植物活性成分对细胞存活率的影响及其测定方法的比较研究

选用植物活性物质单体白藜芦醇和绿原酸作用于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,采用MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法和MTT法测定细胞存活率,并将MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法这4种方法与传统的MTT法进行比较分析,从中选出最佳的检测方法;通过IC50值比较白藜芦醇和绿原酸毒性大小。结果显示:CCK-8法所得结果稳定,且与MTT法所测得的IC50值最接近,为最佳选择;WST-1法的实验可重复性较差,结果偏小;XTT法是4种方法中最不稳定的,作用时间、检测波长最难确定,且实验重复性差。CCK-8法、MTS法、WST-1法、XTT法和MTT法测定所得白藜芦醇的IC50值分别是116.86、124.68、64.90、162.86、86.30μmol/L;绿原酸的IC50值分别为2808.60、1119.96、1029.72、1325.43、2852.63μmol/L,同种方法下绿原酸的IC50值均高于白藜芦醇的IC50值。结论是测定植物活性成分对细胞存活率影响的方法以CCK-8为最好。白藜芦醇对CHO细胞的毒性比绿原酸大。     

一测多评法测定线叶金雀花及其制品中3种黄酮类成分的含量

目的:建立同时测定线叶金雀花及其制品中异荭草苷、荭草苷和阿司巴汀3种黄酮类成分含量的一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS).方法:采用高效液相色谱法,以乙腈-醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,以异荭草苷为内参物,建立其与荭...     

木犀草素-Zn（Ⅱ）配位温敏分子印迹聚合物的制备及其性能

以木犀草素-Zn（Ⅱ）配合物为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,N-异丙基丙烯酰胺为温敏单体,N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂制备木犀草素-Zn（Ⅱ）配位温敏分子印迹聚合物（thermo-sensitive molecularly imprinted polymers,TMIPs）,分离箬叶黄酮碳苷。结果表明,TMIPs最佳制备工艺为模板分子、功能单体、温敏单体、交联剂摩尔比1∶4∶16∶30,其低临界溶解温度约为32℃,吸附性能符合Langmuir吸附模型和准一级动力学模型,TMIPs对木犀草素吸附量为36.06μmol/g,印迹因子为3.18,相对于芹菜素和芦丁,对木犀草素选择系数分别达到1.83和2.18,对温度响应灵敏,易于控制解吸。TMIPs用于分离箬叶黄酮碳苷,对牡荆苷、异牡荆苷、荭草苷、异荭草苷吸附量分别为32.99、27.73、35.16、36.05μmol/g。     

荭草素和异荭草素抗氧化活性及对肝癌细胞增殖的影响

采用荭草素和异荭草素标准品,通过测定两者对DPPH·、ABTS+·、H2O2、·OH自由基的清除率,脂质过氧化,Cu2+/H2O2诱导的牛血清蛋白-BSA-和DNA氧化损伤及BSA蛋白羰基化的抑制作用来评价二者的抗氧化活性,另外用MTT法评价了二者对人肝癌-HepG2-细胞生长的影响. 结果表明,荭草素和异荭草素均可清除自由基,抑制脂质过氧化、BSA和DNA氧化损伤和BSA羰基化,且一定浓度范围内异荭草素的抗氧化活性强于荭草素;另外荭草素和异荭草素可显著抑制HepG2细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,且异荭草素的抑制率高于荭草素,说明异荭草素是优于荭草素的有抗癌功效的天然抗氧化剂.     

五倍子制备没食子酸丙酯的抗氧化活性研究

对天然植物五倍子浸提物没食子酸（GA）进行改性,得到没食子酸丙酯（PG）,并采用亚铁还原能力法（FRAP）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基法、2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基法对其抗氧化活性进行评价。结果显示,FRAP值由大到小排序为：PG（FRAP值0.506）＞TBHQ（FRAP值0.412）＞BHA（FRAP值0.409）＞BHT（FRAP值0.067）;DPPH自由基清除能力由强到弱的顺序为：PG（IC50值4.2 μmol/L）＞BHT（IC50值53 μmol/L）＞TBHQ（IC50值87 μmol/L）＞BHA（IC50值816 μmol/L）;ABTS自由基清除能力由强到弱的顺序为：PG（IC50值 4.2 μmol/L）＞BHA（IC50值44 μmol/L）＞BHAT（IC50值45 μmol/L）＞TBHQ（IC50为50 μmol/L）。结果表明,PG的抗氧化活性均强于其他三种抗氧化剂,可作为新兴食品抗氧化剂应用。     

