小分子化合物非竞争免疫检测方法研究概述

农兽药、非法添加剂及其他有毒有害化学污染物在食品和环境中的残留引起人们越来越多的关注。这些残留物多为小分子化合物,对其进行免疫测定因受限于分子量和抗原表位数量,多用竞争法,通常不能像检测大分子抗原一样采用夹心式的非竞争法,这就制约了其检测的灵敏度、稳定性及工作范围等。但非竞争免疫分析法也并非完全不适用于小分子化合物,这需要方法学上的改进或创新。作者从检测方法原理、体系构成及应用现状等方面综述了近几十年来有关小分子化合物非竞争免疫分析方法的研究成果,以期为相关研究者提供借鉴和参考。     

小分子物质酶联免疫分析方法的研究进展

自免疫分析技术问世以来,出现了多种快速检测产品如ELISA试剂盒、免疫层析试纸条,但是目前的快速检测试剂盒普遍存在检测灵敏度低、线性范围窄、易出现假阳性等问题。为解决这些问题,科研工作者发现小分子物质在检测中显示出许多特点,而这些特点正是研究开发酶联免疫检测技术的关键,小分子物质的快速检测已占据越来越重要地位。本文归纳国内外小分子物质酶联免疫分析技术研究成果,总结小分子物质酶联免疫分析方法的内容及特点,介绍小分子物质酶联免疫分析方法中抗原制备特点,分析小分子物质检测中抗体种类及特性,重点比较酶联免疫分析方法中直接和间接竞争法,并分析非竞争法在小分子物质检测中优势,旨在为今后免疫学快速检测技术的研究与开发提供帮助。     

小分子化合物开放夹心免疫分析研究进展

基于抗原-抗体识别的免疫分析技术在小分子监测领域占有重要地位,已成功应用于生理活性物质、化学有害物、农兽药等的快速检测,在临床诊断、环境、食品以及卫生领域发挥重要作用。由于缺乏结合位点,小分子化合物的分析大多采用竞争模式,与传统的三明治夹心法相比,稳定性和灵敏度往往都难以满足实际检测需求。近几年来,科学家开始尝试建立针对小分子化合物的非竞争模式免疫分析方法,比如基于抗独特型抗体、基于抗体可变区片段、基于抗异型抗体及抗免疫复合物多肽。其中基于抗体重链和轻链结合的开放夹心免疫分析由于具有只需要单个抗体、快速非竞争的均相检测小分子等优点,备受研究者关注。本文主要综述基于抗体可变区片段的小分子非竞争免疫分析方法,重点介绍了建立小分子非竞争检测模式所需要抗体可变区的获得及筛选途径、几种形式信号放大载体的研究现状,最后对其在小分子物质检测领域的应用前景进行了评述,期望能为本领域研究提供借鉴。     

单域抗体在有害小分子检测领域的研究进展

单域抗体(single-domain antibody, sdAb)是指由抗体或新抗原受体单一可变结构域构成的具有抗原结合活性的基因工程抗体。近年来, 药物、毒素、污染物等小分子物质残留引发的食品安全、环境安全事件层出不穷, 引发广泛的社会关注。单域抗体的研究为食品中的小分子有害化合物免疫分析开辟了一个崭新而有前景的领域。sdAb与传统的兔多克隆抗体、鼠单克隆抗体相比, 具有分子量小、稳定性强、易表达、易体外进化等诸多优点。因此, 国内外学者对sdAb在生物医学和靶标检测等领域的研究不断深入, 其应用也逐渐增多。本文主要综述了小分子(分子量＜1000 Da)靶标sdAb的结构特征、主要特性、识别机制以及抗体开发, 分析了sdAb在食品小分子有害化合物快速检测领域的应用潜力, 以期为克服传统抗体改造困难、稳定性差等问题提供新的抗体制备策略和参考。     

