α-细辛醚诱导人食管癌细胞系Eca-109凋亡的实验研究

目的:探讨α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响。方法:体外培养人食管癌细胞株(Eca-109),分别给以不同浓度的α-细辛醚对Eca-109细胞进行干预。DAPI染色倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,MTT检测细胞增殖率,流式细胞仪Annexin V-PI双染检测细胞凋亡率的变化。结果:不同浓度、不同作用时间的α-细辛醚组细胞增殖抑制率比较,差异有显著性(P<0.05);细胞凋亡指数与阴性对照组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论:α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞凋亡有促进作用。     

RANTES衍生物与HIV-1进入抑制剂

HIV-1-1进入抑制剂的研究是近年来艾滋病药物研发领域的新热点,其中最受关注的是以CCR5为靶点的新药研发。CCR5是病毒进入细胞的主要辅助受体,在HIV-1进入宿主细胞过程中起着非常重要的作用。作为CCR5的天然配体,CC类的趋化因子RANTES、MIP-1α和MIP-1β都是极具潜力的HIV-1抑制剂,特别是有关对RANTES的定向设计的研究尤为引人关注,其目的是设计出一种既有很强的抗病毒能力而又不引发炎症反应的HIV-1拮抗剂。就RANTES衍生物应用于抑制HIV进入细胞方面的研究进行了综述。     

紫蛇尾皂苷的初步纯化和生物学活性研究

对紫蛇尾Ophiopholis mirabilis皂苷粗提物进行初步纯化,并对所得产物的抑菌活性、抑制α-葡萄糖苷酶活性和细胞毒活性进行了研究。采用AB-8大孔吸附树脂初步纯化紫蛇尾皂苷粗提物,采用香草醛—高氯酸法测定总皂苷含量,采用滤纸片法测定抑菌活性,采用比色法和MTT法分别测定α-葡萄糖苷酶和MCF-7人乳腺癌细胞的抑制率。结果表明:纯化后的紫蛇尾皂苷纯度增加至48.57%;皂苷粗提物及纯化物的抑菌活性表现一致,均对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis具有明显的抑制作用,且纯化物的抑菌效果略强;皂苷粗提物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果明显,大孔树脂95%乙醇洗脱所得纯化物的抑制率达到94.62%;皂苷粗提物及纯化物对MCF-7人乳腺癌细胞均表现出了很强的细胞毒活性,其中大孔树脂60%、75%、95%乙醇洗脱所得纯化物的浓度为300μg/m L时,细胞抑制率均高达97%以上。研究表明,紫蛇尾皂苷粗提物及纯化物均表现出了很强的选择性抑菌活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性和对MCF-7人乳腺癌细胞的细胞毒活性,且纯化物的活性增强。     

新城疫病毒7793株HN基因片段原核表达及功能鉴定

HN蛋白是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的血凝素神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN),是NDV识别宿主细胞的包膜蛋白。NDV-HN能与NK细胞的NKp46受体结合,活化NK细胞上调TNF-α和IFN-γ发挥抗瘤效应[1]。然而HN蛋白是否能直接活化NK细胞上调TNF相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)尚待阐明。因此对新城疫病毒7793株(NDV 7793)HN基因主要抗原表位区域进行克隆和原核表达,并对重组HN(recombinant HN,rHN)蛋白是否能活化NK细胞上调TRAIL进行研究。流式细胞分析表明rHN蛋白的纯化产物能与小鼠胸腺的NK细胞膜分子NKp46结合,并上调NK细胞TRAIL的表达。HN抗体阻断试验能部分抑制HN-NKp46结合及NK细胞TRAIL上调的效应。这一结果将为进一步研究NDV-HN直接活化NK细胞增强抗肿瘤效应的胞内信号传导提供依据。     

利用酿酒酵母稳定完整表达融合蛋白hPTH(1-34)_(ab)-HSA

为稳定完整表达人甲状旁腺激素(hPTH)(1-34)二联体与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,以酿酒酵母为宿主,利用重叠PCR技术,将α-factor基因拼接到hPTH(1-34)ab-HSA基因片段上,获得α-hPTH(1-34)ab-HSA,并插入穿梭表达质粒pYX212,构建了基因工程菌S.cerevisiae W303-1A/pYX-α-hPTH(1-34)ab-HSA。经Western blot分析及N端氨基酸测序表明,该工程菌表达分泌了具有HSA和hPTH抗原性的完整hPTH(1-34)ab-HSA融合蛋白,解决了毕赤酵母不能稳定完整表达融合蛋白hPTH(1-34)ab-HSA的问题。     

