC 29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256 000,6E3的效价为1∶128 000,5B10的效价为1∶64 000,1E9的效价为1∶32 000。亚型鉴定结果显示1E9的亚型为Ig G1,6E3的亚型为Ig G2b,其余抗体2A7、2D10、3E5、5B10、12A2的亚型均为IgG2a。对7株抗体进行特异性检测结果显示,2A7能与3株阪崎克罗诺杆菌(ATCC 29004、ATCC 29544、ATCC 12868)都结合,1E9能与其中两株(ATCC 29004、ATCC 12868)结合,且与其他11株类似菌和常见致病菌交叉反应结果显示7个抗体均有良好的特异性。用2A7建立的间接竞争酶联免疫吸附测定法对阪崎克罗诺杆菌的检测灵敏度可达到10~6 CFU/m L。 相似文献
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Wang R Wang Z Yang H Wang Y Deng A 《Journal of the science of food and agriculture》2012,92(6):1253-1260
BACKGROUND: Imidacloprid is one of the main neonicotinoid insecticides widely used in agriculture owing its broad spectrum of activity and low bioaccumulation. However, imidacloprid is toxic to honey bees and other beneficial organisms, and its residues may occur in environmental and food samples, posing a potential hazard to consumers. In this study the imidacloprid derivative bearing a three‐atom length spacer was synthesized and coupled to carrier proteins. Highly sensitive and specific polyclonal antibodies against imidacloprid were successfully produced and the polyclonal antibody‐based enzyme‐linked immunosorbent assay (pAb‐ELISA) was developed. RESULTS: The ELISA standard curve was constructed within the concentration range 0.1–100 ng mL?1. The IC50 value for nine standard curves was in the range 1.2–3.0 ng mL?1 and the limit of detection was 0.03–0.16 ng mL?1. The sensitivity of the assay was one order of magnitude higher than that in most published papers. There was almost no cross‐reactivity of the antibody with four structurally related compounds (acetamiprid, nicotine, clothianidin and nitenpyram) and six other compounds, indicating that the assay displays not only high sensitivity but also high specificity. No detectable imidacloprid was found in 11 collected environmental and food samples by the assay. For imidacloprid‐spiked samples, acceptable recoveries of 73.4–94.4% and intra‐assay coefficients of variation of 2.2–12.8% were obtained. The assay was also validated with high‐performance liquid chromatography (HPLC) and a good correlation of ELISA with HPLC was achieved. CONCLUSION: The proposed ELISA provides a sensitive, specific, simple and cost‐effective quantitative/screening method for detecting imidacloprid in environmental and food samples. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry 相似文献