直接竞争酶联免疫分析方法检测猪肉中的沙丁胺醇

建立了一种用于检测沙丁胺醇的直接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,方法灵敏度(IC50)为0.80μg/L,检测限(IC15)为0.06μg/L,检测的线性范围0.06～20.00μg/L。与克伦特罗的交叉反应率为100%,与特布他林的交叉反应率为10.5%,与其他结构类似物并无明显的交叉反应,因此可以采用本实验建立的直接竞争酶联免疫方法同时测定食品中的沙丁胺醇和克伦特罗。本实验的样品处理方法简便,猪肉样品中的检测限为0.6μg/kg,添加三个浓度的样品,其添加回收率均在85%～100%之间,RSD值小于5.51%。      

直接竞争酶联免疫分析方法检测猪肉中的沙丁胺醇

建立了一种用于检测沙丁胺醇的直接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,方法灵敏度(IC50)为0.80μg/L,检测限(IC15)为0.06μg/L,检测的线性范围0.06～20.00μg/L。与克伦特罗的交叉反应率为100%,与特布他林的交叉反应率为10.5%,与其他结构类似物并无明显的交叉反应,因此可以采用本实验建立的直接竞争酶联免疫方法同时测定食品中的沙丁胺醇和克伦特罗。本实验的样品处理方法简便,猪肉样品中的检测限为0.6μg/kg,添加三个浓度的样品,其添加回收率均在85%～100%之间,RSD值小于5.51%。     

小分子免疫分析技术及其研究进展

小分子物质抗原表位单一,不能同时结合两个抗体,限制了夹心法在小分子残留检测中的应用,因此小分子免疫学分析方法主要采用竞争模式。近年来,随着生物合成全抗原、纳米抗体、抗独特型抗体等生物识别元件的成功应用,开拓了小分子免疫分析技术的新领域。本文从生物识别元件的角度综述了近几年小分子免疫学检测方法的研究进展,并对小分子免疫分析的发展趋势进行展望。     

微囊藻毒素纳米抗体的制备及其间接竞争酶联免疫分析方法的建立

微囊藻毒素(MC)作为肝毒性最强的藻毒素之一,在受污染的水体中时常检出,严重威胁着人畜饮水安全,加强其检测十分重要。在前期研究中,已成功构建抗MC-LR噬菌体展示纳米抗体文库。本研究以MC-LR-OVA作为包被原,经4轮固相淘筛,获得纳米抗体M110。该抗体可识别MC-LR,且具有良好的稳定性。基于纳米抗体M110建立了检测MC-LR的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),检测的半抑制浓度IC50值为3.55 ng/mL,检测限0.65 ng/mL,线性范围1.28~9.88 ng/mL。与UPLC-MS/MS方法检测结果相关系数达0.998,提示本方法可用于水体中微囊藻毒素残留的检测。     

有机磷农药多残留免疫分析方法研究进展

本文简单介绍了有机磷农药的结构、毒性以及残留状况,总结了免疫分析方法在有机磷农药残留检测中的应用情况.着重讨论了多残留免疫检测技术的发展及应用,并对未来免疫检测技术的发展进行了展望.     

免疫乳的研究进展

对免疫乳的概念、生物功能、免疫乳的制备及国内外免疫乳的发展及其研究进展作一综述,提出了免疫乳发展过程中存在的问题。     

磁珠载体-电化学免疫分析研究进展

磁珠不仅拥有巨大的比表面积和高效的分散能力,而且在其表面可以形成牢固的免疫复合物;同时利用磁珠的超顺磁性可以快速的将其分离,样品前处理简单,不需要预浓缩、净化等复杂工序就可以实现对目标物的快速检测。此外,电化学分析技术具有超高的灵敏度,因此将磁珠与电化学免疫分析技术相结合,利用两者的优点则给人们提供了一种新的检测思路。目前,该领域研究活跃,并取得了重要研究进展,开发出了灵敏度高、检测速度快、简便易用的微型电化学免疫检测系统,可以用于食品检测、环境评估和临床诊断等领域。本文介绍了以磁珠为固相载体的电化学免疫分析技术的最新研究进展,特别是从磁电极免疫分析、基于旋转圆盘电极的免疫分析、酶标记免疫磁珠分析和纳米粒子标记免疫磁珠分析四个方面进行具体论述,并对该领域的发展前景做了展望。     

