中国流行株HIV-1Gag与IFN-α2b重组质粒的构建与实验免疫研究

目的探讨中国流行株 ＨＩＶ－ １Ｇａｇ与 ＩＦＮ－ α２ｂ共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以 核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体,构建重组核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ－ＩＦＮ,通过间接免疫荧光 试验、ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测Ｃａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,进行淋巴细 胞转化试验、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测。 结果构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖,诱导特异性 ＣＴＬ反应,当和 ＩＦＮ－α２ｂ共表达时免疫效果更加显著。结论与 Ｇａｇ蛋白共表达的 ＩＦＮ－ａ２ｂ能够进一步提高细胞 免疫与体液免疫水平,构建的重组质粒为ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗的研究奠定了一定实验基础。     

利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达 HIV-1Gag蛋白

目的在昆虫细胞中表达中国流行株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白,制备重组 Ｇａｇ蛋白。方法将中国 株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１的 Ｇａｇ全基因序列,克隆到杆状病毒表达载体 ｐｆａｓｔｂａｃＩ中,构建了重组质粒 ｐｆａｓｔＧａｇ。经转座及平板 筛选,提取重组穿梭质粒 Ｂａｃｍｉｄ。经转染Ｓｆ９昆虫细胞后,获得了重组杆状病毒。用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和间接免疫荧光实验分析表达的目的蛋白。结果重组病毒在昆虫细胞 Ｓｆ９中高效表达了中国株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋 白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性,可与ＨＩＶ－１标准阳性血清及ｐ２４单克隆抗体发生较强的免疫反应。结论 重组表达产物可用于艾滋病的免疫诊断和疫苗研究。     

EHV-1_(CN)与IL-2基因共表达核酸疫苗诱导产生CTL的观察

目的 观察ＨＩＶ－１ＣＮ　ｇｐ１２０基因与ＩＬ－２基因共表达核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＬ－２诱导产生ＣＴＬ。方法 脂质体介导共表达中国流行株ＨＩＶ－１Ｇａｇ－ｇｐ１２０基因与ＩＬ－２基因的核酸疫苗质粒ｐＧＩＬ－２转染ＢＨＫ－２１细 胞,以间接免疫光法鉴定其表达。取ｐＧＰＩＬ－２免疫鼠脾细胞,检测ｐＧＰＩＬ－２诱导的细胞毒性Ｔ细胞杀伤活性。 结果ｐＧＰＩＬ－２可有效地诱导ＣＩＬ的产生,并可杀伤ＨＩＶ－１ＣＮ嵌合基因转染的靶细胞。结论 为进一步设计中国流行株ＨＩＶ－１核酸疫苗提供了重要实验依据。     

中国流行株HIV-1Gag蛋白在重组鸡痘病毒的表达及鉴定

目的 以鸡痘病毒为载体,表达ＨＩＶ－１　Ｇａｇ蛋白,进而研制ＡＩＤＳ疫苗。方法 以鸡痘病毒２８２Ｅ４株 非必需区ＴＫ基因为侧翼,插入ＶＶ突变型Ｐ７．５串联启动子和牛痘病毒Ａ包涵体晚期启动子与２０个串联的突变型 早期痘苗病毒Ｐ７．５启动子组成复合启动子及ＬａｃＺ报告基因构建重组表达质粒ｐＵＴＡＬ。在ＡＴ１－Ｐ７．５复合启动子 下游,插入编码中国流行株 ＨＩＶ－１　Ｇａｇ基因（Ｂ亚型）,构建了重组表达质粒ｐＵＴＡＬ－Ｇａｇ。重组质粒Ｇａｇ与ＦＰＶ共 转染ＣＥＦ细胞,进行同源重组。通过ＢＵｄＲ加压筛选,Ｘ－ｇａｌ染色,获得重组鸡痘病毒ｖＵＴＡＬＧ,用于感染ＢＨＫ细胞 并免疫小鼠。结果　经Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测,重组病毒表达了Ｇａｇ蛋白相对分子质量分别为５５０００、４８０００、２４０００和 １７０００,为Ｇａｇ蛋白的Ｐ５５、Ｐ４８、Ｐ２４和Ｐ１７蛋白。重组病毒免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。结论　所重组的病毒 成功地表达了目的蛋白并进行了正确加工。     

利用中国流行株HIV-1 Gag重组痘苗病毒与核酸疫苗免疫的新程序

目的 将中国流行株ＨＩＶ－１　Ｇａｇ基因在痘苗病毒中表达,以重组痘苗病毒与核酸疫苗混合免疫,进 而研制艾滋病疫苗。方法 将中国流行株ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因片段插入到ｐＪ３８载体启动子下游,经同源重组和血凝素 阴性空斑筛选重组痘苗病毒,经 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ检测目的蛋白。以重组痘苗病毒与核酸疫苗进行小鼠免 疫试验,淋巴细胞转化实验,ＣＩＬ,ＣＤ＋４;ＣＤ＋８细胞计数及细胞免疫和体液免疫水平检测。结果 重组痘苗病毒ｖＪ３８ Ｇａｇ具有良好的免疫原性,与２ｒＶＶ－ＤＮＡ混合免疫效果更好。结论 重组痘苗病毒 ｖＪ３８ Ｇａｇ能够表达Ｇａｇ蛋白并诱 导机体产生细胞免疫和体液免疫。     

