悬浮培养霍山石斛原球茎合成活性多糖的研究

本文考察了基本培养基、碳源、氮源以及有机添加物对霍山石斛原球茎液体培养合成活性多糖的影响。在MS、B5、N6、SH及各自1／2基本培养基中，以1／2MS和N6最适多糖合成，继代培养30d，总多糖产率分别达到479．47mg／L和417．05mg／L。使用单一碳源时，葡萄糖对多糖的积累优于蔗糖和果糖，在30g／L时，总多糖产率达到1034．96mg／L。在一定浓度范围内，氮源种类对多糖的合成影响不太明显，但氮源浓度是主要冈素，以10mmol／L最佳。另外，100g／L的马铃薯提取液与100g／L的香蕉提取液均有利于多糖的合成。     

提取温度对霍山石斛多糖理化性质及肠道黏膜免疫活性的影响

目的:研究提取温度对霍山石斛多糖提取量、理化性质以及肠道黏膜免疫活性的影响。方法:在不同提取温度(40、60、80、100℃)条件下水提醇沉法提取霍山石斛多糖(Dendrobium huoshanense polysaccharides,DHP),并测定多糖提取量和特性黏度;采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)、气相色谱(gas chromatography,GC)、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectrometry,FTIR)技术分析霍山石斛多糖及其阴离子交换色谱水洗组分和盐洗组分的分子质量分布、单糖组成和特征基团;以体外培养的小鼠小肠Peyer结细胞的培养液对小鼠骨髓细胞增殖作用为指标,测定多糖及其分级组分的肠道黏膜免疫调节活性。结果:DHP的提取量随提取温度的升高而增加,但其特性黏度呈现下降趋势。HPLC分析表明不同温度条件下提取的多糖均由高分子质量(higher molecular weight,HMW)和低分子质量(lower molecular weight,LMW)两种组分所构成,LMW热稳定性好、主要存在于阴离子交换色谱的水洗脱组分(water-eluted fraction,DHPW),HMW热稳定性弱、主要存在于阴离子交换色谱的盐洗脱组分(salt-eluted fraction,DHPS);GC和FTIR分析显示,DHPW主要由呈α-构型的葡萄糖所组成、不含糖醛酸,DHPS主要由呈β-构型的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖所组成,且含糖醛酸;不同温度提取的DHP及其阴离子交换色谱DHPW和DHPS均表现出肠道黏膜免疫调节活性,且DHPS比DHPW具有更强的肠道黏膜免疫调节活性,但它们的活性均随提取温度的升高而下降。结论:不同提取温度不仅影响DHP的提取量,而且可明显改变DHP的特性黏度、分子质量分布、单糖组成和肠道黏膜免疫调节活性,较高的提取温度在提高DHP提取量的同时显著降低DHP中HMW比例,进而导致多糖肠道黏膜免疫调节活性的下降。     

霍山石斛中不同多糖组分的保肝活性

采用热水浸提和DEAE-纤维素阴离子交换法从霍山石斛中分离出4 种多糖组分（DHP1、DHP2、DHP3和DHP4）,比较了4 种多糖组分对四氯化碳（CCl4）肝毒性的保护作用。结果表明：口服DHP1显著降低了CCl4诱导的小鼠血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活性的升高,削弱了肝组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）的表达,同时恢复了肝组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）的活性。因此,DHP1可能是霍山石斛中一种潜在的保肝多糖成分。     

霍山石斛多糖的闪式提取工艺优化及降血糖作用研究

目的 优化霍山石斛多糖的闪式提取工艺,并对其降血糖作用进行研究。方法 采用单因素试验和响应面试验优化霍山石斛多糖的提取工艺,并通过测定空腹血糖、血清胰岛素和糖化血清蛋白水平研究其降血糖功能。结果 霍山石斛多糖的最优提取工艺为料液比1:28 (g:mL),提取电压132 V,提取时间95 s,提取次数4次,在此条件下霍山石斛多糖提取率为(24.14±0.52)%。通过动物试验发现,霍山石斛多糖能极显著降低小鼠血糖值和糖化血清蛋白水平(P<0.01),提高小鼠血清胰岛素含量(P<0.01)。结论 霍山石斛多糖具有较好的降血糖功效。     

响应面法优化霍山石斛多糖超微低温萃取工艺

为优化霍山石斛多糖的提取工艺,采用响应面法分析了超微低温萃取工艺中的超微研磨细度、内循环时间、料液比对多糖得率的影响,并推测和验证最佳工艺条件.结果 显示,超微低温萃取的最佳工艺参数为超微研磨细度50 μm、内循环时间5s、料液比1∶30 (g/mL);此条件下的霍山石斛多糖提取率为64.04％.该方法优化了超微低温萃...     