腈菌唑单克隆抗体制备与胶体金检测方法的建立

目的 制备高灵敏度腈菌唑单克隆抗体,建立芹菜样本中腈菌唑胶体金快速检测方法。方法 对腈菌唑化学结构进行改造,合成两种半抗原,与载体蛋白偶联,免疫小鼠,制备单克隆抗体。结合胶体金技术,优化抗体标记参数等,建立胶体金的检测方法,并对检测性能进行评价。结果 由所制备的单克隆抗体开发的胶体金试纸条半数抑制浓度为2.10μg/L,线性范围为0.62～7.25μg/L,与其他三唑类杀菌剂和芹菜中常见杀虫剂的交叉反应率均小于5%;可定性检测芹菜样本中腈菌唑是否超过GB2763—2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》限量,检出限为50μg/kg;通过实际阳性样本测试与气相色谱-串联质谱法比较,符合性较好,结果可靠。结论 基于两种半抗原免疫制备的抗体,可建立腈菌唑胶体金检测方法,检出限满足国家标准限量要求,可应用于现场的快速筛查。     

Preparation of high affinity antibody for ribavirin with new haptens and residue analysis in chicken muscle,eggs and duck muscle

In this work, high affinity polyclonal antibodies for ribavirin (RBV) from new haptens were prepared and were used to analyse RBV residues in chicken muscle, eggs and duck muscle. The new haptens were synthesised with different spacers, and the best antibody was obtained with an IC₅₀ value as low as 0.61 ng/mL in indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The cross-reactivities with another five antiviral drugs including amantadine, rimantadine, moroxydine, zanamivir and oseltamivir were less than 0.1%, which indicated the good specificity of the antibody. An ELISA was developed based on the antibody and applied to detect RBV in multi-food matrices. The sample preparation prior to detection only needed simple dilution after trichloroacetic acid extraction. The limits of detection were 1.07, 1.18 and 1.03 μg/kg in chicken muscle, eggs and duck muscle, respectively. Recoveries ranged from 89.0% to 112.7% with coefficients of variation below 13.0%. Ten blind samples of chicken muscle were analysed simultaneously by ELISA and liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and a good correlation between the methods was observed. The results indicated that the high affinity antibody could be applied for the simple and fast detection of RBV in multi-food matrices.     

拟除虫菊酯及其代谢物免疫检测的研究进展

作者主要介绍了检测拟除虫菊酯类农药及其代谢物的酶联免疫法和荧光免疫法。通过应用新型纳米材料(如磁纳米粒子,镧系发光纳米材料)以及噬菌体展示技术提高免疫检测的灵敏度,并对拟除虫菊酯类农药及其代谢物免疫检测的发展方向进行了展望。     

基于不同半抗原的呋喃唑酮代谢物免疫检测方法的建立与比较

为实现呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮（3-amino-2-oxazolidinone,AOZ）的快速定量检测,制备AOZ- 牛血清蛋白单克隆抗体,建立2 种分别基于抗3-（4-羧基苯亚甲基）-氨基-2-恶唑烷酮（CPAOZ）、抗AOZ的单克 隆抗体酶联免疫检测试剂盒。CPAOZ检测试剂盒在1.0～100.0 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为14.6 ng/mL, 检测限为6.56 ng/mL,回收率为97.6%～101.3%;AOZ检测试剂盒在0.5～12.5 ng/mL范围具有良好线性,IC50值为 3.9 ng/mL,检测限为0.45 ng/mL,回收率为94.1%～97.4%。这2 种检测试剂盒对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢 物均不存在交叉反应。从经济、方便、快速、灵敏等因素来考虑,后者更具有发展前景。