热力对IgG制品中的HIV—1灭活的研究

采用病毒感染细胞技术观察热力对ＩｇＧ制品中人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）的灭活作用。冻干ＩｇＧ中ＨＩＶ－１（１０＾４．８ＴＣＩＤ５０）可被８０℃２ｈ和１００℃３０ｍｉｎ灭活。ＩｇＧ溶液中的ＨＩＶ－１（１０＾６．１ＴＣＩＤ５０）可被６０℃２０ｍｉｎ和８０℃５ｍｉｎ灭活。用灭活后的ＨＩＶ－１再感染ＭＴ４细胞，通过连续传代培养（３代，２１天）后，细胞均未出现感染性病变，提示ＨＩＶ－１对热较敏感。     

腺病毒载体介导的HSV-tk基因杀伤肿瘤细胞的研究

目的 探讨ＨＳＶ－ｔｋ基因对各种肿瘤细胞的杀伤作用及人、鼠瘤细胞对其敏感性及瘤细胞表面的αｖ 整合素对腺病毒载体转染的影响。方法用同源重组法构建 ＡｄＣＭＶ ｔｋ基因;蚀斑形成法对重组腺病毒进行扩增、 滴定;Ｘ－ｇａｌ染色法观察腺病毒转染率,结晶紫染色法检测 ＡｄＣＭＶｔｋ／ＧＣＶ的杀伤作用。结果 ＡｄＣＭＶｔｋ对肿瘤细胞 的杀伤强度在一定范围内与ＡｄＣＭＶｔｋ的剂量呈正相关;对人类的Ｈｅｌａ、ＧＲＣ、Ｈｅｐ－２瘤细胞达１００％转染所需的腺病 毒感染复数量（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ,ｍ．ｏ．ｉ）较鼠Ｌｅｗｉｓ、ＢＴＴ７３９瘤细胞的ＭＯＩ量低;在相同ＭＯＩ病毒量时,有αｖ整合 素的瘤细胞转染率高于无αｖ整合素的瘤细胞。结论ＡｄＣＭＶｔｋ／ＧＣＶ具有较明显的杀伤肿瘤细胞的作用,且有种属 差异,对人瘤细胞作用大于鼠瘤细胞,瘤细胞表面的αｖ整合素有利于腺病毒的转染。     

CD25抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

目的 获得抗人ＣＤ２５分子单抗的轻链及重链可变区基因,并进行序列分析。方法 采用ＲＴ－ ＰＣＲ,从ＷｕＴａｃ细胞总ＲＮＡ中扩增出轻链、重链可变区基因,进行克隆并作核苷酸序列分析。结果　构建的ＰＭＤ１８ －Ｔ－ＶＬ和ＰＭＤ１８－Ｔ－ＶＨ重组克隆载体,酶切与预期结果相符。ＶＨ和ＶＬ基因序列与鼠抗体的同源性大于 ８０％。克隆的重链可变区基因长度为３５１ｂｐ,属于鼠重链Ⅲ（Ｃ）亚类。轻链可变区基因长度为３２４ｂｐ,属于鼠轻链 Ⅳ 亚类。结论 本研究采用ＲＴ－ＰＣＴ法扩增出轻链及重链可变区基因,并进行了序列测定和分析,为进一步构建嵌 合抗体以及单链抗体奠定了基础。     

HCV C区基因片段的克隆、表达及纯化

目的研究 ＨＣＶ Ｃ区片段在大肠杆菌中的表达及纯化工艺。方法采用 ＲＴ－ＰＣＲ技术,从ＨＣＶ感 染者血清中克隆Ｃ区基因片段,插入ｐＥＴ２８ａ（＋）质粒中,并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。采用亲和层析或 Ｓａｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ－２００柱层析纯化抗原。结果两种纯化工艺的收率分别为５８ｍｇ／Ｌ和９５ｍｇ／Ｌ发酵液。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯 度分别为９８％和９０％。ＥＬＩＳＡ检测纯化抗原具有较好的抗原性和特异性。结论两种纯化工艺简便,重组蛋白纯 度高,可用于ＥＬＩＳＡ试验。     