超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖的研究

为了获得较高的多糖提取率,采用超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖;研究了料液比、纤维素酶用量、酶解温度、酶解时间、超声波功率和超声时间等因素对多糖提取的影响,同时通过正交实验对其提取条件进行了优化.结果表明,最佳提取工艺条件为:料液比1:40(g/mL)、纤维素酶500U/g、酶解温度40℃,酶解时间3h,超声波功率为300W,超声时间6min,此时的多糖提取量达到0.283g/g.     

超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖的研究

为了获得较高的多糖提取率,采用超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖;研究了料液比、纤维素酶用量、酶解温度、酶解时间、超声波功率和超声时间等因素对多糖提取的影响,同时通过正交实验对其提取条件进行了优化。结果表明,最佳提取工艺条件为:料液比1∶40(g/mL)、纤维素酶500U/g、酶解温度40℃,酶解时间3h,超声波功率为300W,超声时间6min,此时的多糖提取量达到0.283g/g。      

霍山石斛多糖理化性质与生物活性的年动态变化研究

为分析霍山石斛多糖理化性质与生物活性的年动态变化规律来确定霍山石斛的适宜采收期,本文利用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、红外光谱、乌氏黏度计、分光光度法等方法分析霍山石斛多糖的理化性质,并通过体外细胞实验检测了霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性和抗食管癌活性。结果表明,霍山石斛多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成的两组分子量不同的组分构成,多糖含量和高分子量组分的分子量在全年呈现降-升-降-升的变化,多糖黏度、乙酰基含量和单糖摩尔比呈现降-升-降的变化,低分子量组分则在5~9月期间消失。霍山石斛多糖具有一定的肠黏膜免疫调节活性和抗食管癌活性,其免疫调节活性在9月至翌年4月优于5~8月,而多糖抑制食管癌细胞生长的作用在秋冬季好于春夏季。由霍山石斛多糖理化性质与生物活性变化之间的关系,可初步确定霍山石斛的最佳采收期为秋冬季。     

霍山石斛多糖对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用

该研究探讨了霍山石斛多糖（cDHP）对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。用Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤小鼠模型,观测cDHP对小鼠生长情况、肿瘤体积、抑瘤率和脾淋巴细胞增殖能力的影响,并测定肿瘤细胞凋亡比例、脾脏免疫细胞（T细胞、Treg细胞、B细胞、树突状细胞和巨噬细胞）比例及血清细胞因子（CEA、IL-1β、IL-10、IL-2、TNF-α、VEGF和TGF-β）含量的变化。cDHP高369.00 mg/(kg•d)、中184.50 mg/(kg•d)、低92.25 mg/(kg•d)剂量组的抑瘤率分别为64.52%、50.47%、37.68%。cDHP的抗肿瘤作用表现在其能够提高荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡比例、改善荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力、调节荷瘤小鼠脾脏免疫细胞比例和血清细胞因子的平衡。cDHP可通过不同方式影响肿瘤生长,结果为霍山石斛的开发利用提供了实验依据。     

霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用

研究霍山石斛多糖对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,探讨多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因表达之间的相关性。胃癌细胞SGC-7901生长的MTT检测表明,霍山石斛总多糖(DHP)、阴离子交换色谱水洗组分(DHP-1)及0.05 mol/L盐洗组分(DHP-2)能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,并呈时间和剂量依赖性,其中以DHP-2效果最好。光学及激光共聚焦显微镜观察发现,DHP-2处理过的胃癌细胞形态固缩,凋亡显著。荧光定量RT-PCR技术检测表明,DHP-2不仅能明显下调原癌基因c-myc的表达,其表达仅为对照的42.34%,而且能显著提高抑癌基因野生型p53的表达,其表达比对照高1.04倍。结果表明:霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用与其组分、浓度及作用时间相关,其可能的作用机制是多糖通过下调c-myc基因和上调p53基因的表达来发挥抑制效果。     