酶消化法分离培养原代肺动脉平滑肌细胞及免疫组化鉴定

目的建立体外胶原酶消化法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)及免疫鉴定的方法。方法采用I型胶原酶对PASMCs进行体外培养。在无菌环境下,分离提取雄性Sprague Dawley(SD)大鼠肺动脉主干,剥离外膜、剔除内皮细胞,经酶消化法,体外培养PASMCs。倒置相差显微镜观察PASMCs生长状态及特点;台盼兰测定细胞活力;免疫细胞染色法进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SM actin)鉴定。结果酶消化法分离培养的PASMCs 3 d后,可见细胞贴壁呈梭形生长,6 d后生长迅速呈典型的峰-谷状生长,9 d后达90%融合。通过形态学观察及免疫荧光染色法鉴定表明:培养的细胞为PASMCs;细胞存活率为98.5%;原代培养8~10 d后即可传代,3-10代细胞生长迅速、细胞形态不易发生改变,可用于进行细胞实验。结论采用I型胶原酶消化法简单易行、可靠、PASMCs生长迅速、传代周期短的特点;尤为重要的是,培养的原代PASMCs可用于肺动脉高压和肺血管重构的研究工作。     

三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后活性的影响

目的:检测三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后的影响,探索三七总皂苷对内皮细胞的保护作用。方法:把体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代培养,共分为6组,即正常组,模型组,三七总皂苷4个浓度组,用10μg·L~(-1)的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)造成细胞损伤模型,三七总皂苷组分别加入不同浓度的三七总皂苷2.5 mg·L~(-1)、5 mg·L~(-1)、10 mg·L~(-1)、20 mg·L~(-1),用CCK-8方法检测各组细胞活性。结果:CCK-8检测结果显示,人脐静脉内皮细胞在TNF-α诱导损伤后,用4个浓度的三七总皂苷干预,随着时间的延长,细胞存活率逐渐降低,组间差异具有统计学意义,其中6 h的细胞存活率最高,24 h的细胞活性最差,差异无统计学意义;和模型组相比,三七总皂苷4个浓度组细胞活性明显较高(P<0.01或P<0.05),其中5 mg·L~(-1)三七总皂苷组细胞活性最高,与模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:三七总皂苷能提高人脐静脉内皮细胞损伤后的活性。     

猪伪狂犬病毒免疫机制简述

<正>猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒引起的包括猪、羊、牛等动物的共患传染性疾病。伪狂犬病病毒(PRV)又称奥耶斯基病病毒或猪I型疱疹病毒,与人单纯疱疹病毒(HSV-1)以及带状疱疹病毒(VZV)同属α疱疹病毒。早在1813年,国外就出现了关于伪狂犬病的报道,初期称之为"奇痒病"。猪伪狂犬病毒只有一个血清型,但是不同毒株之间的生物学特性和毒力存在差异。本文简要介绍了猪伪狂犬病毒免疫机制。     

Graves病患者外周血中树突状细胞及相关细胞因子的变化

目的检测Graves病人外周血细胞因子和树突状细胞(DCs)不同亚群的数量和表达情况,初步探讨DCs细胞亚群在疾病中的作用。方法利用流式细胞仪检测30例Graves病患者和30名健康体检者的外周血树突状细胞亚群数量,同时利用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)及IL-6等细胞因子的水平。结果测得Graves组髓样树突状细胞(p DC)和浆细胞样树突状细胞(m DC)值均高于正常对照组。ELISA检测细胞因子发现,Graves患者血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6水平均高于正常对照组,其中TNF-α显著升高(P<0.01),而IL-2水平显著低于对照组(P<0.01)。结论 Graves病人中p DC和m DC水平升高,细胞因子分泌失调,Th1/Th2失衡,从而导致机体自身免疫反应的产生。     

一种新型亮氨酸5-羟化酶NmLEH的异源表达、纯化及酶学性质分析

羟基化氨基酸是一种新型氨基酸衍生物,可广泛用作化工材料的前体物及医药合成的中间体。将来源于Nostoc minutum的新型L-亮氨酸5-羟化酶(Nm LEH)通过重组质粒在大肠杆菌中异源表达。结果表明,在BL21 (DE3)宿主细胞中,诱导温度为25℃,IPTG诱导浓度为0. 5mmol/L,诱导10h时,蛋白质表达量最高(0. 45mg/ml);通过Ni-亲和层析和凝胶过滤层析两步分离纯化获得了高度纯化的重组Nm LEH蛋白;对Nm LEH的酶学性质进行了表征,该酶的最适反应温度为25℃,最适pH为7. 5,在pH 7. 0～9. 0较为稳定,最适底物为亮氨酸和甲硫氨酸;同源序列分析表明Nm LEH属于亚铁和α-酮戊二酸依赖性双加氧酶家族[Fe(II)/αKG-Dos],并预测了该酶的保守催化活性位点(H150、D152、H236);通过同源建模得到了该蛋白质的模拟结构,分析了该蛋白质催化活性中心的形成机制。