金银花叶有效成分的抗氧化活性研究

建立高效液相转换波长法,测定金银花叶粗分物中绿原酸、木犀草素和木犀草苷的含量,绿原酸占水相原液的含量为2.05%,木犀草素、木犀草素在金银花叶粗提物EA相中的含量分别为1.12%、0.57%。以抗坏血酸(Vc)为阳性对照的,用DPPH?法、FRAP法、ORAC法三种体外抗氧化方法来测定和评价金银花叶有效成分的抗氧化作用。结果表明：金银花叶粗提物、粗分物、绿原酸.、木犀草素及木犀草苷均具有良好的抗氧化性,其中木犀草素的抗氧化能力最强,其IC50值为0.01764 mg/mL,还原能力1751.8±13.9 mmol/L,ORAC值23817.44 μmol Trolox/g。其次为粗分30%乙醇洗脱相,其IC50值为0.02548 mg/mL,还原能力933.8±11.6 mmol/L,ORAC值10557.97 μmol Trolox/g,且各物质随着抗氧化剂浓度及纯度的增加,抗氧化性逐渐增强。因此对金银花叶有效成分在抗氧化方面的应用具有广阔的开发利用前景,可作为新型的高效无毒的抗氧化剂。     

黄曲霉毒素B1与杂色曲霉素对HepG2细胞的联合毒性

研究了黄曲霉毒素B1(AFB1)和杂色曲霉素(ST)对人肝癌细胞Hep G2的细胞毒性及其联合毒性。体外培养人肝癌细胞Hep G2,用不同浓度梯度的AFB1(0.1、1、5、10μmol/L)和ST(0.5、2.5、5、7μmol/L)单独和联合作用于Hep G2细胞24 h或48 h,分别测量细胞活性、ATP含量、DNA受损程度、线粒体膜电位,以及活性氧含量的变化,通过统计分析得到两种毒素对Hep G2细胞的联合毒性作用。结果显示,AFB1和ST对Hep G2细胞的IC50分别为16.989μmol/L和7.258μmol/L,细胞增殖力、ATP、DNA、线粒体膜电位、活性氧等指标的理论加和值与实际值无显著性差异(P0.05)。同时,这两种毒素及其混合物对Hep G2细胞的作用终点均可分为3类:第一类为细胞增殖力的降低;第二类包括ATP含量、DNA含量变化;第三类为活性氧含量变化和线粒体膜通透性变化。表明AFB1和ST对Hep G2细胞的联合毒性作用为加和作用。     

水提紫甘薯色素废渣中花色苷及总黄酮生物活性的研究

本研究对水提紫甘薯色素剩余废渣中的花色苷和总黄酮进行生物活性研究和评价。采用滤纸片扩散法研究两种组分对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用;选取DPPH·体系评价抗氧化活性;采用MTT法检测两种组分对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用。结果显示:水提紫甘薯色素废渣中花色苷和总黄酮均具有明显抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生长、清除DPPH自由基及抵抗人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用。花色苷和总黄酮对两种供试菌的最小抑菌浓度分别为400μg/m L和4.0 mg/m L;花色苷对DPPH自由基的半数清除浓度(IC50)为42.32μg/m L,其对照Vc标准品IC50为44.65μg/m L;总黄酮对DPPH自由基的IC50为0.023μg/m L,其对照Vc标准品IC50为0.011μg/m L;花色苷作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h的IC50值分别为202.12、58.01、0.232μg/m L;总黄酮作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h的IC50值分别为0.42、12.05、12.11 mg/m L;本研究为水提紫甘薯色素废渣的综合利用提供了科学依据。     