稀土元素铈对霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长和多糖合成的影响

研究外源稀土元素铈对霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长、多糖合成、培养基中碳氮磷源消耗的动力学特性,以及对胞内糖、胞内氮、胞内磷转化的影响。结果表明：适量的铈能够改善霍山石斛类原球茎对碳氮源的利用,提高胞内糖、胞内氮、胞内磷的含量,从而促进细胞生长和多糖合成。以添加10μmol/L 的铈效果最好,细胞的生长速率从0.501g/(L·d)提高到0.649g/(L·d);培养至24d 时,每升培养液中类原球茎干质量为25.45g,比对照提高了20.2%,培养至18d 多糖总质量浓度达到峰值3.35g/L,是对照的1.53 倍。     

霍山石斛多酚超声波辅助提取工艺优化及其抗氧化活性研究

为确定超声波辅助纤维素酶法提取霍山石斛多酚的最佳工艺,采用响应曲面设计方法对多酚提取工艺进行优化,同时分析霍山石斛多酚的抗氧化活性。结果表明:多酚提取的最佳工艺条件为超声功率180 W,超声时间20 min,酶质量浓度2.1 mg/m L,酶解温度57℃,酶解时间71 min,酶解p H 5,在该条件下,多酚平均得率为13.74 mg/g。体外抗氧化活性试验表明,霍山石斛多酚具有较强的抗氧化活性,其DPPH和ABTS自由基清除能力与多酚浓度呈现明显的量效关系。多酚对DPPH和ABTS自由基的半抑制浓度分别为0.057 mg/m L和0.027 mg/m L。     

霍山石斛花的热风干燥特性、品质及其护色应用研究

为研究热风干燥温度和护色剂的应用对霍山石斛花干制品品质特性的影响,通过改变热风干燥温度(50、60、70、80℃),对比不同温度下霍山石斛花的干燥速率、失水特性、主要生物活性成分(多糖、总酚、黄酮)含量,并探讨不同护色剂的应用效果,最终确定干燥工艺。结果显示:50℃的样品干燥时间最长,70℃的样品总酚含量、80℃的样品黄酮类化合物含量最低。综合考虑干燥效率和生物活性成分含量,最终选择60℃作为霍山石斛花的干燥温度。此条件下,干燥时间为4. 5 h,干制品的黄酮、多糖和总酚含量分别为(10. 94±0. 10)、(16. 80±2. 69)和(28. 06±0. 14) mg/g。进一步采用0. 5 g/L异抗坏血酸钠在干燥前作护色处理可提升霍山石斛花干制品色泽品质。利用0. 5 g/L异抗坏血酸钠对霍山石斛花护色预处理,在60℃条件下热风干燥4. 5 h,所得干制品的外观色泽良好,生物活性成分最佳。     

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。     

霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤活性的比较研究

目的：比较霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的活性。方法：制备霍山石斛冷冻干燥物、水提物、水提醇溶物、水提醇沉物、水提粗多糖5 种提取物;以连续灌胃30%乙醇的小鼠为亚急性酒精性肝损伤模型,以霍山石斛不同提取物连续灌胃30 d后,称量小鼠体质量及肝质量,测定血清中谷丙转氨酶（alanineaminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,以及总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）含量,同时测定肝脏中乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase,ADH）、乙醛脱氢酶（acetaldehyde dehydrogenase,ALDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平,并检查肝组织损伤病理变化。结果：霍山石斛水提醇溶物抗亚急性酒精性肝损伤的活性最差,醇沉物、水提物、冷冻干燥物具有一定的肝损伤保护活性,水提粗多糖各个剂量组均可显著改善肝脏组织损伤和脂肪变性（P＜0.05）,降低血清ALT、AST、ALP活性和LDL-C、TC、TG水平,提高血清HDL-C含量,增强肝组织ADH、ALDH、SOD、GSH-Px活性,减少肝组织GSH损耗并抑制肝组织MDA含量增加。结论：多糖是霍山石斛抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的功能因子。