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)不同间隔时间加强免疫的效果

为进一步探讨甲型肝炎减毒活疫苗的优化免疫方案，我们进行了不同间隔时间加强免疫的效果观察，现将结果报告如下。 甲型肝炎减毒活疫茵（Ｈ２株）为浙江普康生物技术股份有限公司生产。滴糜为１０６．５ＴＣＩＤ５０／ｍｌ，每剂１ｍｌ，皮下注射。 观纂对象为浙江省台州市椒江区，随机挑选４个小学的学生，年龄在７－１３岁之间，以前从未接种过甲肝央苗，且抗－ＨＩＶ－ＩｇＧ队为阴性（ＥＬＩＳＡ法）。总人数２５９名，分别于第１针接种后６个月，１２个月，３年和６年接种第２针，观察抗－ＨＡＶ－ＩｇＧ阳转率及几何平均滴度（ＧＭＴ…     

甲型肝炎病毒(H2株)快速适应变异株全基因序列分析

目的 探索甲型肝炎病毒（Ｈ２株）细胞适应的分于机制。方法 将甲型肝炎减毒活疫苗毒株（ＨＡＶ Ｈ２Ｋ７）在人胚肺二倍体细胞ＫＭＢ１７上快速连续传代增强适应（１４ｄ）,检测连续传代后抗原滴度和感染性滴度,测定 第１８代（ＨＡＶ Ｈ２Ｋ７Ｐ１８）全基因组序列。结果 适应至第１８代抗原滴度达１：５１２,感染性滴度为７．５ＬｏｇＣＣＩＤ５０／ｍｌ。 整个基因组出现了１０个核苷酸突变,变异卒为０．１３％,变异较大区域位于５’末端非编码区（５’ＵＴＰ）,有３个核苷酸 变异。编码区７个交变,２个是无义突变,５个有义突变导致５个氨基酸变化,分别位于 ＶＰ２ Ａ－Ｓ;２Ｃ,Ｑ－Ｐ;３Ａ,Ｒ－ Ｃ;３Ｃ,Ｔ－Ａ和３Ｄ,Ｖ－Ｇ。结论 ＨＡＶ Ｈ２Ｋ７４因组５’ＵＴＲ、２Ｃ区、３Ａ区、３Ｃ区和３Ｄ区变异协同作用促进在 ＫＭＢ１７ 细胞上快速增强适应。     

赤泥塑料给水管接件研究

文章研究了赤泥塑料（ＲＭ－ＰＶＣ）应用于给水管材及管件的情况，在小口径给水管材（Ｇ１／２″￣Ｇ１ １／２″）采用螺纹结构，管件采用注塑螺纹结构，ＲＭ－ＰＶＣ进行高填充的共混试验，从而获得性能良好、价格低廉的注塑管件材料。     

高结构导电炭黑填充硅橡胶复合材料的性能

研究了导电炭黑（ＨＧ－ＣＢ）的高结构对乙烯基甲基硅橡胶（ＶＭＱ－１１０）复合材料电性能和机构性能的影响。由ＴＥＭ观察看出,随ＨＧ－ＣＢ用量增加,其在硫化胶中形成的导电网络逐渐完善,用量达１９份（质量份,下同）时已形成完整的导电网络,导电机理可用电子隧道效应来解释,同时随ＨＧ－ＣＢ填充量增加,复合材料的拉伸强度、硬度增大,但对ＶＭＱ－１１０的硫化有影响。欠硫现象严重,ＨＧ－ＣＢ的用量一般控制在１０～１５份,所得硅橡胶复合材料具有较佳的电性能和机械性能。     

噬茵体展示短肽模拟腺病毒表位的研究

目的为了获得含有中和抗体相关的３型腺病毒模拟表位短肽的噬菌体克隆,并观察其对该病毒 感染Ｈｅｌａ细胞的保护效应,为设计新疫苗提供新的思路。方法用３型腺病毒中和抗体筛选噬菌体随机十五肽 库,经三轮筛选后,随机挑取了２２个噬菌体克隆,分别加入３型腺病毒感染的Ｈｅｌａ细胞,用结晶紫染色法观察Ｈｅｌａ 细胞的病变程度。并选择一个有明显保护作用的阳性噬菌体克隆进行测序。结果８／２２个克隆噬菌体短肽对３ 型腺病毒感染 Ｈｅｌｄ细胞具有保护作用。其中一个有明显保护作用的噬菌体短肽的序列为： ｌｅｕ－ Ｖａｌ－ Ｇｌｙ－ Ｉｌｅ－ Ｔｒｐ －Ｈｉｓ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｌａ,即ＬＶＧＩＷＨＲＬＰＧＡＨＲＧＡ。结论噬菌体短肽可以模拟中和 抗体相关的腺病毒表位,对３型腺病毒感染Ｈｅｌａ细胞有一定的保护作用。     