北京早园竹叶不同提取组分对CHO细胞Akt信号通路的影响

通过比较北京早园竹叶提取物中的主要活性组分黄酮苷类、酚酸类及总提取物3个组分对中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的增殖、凋亡及Akt信号通路作用差别,考察竹叶提取物对正常细胞可能产生有害作用的活性组分。采用MTT法检测细胞增殖作用、Annexin V-FITC/PI双染流式法测细胞凋亡、In Cell Analyzer 1000活细胞图像分析系统测定Akt信号通路的活化。结果显示：1)50～400μg/mL范围内3种组分对细胞存活率的影响无明显变化,当质量浓度≥800μg/mL时细胞增殖率明显下降(P＜0.05),细胞毒性作用明显,且以酚酸类组分作用最强;2)不同组分的竹叶提取物在200～800μg/mL范围内与空白组比较均可降低细胞凋亡率(P＜0.05),但总提取物和黄酮苷类在质量浓度为1600μg/mL时本身可诱导CHO细胞的凋亡增加,差异显著(P＜0.05),且以黄酮苷类诱导的细胞凋亡率最高,达14.21%;3)与对照组比较,黄酮苷类在100～800μg/mL剂量条件下,对Akt的活性无明显影响,总提取物在400、800μg/mL时Akt的激活率明显增加(P＜0.01),而酚酸类在100～800μg/mL范围内,随剂量增加,激活率增高,呈明显的剂量-反应关系(r=0.996,P＜0.01)。由此可见3种不同提取物组分对CHO细胞的作用是有差别的,其中酚酸类可能是产生有害作用的主要组分。     

蓝莓花色苷对过氧化氢所致血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的:观察蓝莓花色苷对过氧化氢（H2O2）所致血管内皮细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:人静脉血管内皮细胞EVC-304经不同浓度蓝莓花色苷（10、20、40μg·m L-1）预培养24 h后,加入100μmol/L H2O2再进行培养12 h。MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测EVC-304细胞凋亡的变化,Western blot法检测细胞内激活型Caspase-3、细胞色素C（Cyto c）、Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果:同正常组相比,H2O2损伤组细胞存活率显著降低（p<0.01）,细胞凋亡率显著升高（p<0.01）,激活型Caspase-3、细胞质中Cyto c表达水平,Bax/Bcl-2比值升高（p<0.01）。与H2O2损伤组相比,20μg·m L-1和40μg·m L-1蓝莓花色苷处理组细胞存活率明显升高（p<0.01）,凋亡细胞率明显下降（p<0.01）,细胞内激活型Caspase-3,Cyto c表达,Bax/Bcl-2比值下降（p<0.01）。结论:蓝莓花色苷对H2O2所致血管内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能相关。      

高效液相色谱法测定粽子中的黄酮类化合物及其迁移规律

建立天然包装材料箬叶及粽米中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸5 种黄酮类化合物的高效液相色谱的分析方法。通过测定一次蒸煮、二次蒸煮、不同保存条件等因素对箬叶及粽米中黄酮类化合物含量变化的影响,阐明了不同条件下箬叶中黄酮类化合物在粽子中的迁移规律。结果表明：一次蒸煮后,荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸5 种黄酮化合物从箬叶迁移到粽米的迁移率为7.41%～45.18%;二次蒸煮时,在120 min内箬叶中5 种黄酮类化合物的迁移率为18.07%～65.94%,特别是在前30 min中,箬叶中黄酮类化合物降低明显,分别占120 min总减少量的51.61%～72.48%,并且二次蒸煮的迁移率大于一次蒸煮。在30 d的保存时间内,箬叶中黄酮类化合物在前15 d减少明显,占总减少量的68.60%～85.50%（除异牡荆苷为0外）;第15天后迁出缓慢;30 d内总迁移率分别为25.90%～64.84%（除异牡荆苷为0外）。随着二次蒸煮时间与保存时间的变化,荭草苷与异荭草苷较迁移缓慢。新鲜保存的方式最有利于异牡荆苷在粽子中迁移,速冻保存最有利于荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、对香豆酸的迁移。异牡荆苷在真空保存和速冻保存时短时间内不发生迁移。     

马铃薯皮中绿原酸提取工艺优化

以马铃薯皮作为原料,对其所含有的抗氧化物质绿原酸进行提取工艺条件优化。采用乙醇回流法,以绿原酸得率为指标,考察料液比、乙醇体积分数、提取温度、回流次数对提取工艺条件的影响,采取正交试验确定最佳提取工艺条件。结果表明,马铃薯皮中绿原酸粗提的最佳工艺条件为料液比1∶10（g/mL）、乙醇体积分数85%、提取温度97 ℃、回流3 次,在最佳工艺条件下,绿原酸的得率为2.229 mg/g。体外抗氧化活性实验表明,绿原酸具有良好的抗氧化性。     

15 种柑橘果实主要酚类物质的体外抗氧化活性比较

为了明确柑橘果实主要酚类物质单体的抗氧化活性差异,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）法、2,2’-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azino-bis（3-ethylbenzthiozoline-6）-sulphonic acid,ABTS）法、铁离子还原（ferric reducing/antioxidant power,FRAP）法3 种离线法,以及两种在线高效液相色谱-DPPH/ABTS（high performance liquid chromatography-DPPH/ABTS,HPLC-DPPH/ABTS）柱后衍生系统联用技术分别对15 种柑橘果实主要酚类物质单体的抗氧化活性进行测定和比较分析。结果表明：抗氧化活性综合（antioxidant potency composite,APC）指数可有效反应各单体的抗氧化活性,柑橘果实15 种主要酚类物质抗氧化活性明显不同,4 种酚酸的抗氧化活性最强,依次为：没食子酸（92.32%）＞咖啡酸（85.29%）＞绿原酸（69.75%）＞阿魏酸（50.97%）。圣草酚（39.38%）、圣草次苷（39.36%）和芦丁（27.42%）的抗氧化活性中等,橙皮素、柚皮素、地奥司明、橙皮苷、川陈皮素、甜橙黄酮、柚皮苷和橘皮素的抗氧化活性较小（＜5%）。酚羟基的糖基化或甲基化会都降低柑橘酚类物质的自由基清除能力,酚羟基数目越多,抗氧化活性越强。     

多酚化合物体外模拟消化的稳定性分析

选取7 种不同种类的酚类化合物,研究体外模拟胃肠道消化对其稳定性的影响。结果表明：不同酚类化合物在胃肠道消化过程中的稳定性不同。高效液相色谱分析结果显示,胃消化过程对酚酸类化合物的影响较小,其含量无显著变化,但类黄酮化合物在胃消化过程中稳定性较差,儿茶素含量下降了16.6%、表儿茶素含量下降了约6%。经模拟肠液处理后,除阿魏酸、对羟基苯甲酸外,其他酚类化合物含量均显著降低,此外,绿原酸在肠液消化过程中生成了新的物质。体外模拟胃肠液消化对混合标准品的作用结果有所不同,模拟胃液消化对混合标准品含量均无显著影响,模拟肠液消化后,仅表儿茶素、没食子酸含量分别降低为76.96%和50.30%,其他酚类化合物含量均无显著变化。     

栽培菊苣籽总黄酮的提取、成分鉴定及抗氧化活性成分的识别

通过响应面法确定超声-微波协同萃取栽培菊苣籽总黄酮的最佳条件为：液料比40∶1（mL/g）、乙醇体积分数71%、提取温度65 ℃、微波功率400 W、超声功率50 W、提取时间6 min。在此条件下,测得栽培菊苣籽中黄酮的含量为93.23 mg/g。通过动态纯化的方式确定AB-8大孔树脂纯化菊苣籽总黄酮的条件为：上样液pH 4、上样液和洗脱液流速2 BV/h、洗脱液乙醇体积分数70%。高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）分析结果显示,栽培菊苣籽总黄酮主要是由绿原酸和洋蓟素两种化合物构成。离线1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）-HPLC法显示,洋蓟素比绿原酸对DPPH自由基具有更强的抗氧化活性,二者对游离基的清除率分别为64.11%和61.65%。     

翻白草中7 种黄酮和有机酸的超声提取及含量测定

目的：建立高效液相色谱法分离测定翻白草中绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、槲皮素、柚皮素、山柰酚和芹菜素7 种成分的方法。方法：采用Phenomenex C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）分离7 种成分;流动相为甲醇和pH 3的乙酸溶液,梯度洗脱;流速1.0 mL/min,紫外检测波长350 nm,柱温40 ℃。结果：7 种成分在20 min内均达到基线分离,线性关系良好（r＞0.999 5）,平均回收率为84.61%～104.06%（相对标准偏差小于4.77%,n=3）。结论：翻白草中7 种活性成分的最佳提取条件为80%甲醇溶液、固液比1∶50（g/mL）、超声功率160 W、超声时间20 min。实际样品的测定结果表明,翻白草中7 种活性成分的含量为：绿原酸121.5 μg/g、咖啡酸60.5 μg/g、金丝桃苷127.2 μg/g、槲皮素108.6 μg/g、柚皮素294.0 μg/g、山柰酚61.1 μg/g和芹菜素114.0 μg/g。     