人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化

目的　为了获得大量重组人血管内皮细胞生长因子（ Ｈｕｍａｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ, ｈＶＥＧＦ）,以研究其在心血管和药学领域具有的潜在药用价值。方法　用ＰＣＲ方法扩增目的基因ｈＶＥＧＦ１６５,连接到 ｐＥＴ－３ａ载体上,并转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,建立可高效表达的ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ１６５重组质粒,经ＩＰＴＧ诱导表达, Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测表达产物的抗原性,通过 Ｍｏｎｏ Ｑ阴离子层析和ＦＰＬＧ　Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２分子筛柱层析,进行初步纯化,用 ＭＴＴ法检测其生物学活性。结果 　ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ表达产物经纯化后,其纯度可达到９０％以上,表达的ｒｈＥＶＧＦ１６５能 呈剂量依赖性地促进人静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的增殖。结论组建了天然形式ｈＥＶＧＦ１６５的大肠杆菌菌株,并摸索 出一套纯化工艺,为大规模生产重组ｈＥＶＧＦ１６５奠定了基础。     

1-苯基-3-甲基-4-(α-呋喃甲酰基)-5-吡唑酮与中性磷萃取剂对钍(IV)的协同萃取

研究了１－苯基－３－甲基－４－（α－呋喃甲酰基）－５－吡唑酮（ＨＰＭＦＰ,ＨＡ）与氧化三正辛基膦（ＴＯＰＯ,Ｂ）或氧化三苯基膦（ＴＰＰＯ,Ｂ）的甲苯溶液从硝酸介质中对钍（ＩＶ）的协同萃取行为．用斜率法确定了ＨＡ－ＴＰＰＯ－Ｃ６Ｈ５ＣＨ３体系萃取钍（ＩＶ）的协萃配合物组成为ＴｈＡ４·ＴＰ－ＰＯ,求得了体系的协萃平衡常数,比较了在不同稀释剂中ＨＡ－ＴＰＰＯ对钍（ＩＶ）的萃取能力     

乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白基因在昆虫细胞中的表达及…

从乙肝阳性人血清中克隆ＨＢＶ含前ｓ区表面抗原基因，将基插入到杆状病毒转移质粒ＰＶＬ１３９３中，并与昆虫病毒ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞，筛选出重组病毒。用乙肝放免（ＲＩＡ）试剂盒及ＥＩＡＰｒｅＳ２－Ａｇ检测试剂盒检测重组病毒感染的Ｓｒ９细胞，表明细胞中有ＨＢｓＡｇ及ＰｒｅＳ２－Ａｇ存在。将重组病毒感染的细胞免疫小鼠，在小鼠血清中能检测到ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇｅ及ａｎｔｉ－ＰｒｅＳ２抗体。     

国产瑞泰羟丙基甲基纤维素质量分析

本文剖测了以国产瑞泰羟丙基甲基纤维素所制备的ＳＧ－７型ＰＶＣ树脂质量，并与进口（日）信越ＨＰＭＣ９６５ＳＨ５０）等ＰＶＣ树脂进行了特性对比和评价。     

合成2,6-二甲基苯胺的催化剂及工艺条件研究

通过实验筛选出该反应的催化剂为Ｖ２Ｏ５ － Ｃｒ２Ｏ３ － Ａｌ２Ｏ３ ,确定了浸渍法制备的浸渍液质量分数为１３－２％ ,催化剂中主催化剂Ｖ２Ｏ５ 的最佳质量分数为１０ ％ ,最佳改性金属氧化物为Ｃｒ２Ｏ３及最适宜比例为ｎ（Ｖ２Ｏ５）∶ｎ（Ｃｒ２Ｏ３） ＝１０∶１ 。通过工艺条件考察,筛选出最佳工艺条件为：反应温度３７０ ℃,原料配比ｎ（Ｃ７Ｈ７ＮＨ２）∶ｎ（ＣＨ３ＯＨ）∶ｎ（Ｈ２Ｏ）＝ １∶３∶１,液时空速０－５／ｈ,原料中加入水可明显提高目的产物选择性。反应转化率为７４－２９ ％ ,目的产物选择性为５１－２４ ％ 。     

红外光谱法测热可逆共价键交联氯醇橡胶的组成

以交联单体双环戊二烯二甲双缩水甘油酯（ＤＧＤＣＡ）的特征峰（１７１２ｃｍ＾－１）和环氧氯丙烷均聚物（ＰＥＣＨ）的特征峰（７５０ｃｍ＾－１）为定量计算的基准峰,测定不同质量比的ＤＧＤＣＡ与ＰＥＣＨ混合物ＩＲ谱图。混合物组成与光密度比值（Ｄ１７１２／Ｄ７５０）关系的回归方程为：（Ｄ１７１２／Ｄ７５０＝０．０２０９＋６．６４ＷＤＧＤＣＷＥＣＨ）,进而建立了通过Ｄ１７１２／Ｄ７５０求取共聚物中ＤＧＤＣＡ结