酶钝化处理对菊苣茎PPO活性和绿原酸含量的影响

通过水浴、蒸汽、微波3 种烫漂方式处理新鲜菊苣茎,钝化多酚氧化酶（PPO）,为提高干燥菊苣茎中绿原酸含量提供依据。烫漂处理后立即测定菊苣茎PPO相对活性,同时测定经烫漂处理后再经空气干燥茎中绿原酸含量,分析二者之间的相关性;测定不进行烫漂处理直接进行空气干燥的菊苣茎在干燥过程中PPO相对活性和绿原酸含量的变化。结果表明：空气干燥过程中,PPO始终保持一定的相对活性（≥20.02%）;水浴、蒸汽和微波烫漂处理可有效抑制PPO相对活性,且在以上3 种处理方式中绿原酸含量与PPO相对活性均呈显著负相关（P＜0.05）;4 种方法处理后风干茎中绿原酸的含量依次为：直接空气干燥＜水浴烫漂后干燥＜蒸汽烫漂后干燥＜微波烫漂后干燥。在实验条件下,微波（600 W）烫漂鲜茎样品4.67 min时,风干菊苣茎中绿原酸含量（8.11 mg/g）最高,与鲜茎相比只降低16.82%,是直接空气干燥茎中绿原酸含量的2.17 倍。     

HPLC-Q-TOF-MS-MS测定桑椹中多酚类物质

采用高效液相色谱与四极杆飞行时间串联质谱（high performance liquid chromatography of quadrupole time of flight-tandem mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS-MS）联用技术定性检测桑椹中多酚类物质,新鲜桑椹样品经体积分数80%丙酮溶液超声辅助提取15 min后,采用C18固相萃取小柱分离纯化,纯化后的样品进行质谱鉴定。采用HPLC-Q-TOF-MS-MS对多酚进行分析：初步鉴定了桑椹中存在14 种多酚类物质,主要以酚酸、花色苷和黄酮的形式存在。其中6 种酚酸：3-O-咖啡酰奎宁酸、4-O-咖啡酰奎宁酸、二聚绿原酸、二聚4-O-咖啡酰奎宁酸、绿原酸顺式异构体、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸。4 种花色苷：飞燕草-3-半乳糖苷、飞燕草-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-芸香糖苷;3 种黄酮：芦丁、鞣花酸己糖苷和槲皮素3-O-（6’-O-丙二酰）葡萄糖苷,1 种白藜芦醇衍生物。HPLC-Q-TOF-MS-MS可以鉴定出桑椹的多酚类物质。     

河南、山西连翘叶黄酮类和三萜酸类 化合物含量比较

为进一步对连翘叶中黄酮类化合物和三萜酸类主要活性成分含量进行分析,分别采用分光光度法和高效液相色谱法测定河南、山西连翘叶中总黄酮、芦丁、金丝桃苷、槲皮素、总三萜酸、齐墩果酸、熊果酸含量。结果表明：河南连翘叶中总黄酮、芦丁、金丝桃苷含量和槲皮素含量高于山西连翘叶中的含量,而山西连翘叶中总三萜酸、齐墩果酸含量和熊果酸含量高于河南连翘叶中的含量。连翘叶中黄酮类和三萜酸类的含量较高,结果为综合利用连翘叶资源提供参考依据。     

Effects of Germination on the Nutritional Properties,Phenolic Profiles,and Antioxidant Activities of Buckwheat

Germination is considered to be an effective process for improving the nutritional quality and functionality of cereals. In this study, changes of nutritional ingredients, antinutritional components, chemical composition, and antioxidant activities of buckwheat seeds over 72 h of germination were investigated, and the reasons for these changes are discussed. With the prolonged germination time, the contents of crude protein, reducing sugar, total phenolics, total flavonoids, and condensed tannins increased significantly, while the levels of crude fat, phytic acid, and the activity of trypsin inhibitor decreased. Phenolic compounds, such as rutin, vitexin, isovitexin, orientin, isoorientin, chlorogenic acid, trans‐3‐hydroxycinnamic acid, and p‐hydroxybenzoic acid increased significantly during the germination process, which may be due to the activation of phenylalanine ammonialyase. The improvement of flavonoids led to significant enhancement of the antioxidant activities of germinated buckwheat. Germinated buckwheat had better nutritional value and antioxidant activities than ungerminated buckwheat, and it represented an excellent natural source of flavonoids and phenolic compounds, especially rutin and C‐glycosylflavones. Therefore, germinated buckwheat could be used as a promising functional food for health promotion.